Pengaruh Zat Pengatur Tumbuh Terhadap Pertumbuhan Biomassa dan Kandungan β-Sitosterol Bangun-Bangun (Plectranthus amboinicus (Lour.) Spreng) Secara In Vitro

43

Lampiran 1. Data Pengamatan Persentase Terbentuknya Akar (%)
Perlakuan
Ulangan
Total
A1
A2
A3
A4
A5
A6
A7
100,00
0,00
- 100,00
0,00 200,00
1
0,00 100,00 100,00
- 0,00 100,00 300,00
2

100,00
0,00
0,00
0,00
0,00 100,00
3
100,00
0,00
- 100,00
4
0,00
0,00
0,00
5
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
6

100,00
0,00
0,00
0,00
- 100,00
7
100,00
- 0,00
- 100,00
8
100,00 100,00 100,00
0,00
- 100,00 400,00
9
100,00 100,00 100,00
0,00 0,00 100,00 400,00
10
0,00
0,00 100,00
0,00

0,00 0,00
- 100,00
11
- 100,00
- 0,00 100,00 200,00
12
- 100,00
- 0,00
- 100,00
13
0,00
- 0,00
0,00
14
0,00 100,00 100,00
0,00
0,00 0,00
0,00 200,00
15
Total

600,00 300,00 800,00 100,00 100,00 0,00 400,00 2300,00
Rataan
66,67
50,00
66,67
14.29
11,11 0,00
50,00 258,73

Universitas Sumatera Utara

44

Lampiran 2. Data Transformasi Persentase Terbentuknya Akar Arcsin √P
Perlakuan
Ulangan
Total
A1
A2
A3

A4
A5
A6
A7
90,00
0,41
- 90,00
0,41 180,81
1
0,41
90,00 90,00
0,41
90,00 270,81
2
90,00
0,41
- 0,41 0,41
0,41
91,62
3

90,00
0,41
90,41
4
0,41
- 0,41
0,81
5
0,41
- 0,41 0,41
0,41
1,62
6
90,00
0,41 0,41 0,41
91,22
7
90,00
0,41
90,41

8
90,00
90,00
90,00 0,41
90,00 360,41
9
90,00
90,00
90,00
- 0,41
0,41
90,00 360,81
10
0,41
0,41
90,00 0,41 0,41
0,41
92,03
11
90,00

0,41
90,00 180,41
12
90,00
0,41
90,41
13
0,41
0,41
0,81
14
0,41
90,00
90,00 0,41 0,41
0,41
0,41 182,03
15
Total
541,22 271,22 721,62 92,43 93,24
3,24 361,62 2084,59

Rataan
60,14
45,20
60,14 13,20 10,36
0,41
45,20 234,64
Lampiran 3. Data Sidik Ragam Persentase Terbentuknya Akar (%)
SK
db
JK
KT
F. hitung
F. 0.05
6,00
33081,85
5513,64
0,24
2,28
PERLAKUAN
52,00 1172249,29 22543,26

GALAT
58,00 1205331,14
TOTAL

Ket
TN

FK = 73652,47
KK = 7

Universitas Sumatera Utara

45

Lampiran 4. Data Pengamatan Persentase Terbentuknya Kalus (%)
Perlakuan
Ulangan
Total
A1
A2

A3
A4
A5
A6
A7
0,00
- 100,00
0,00
0,00 100,00
1
- 0,00
0,00 100,00
- 100,00 100,00 300,00
2
0,00 0,00
- 100,00
0,00
0,00 100,00
3
0,00
100,00
- 100,00
4
0,00
- 100,00
- 100,00
5
0,00
0,00 100,00
0,00 100,00
6
100,00
0,00 100,00
0,00
- 200,00
7
0,00
0,00
0,00
8
0,00 0,00
0,00 100,00
- 100,00 200,00
9
0,00 0,00 100,00
- 100,00 100,00
0,00 300,00
10
0,00 0,00
0,00 100,00 100,00 100,00
- 300,00
11
- 100,00
- 100,00
0,00 200,00
12
0,00
- 100,00
- 100,00
13
0,00
- 100,00
- 100,00
14
100,00 0,00
0,00 100,00 100,00 100,00
0.00 400,00
15
Total
200,00 0,00 300,00 600,00 600,00 700,00 200,00 2600,00
Rataan
22,22 0,00
25,00
85,71
66,67 87,50
25,00 312,10

Universitas Sumatera Utara

46

Lampiran 5. Data Transformasi Persentase Terbentuknya Kalus Arcsin √P
Perlakuan
Ulangan
A1
A2
A3
A4
A5
A6
A7
Total
0,41
- 90,00
0,41
0,41
91,22
1
0,41
0,41 90,00
- 90,00 90,00 270,81
2
0,41
0,41
- 90,00
0,41
0.41
91,62
3
0,41
90,00
90,41
4
0,41
- 90,00
90,41
5
0,41
0,41 90,00
0,41
91,22
6
90,00
0,41 90,00
0,41
- 180,81
7
0,41
0,41
0,81
8
0,41
0,41
0,41 90,00
- 90,00 181,22
9
0,41
0,41 90,00
- 90,00 90,00
0,41 271,22
10
0,41
0,41
0,41 90,00 90,00 90,00
- 271,22
11
- 90,00
- 90,00
0,41 180,41
12
0,41
- 90,00
90,41
13
0,41
- 90,00
90,41
14
90,00
0,41
0,41 90,00 90,00 90,00
0,41 361,22
15
Total
182,84
2,43 273,65 540,41 541,22 630,41 182,43 2353,37
Rataan
20,32
0,41 22,80 77,20 60,14 78,80 22,80 282,46
Lampiran 6. Data Sidik Ragam Persentase Terbentuknya Kalus (%)
SK
db
JK
KT
F. hitung
F. 0.05
6,00
44187,33
7364,56
0,30
2,28
PERLAKUAN
52,00 1282278,36 24659,20
GALAT
58,00 1326465,69
TOTAL

Ket
TN

FK = 93870,33
KK = 7

Universitas Sumatera Utara

47

Lampiran 7. Data Pengamatan Umur Muncul Akar (%)
Perlakuan
Ulangan
A1
A2
A3
A4
A5
A6
14,00
14,00
1
17,00
12,00
2
14,00
3
17,00
4
5
6
16,00
7
17,00
8
12,00
7,00
17,00
9
16,00 13,00
17,00
10
12,00
11
11,00
12
12,00
13
14
14,00
13,00
15
Total
89,00 34,00
116,00
12,00 14,00
Rataan
14,83 11,33
14,50
12,00 14,00
Lampiran 8. Data Sidik Ragam Umur Muncul Akar (%)
SK
db
JK
KT
F. hitung
6,00
2896,3
482,72
0,27
PERLAKUAN
52,00
28390
1774,4
GALAT
58,00
31286
TOTAL

A7
17,00
17,00
17,00
12,00
63,00
15,75

F. 0.05
2,74

Total
28,00
46,00
14,00
17,00
16,00
17,00
53,00
63,00
12,00
23,00
12,00
27,00
328,00
82,42

Ket
TN

FK = 1823,46
KK = 13

Universitas Sumatera Utara

48

Lampiran 9. Data Pengamatan Umur Muncul Kalus (%)
Perlakuan
Ulangan
A1
A2
A3
A4
A5
A6
11,00
1
6,00
20,00
2
21,00
3
17,00
4
17,00
5
13,00
6
11,00
17,00
7
8
14,00
9
13,00
13,00
17,00
10
17,00
13,00
11,00
11
6,00
23,00
12
11,00
13
17,00
14
13,00
17,00
17,00
17,00
15
Total
24,00
30,00
92,00
90,00 116,00
Rataan 12,00
10,00
15,33
15,00
16,57
Lampiran 10. Data Sidik Ragam Umur Muncul Kalus (%)
SK
db
JK
KT
F. hitung
6,00
3187,19
531,20
0,29
PERLAKUAN
52,00 34769,81
1829,99
GALAT
58,00 37957,00
TOTAL

A7
13,00
13,00
26,00
13,00

F. 0.05
2,63

Total
11,00
39,00
21,00
17,00
17,00
13,00
28,00
27,00
43,00
41,00
29,00
11,00
17,00
64,00
378,00
81,90

Ket
TN

FK = 2421,76
KK = 11

Universitas Sumatera Utara

49

Lampiran 11. Data Pengamatan Berat Segar Akar (gram)
Ulangan
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
Total
Rataan

A1
0,20
0,05
0,00
0,02
0,05
0,00
0,16
0,00
0,00
0,48
0,05

A2
0,00
0,00
0,19
0,12
0,00
0,08
0,39
0,06

A3
0,00
0,14
0,03
0,00
0,00
0,05
0,23
0,05
0,13
0,09
0,00
0,19
0,91
0,08

Perlakuan
A4
0,04
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,04
0,01

A5
0,07
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,07
0,01

A6
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00

A7
0,00
0,05
0,00
0,00
0,02
0,06
0,04
0,00
0,16
0,02

Total
0,27
0,19
0,05
0,03
0,00
0,00
0,02
0,05
0,26
0,56
0,05
0,16
0,09
0,00
0,26
2,04
0,23

Universitas Sumatera Utara

50

Lampiran 12. Data Transformasi Berat Segar Akar √x+ 0,5
Ulangan
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
Total
Rataan

A1
0,84
0,74
0,71
0,72
0,74
0,71
0,81
0,71
0,71
6,68
0,74

A2
0,71
0,71
0,83
0,79
0,71
0,76
4,50
0,75

A3
0,71
0,80
0,73
0,71
0,71
0,74
0,85
0,74
0,79
0,77
0,71
0,83
9,09
0,76

Perlakuan
A4
0,73
0,71
0,71
0,71
0,71
0,71
0,71
4,98
0,71

A5
0,75
0,71
0,71
0,71
0,71
0,71
0,71
0,71
0,71
6,41
0,71

A6
0,71
0,71
0,71
0,71
0,71
0,71
0,71
0,71
5,66
0,71

Lampiran 13. Data Sidik Ragam Berat Segar Akar (%)
SK
db
JK
KT
F. hitung
6,00
0,02
0,004
3,02
PERLAKUAN
52,00
0,07
0,001
GALAT
58,00
0,09
TOTAL

A7
0,71
0,74
0,71
0,71
0,72
0,75
0,73
0,71
5,77
0,72

F. 0.05
2,28

Total
3,00
3,69
3,57
1,44
1,41
2,83
2,84
1,45
3,71
4,61
4,28
2,23
1,48
1,41
5,12
43,08
5,10

Ket
*

FK = 31,45
KK = 0,08

Universitas Sumatera Utara

51

Lampiran 14. Data Pengamatan Berat Segar Kalus (gram)
Ulangan
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
Total
Rataan

A1
0,00
0,00
0,00
0,02
0,00
0,00
0,00
0,00
0,01
0,04
0,004

A2
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00

Perlakuan
A3
A4
A5
0,01
0,00
0,00 0,01
0,02 0,00
0,00
0,02
0,00
0,06
0,00 0,02
0,00 0,01 0,00
0,00 0,01
0,02
0,03
0,00 0,02 0,00
0,03
0,00
0,00
0,00 0,02 0,02
0,06 0,10 0,15
0,01 0,01 0,02

A6
0,02
0,00
0,02
0,05
0,03
0,00
0,02
0,03
0,15
0,02

A7
0,00
0,00
0,00
0,00
0,01
0,00
0,00
0,00
0,01
0,002

Total
0,01
0,02
0,02
0,02
0,06
0,02
0,04
0,00
0,03
0,07
0,06
0,06
0,00
0,02
0,08
0,50
0,06

Universitas Sumatera Utara

52

Lampiran 15. DataTransformasi Berat Segar Kalus √x+ 0,5
Ulangan
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
Total
Rataan

A1
0,71
0,71
0,71
0,72
0,71
0,71
0,71
0,71
0,72
6,39
0,7098

A2
0,71
0,71
0,71
0,71
0,71
0,71
4,24
0,71

A3
0,72
0,71
0,71
0,71
0,71
0,71
0,72
0,71
0,73
0,71
0,71
0,71
8,53
0,71

Perlakuan
A4
0,71
0,72
0,71
0,72
0,72
0,72
0,72
5,02
0,72

A5
0,71
0,71
0,72
0,75
0,72
0,71
0,73
0,71
0,72
6,47
0,72

A6
0,02
0,71
0,72
0,74
0,73
0,71
0,72
0,73
5,06
0,63

Lampiran 16. Data Sidik Ragam Berat Segar Kalus (%)
SK
DB
JK
KT
F. Hitung
6,00
0,044
0,0074
0,0013
PERLAKUAN
52,00
283,64
5,4545
GALAT
58,00
283,68
TOTAL

A7
0,71
0,71
0,71
0,71
0,72
0,71
0,71
0,71
5,67
0,7082

F. 0.05
2,28

Total
2,84
2,84
3,55
1,42
1,46
2,84
2,85
1,41
3,55
4,29
4,29
2,16
1,41
1,43
5,00
41,37
4,90

Ket
TN

FK = 29,0035
KK = 6

Universitas Sumatera Utara

53

Lampiran 17. Data Pengamatan Jumlah Akar
Ulangan
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
Total
Rataan

A1
26,00
2,00
0,00
15,00
17,00
0,00
40,00
0,00
0,00
100,00
11,11

A2
0,00
0,00
12,00
37,00
0,00
28,00
77,00
12,83

Perlakuan
A3
A4
0,00
2,00
15,00
0,00
25,00
0,00
0,00
0,00
0,00
40,00
0,00
51,00
32,00
0,00
62,00
15,00
0,00
40,00
0,00
267,00 15,00
22,25
2,14

A5
24,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
24,00
2,67

A6
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00

A7
0,00
5,00
0,00
0,00
25,00
20,00
22,00
0,00
72,00
9,00

Total
50,00
22,00
2,00
25,00
0,00
0,00
15,00
17,00
77,00
148,00
32,00
84,00
15,00
0,00
68,00
555,00
60,00

Universitas Sumatera Utara

54

Lampiran 18. Data Transformasi Jumlah Akar √x+ 0,5
Ulangan
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
Total
Rataan

A1
5,15
1,58
0,71
3,94
4,18
0,71
6,36
0,71
0,71
24,04
2,67

A2
0,71
0,71
3,54
6,12
0,71
5,34
17,12
2,85

Perlakuan
A3
A4
A5
0,71
4,95
1,58
3,94
0,71
0,71
5,05
0,71
0,71
0,71
0,71
0,71
0,71
0,71
0,71
6,36
0,71
7,18
0,71
5,70
0,71
0,71
7,91
3,94
0,71
6,36
0,71
0,71
46,91 8,18 10,61
3,91
1,17
1,18

Lampiran 19. Data Sidik Ragam Jumlah Akar
SK
db
JK
KT
6,00
74,64
12,44
PERLAKUAN
52,00
214,51
4,13
GALAT
58,00
289,15
TOTAL

A6
0,71
0,71
0,71
0,71
0,71
0,71
0,71
0,71
5,66
0,71

F. hitung
3,02

A7
0,71
2,35
0,71
0,71
5,05
4,53
4,74
0,71
19,49
2,44

F. 0.05
2,28

Total
11,51
9,28
4,41
5,76
1,41
2,83
6,06
4,89
16,36
25,61
9,24
13,36
4,64
1,41
15,24
132,01
14,92

Ket
*

FK = 295,35
KK = 2

Universitas Sumatera Utara

55

Lampiran 20. Komposisi Media Murashige dan Skoog (MS)

Bahan Kimia

Konsentrasi Media (ppm)

Makro Nutrien (Stok I)
NH4 NO3
KNO3
CaCl2.2H2O
MgSO4.7H2O
KH2PO4

1650,000
1900,000
440,000
370,000
170,000

Mikro Nutrien (Stok II)
MnSO4.H2O
ZnSO4.7H2O
H3BO3
KI
Na2MoO4.2H20
CuSO4.5H2O
CoCl2.6H2O

6,900
8,600
6,200
0,830
0,250
0,025
0,025

Iron (Stok III)
FeSO4.7H2O
Na2.EDTA
Vitamin (Stok IV)
Nikotinic acid
Pyridoxin HCL
Thiamine HCL
Myo-inositol
Sukrosa
Agar
(Sumber: Murashige and Skoog, 1962)

27,800
37,200

0,500
0,500
0,100
100,000
30.000,000
7.000,000

Universitas Sumatera Utara

56

Lampiran 21. Bagan Penelitian
1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

A2

A3

A1

A2

A5

A4

A3

A2

A5

A1

A4

A7

A2

A7

A5

A7

A1

A7

A6

A4

A1

A2

A5

A3

A7

A2

A4

A5

A1

A6

A3

A2

A5

A4

A2

A3

A6

A3

A2

A6

A7

A5

A6

A6

A3

A4

A7

A6

A1

A1

A2

A7

A1

A1

A4

A6

A1

A4

A2

A1

A1

A6

A4

A3

A7

A6

A5

A4

A7

A5

A5

A6

A3

A4

A7

A5

A4

A3

A7

A3

A5

A4

A6

A4

A2

A3

A2

A7

A3

A2

A6

A5

A2

A5

A6

A7

A1

A7

A6

A3

A1

A3

A1

A5

A4

Universitas Sumatera Utara

57

Lampiran 22. Kegiatan Penelitian
Jenis Kegiatan
Sterilisasi Alat
Pembuatan Media
Pengambilan Bahan Tanaman
Sterilisasi Bahan Tanaman
Persiapan Ruang Tanam
Penanaman
Pemeliharaan Eksplan
Peubah Amatan
Persentase Terbentuknya Akar
(%)
Persentase Terbentuknya Kalus
(%)
Umur Munculnya Akar
Umur Munculnya Kalus
Warna Kalus
Tekstur Kalus
Berat Segar Akar (gram)
Berat Segar Kalus (gram)
Jumlah Akar
Warna Kalus
Tekstur Kalus
Morfogenesis
Pengukuran
Kandungan
βsitosterol

1
X
X

2

3

X
X
X
X
X

X

Minggu ke –
4
5
6

X

X

X

7

8

X

X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X

Universitas Sumatera Utara

58

Lampiran 23. Foto Penelitian

A1

A2

A3

A4

A5

A6

Universitas Sumatera Utara

59

A7

Universitas Sumatera Utara

39

DAFTAR PUSTAKA
Aziz, S. A. 2013. Prosedur operasional baku budidaya bangun-bangun
(Plectranthus amboinicus). Southeast Asian Food and Agricultural
Science and Technology (SEAFAST) Centre Research and Community
Service Institution. IPB, Bogor.
Bintang, M. 2010. Biokimia. Teknik Penelitian. Departemen Biokimia. Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam. IPB, Bogor.
Carew, D. P and R. J. Krueger. 1977. Catharathus roseus tissue culture.
The Effects of Medium Modifications on Growth and Alkaloid
Production. J. Nat. Prod. 40: 326-336.
Collin, H. A. and Edwards. 1998. Plant cell culture. BIOS Sci. Publ. Ltd. 158 pp.
Conger, B. V. 1980. Cloning agricultural plants via in vitro technique. CRC Press
Inc. Florida. pp. 11-22.
Damanik, R. M., H. Syarief., T. Sinaga dan T. H. Doloksaribu. 2014. Pemanfaatan
daun bangun-bangun dalam pengembangan produk makanan tambahan
fungsional untuk ibu menyusui. JIPI. ISSN 0853-4217. 19 (1): 38-42.
Dalimoenthe, S. L. 1987. Kultur jaringan sebagai sarana untuk menghasilkan
metabolit sekunder. dalam Pramono, S., D. Gunawan dan
C. J. Soegihardjo (ed.) Buku Risalah Seminar Nasional Metabolit
Sekunder 1987. Yogyakarta: PAU Bioteknologi UGM.
Darminto, A., Alimuddin dan D. Iwan. 2009. Indentifikasi senyawa
metabolit sekunder potensial menghambat pertumbuhan bakteri
Aeromonas hydrophyla dari kulit batang tumbuhan Aveccennia spp.
J. Chemica. 10 (2): 92 – 99.
Davies, P. J. 1990. Plant hormones and their role in plant growth and
development. USA: Kluwer Academic Publisher. pp. 593-613.
Fancy, S. A and K. Rumpel. 2008. GC-MS based metabolomics in methods in
pharmacology and toxicology. Biomarker Methods in Drug Discovery and
Development. Humana Press. Totowa. pp. 317–340.
Kaliappan N. D and P. K Viswanathan. 2008. Pharmacognostical studies on the
leaves of Plectranthus amboinicus (Lour) Spreng. Int. J. Green Pharm.
2 (3): 182-184.
Khajarern, J and S. Khajarern. 2002. The efficacy of origanum essentiqal oils in
sow feed. Int. Pig Topics.

Universitas Sumatera Utara

40

Kristina, N. N dan S. F. Syahid. 2014. Pemanfaatan tanaman kelor
(Moringa oleifera) untuk meningkatkan produksi air susu ibu. Warta
Penelitian dan Pengembangan Tanaman Industri. Balitro.
Lestari, E. G 2011. Peranan zat pengatur tumbuh dalam perbanyakan tanaman
melalui kultur jaringan. J. Agro Biogen. 7 (1): 63-68.
Lukhoba, C. W., M. S. J. Simmonds and A. J. Paton. 2005. Plectranthus:
a preview of ethnobotanical use. J. Ethnopharmacol. 103 (1): 1-24.
Mahadi, I., S. Wulandari dan D. Trisnawati. 2013. Pemberian NAA dan kinetin
terhadap pertumbuhan eksplan buah naga (Hylocereus costaricensis)
melalui teknik kultur jaringan secara in vitro. Program Studi Pendidikan
Biologi Jurusan FMIPA FKIP. Universitas Riau, Pekanbaru.
Mendanha, A. B. L., A. T. Roberto and B. F. Adelson. 1998. Micropropagation
of rubber trees (Hevea brasiliensis Muell. Arg.). Genet. Mol. Biol. 21 (3).
Nasution, R. 2013. Isolasi dan penentuan struktur senyawa steroid dari daun
tumbuhan kulu (Artocarpus camansi: sukun berbiji) yang bersifat
antidiabetes. Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam.
Universitas Sumatera Utara, Medan.
Nuke.

2008. Kajian berbagai komposisi media serta kondisi gelap
dan terang terhadap induksi kalus tanaman jati belanda
(Guazuma ulmifolia Lamk.). Skripsi. Program Studi Agronomi. Fakultas
Pertanian. Universitas Sebelas Maret.

Pandey, B. P. 2007. Taxonomy of angiosperms. S. Chand and Company Ltd.
New Delhi.
Panjaitan, E. 2005. Respons pertumbuhan tanaman anggrek (Dendrobium sp.)
terhadap pemberian BAP dan NAA secara in vitro. J. Penelitian
Bidang Ilmu Pertanian. Universitas Methodist Medan, Medan.
(3): 45-51.
Prakash, O. R., R. Acharya., S. K. Mishra and R. Sahoo. 2012. Patorchur
(Coleus aromaticus): a review of the medicinal evidence for its
phytochemistry and pharmacology properties. IJABPT. 3 (4): 54-348.
Prasetyo, C. H. 2009. Teknik kultur jaringan Dendrobium sp. di pembudidayaan
anggrek Widorokandang Yogyakarta. Program Studi Agribisnis
Hotikultura dan Arsitektur Pertamanan. Fakultas Pertanian. Universitas
Sebelas Maret, Surakarta.
Priyatno, T. P. 2013. Pangan tradisional Sumatera Utara berbasis budaya dan
pelestarian in situ. Warta Plasma Nutfah Indonesia

Universitas Sumatera Utara

41

Pullaiah, T. 2006. Encyclopaedia of world medicinal plants. Regency Publication.
New Delhi.
Puteri, R. F. 2014. Pengaruh penambahan berbagai konsentrasi NAA
(Napthalene Acetic Acid) dan BAP (Benzyl Amino Purine) terhadap
induksi kalus daun Sirsak (Annona muricata) secara in vitro. Lentera Bio.
3 (3): 154-159.
Ramachandran, K. 1967. Cytology of genus coleus. Cytologia. 32 : 474-480.
Razzaque, A. and B. E. Ellis. 1977. Rosmarinic acid production in coleus cell
cultures. Planta. 137 (3): 287-291.
Reddy, P. S., R. Rodrigues and R. Rajasekharan. 2001. Shoot organogenesis and
mass propagation of Coleus forskohlii from leaf derived callus. Plant Cell
Tissue and Organ Culture. 66: 183-188.
Sahay, R., S. Banerjee and K. Kundu. 2011. Coleus aromaticus Benth: a nutritive
medicinal plant of potential therapeutic value. IJPBS. 2 (3): 488-496.
Santoso, U dan F. Nursandi. 2004. Kultur jaringan tanaman. Edisi Pertama. UMM
Press. Universitas Muhammadiyah Malang, Malang.
Shofiyani, A dan A. M. Purnawanto. 2010. Pengaruh kombinasi 2,4 D dan Benzil
Amino Purin (BAP) terhadap pembentukan kalus pada eksplan daun
kencur (Kaemferia galangl L.) secara in vitro. Laporan Penelitian Dosen
Muda. Universitas Muhammadiyah Purwokerto.
Steel, R. G. D dan J. H. Torrie. 1995. Prinsip dan prosedur statistika. Penerjemah
Bambang Sumantri. Gramedia Pustaka, Jakarta
Sugiyarto, A. D. Setyawan dan A. Pitoyo. 2006. Estimasi kemelimpahan dan
distribusi Plantago major L. di Gunung Lawu. Pusat Penelitian dan
Pengembangan Bioteknologi dan Biodiversitas. Lembaga Penelitian dan
Pengabdian kepada Masyarakat (LPPM). Jurusan Biologi FMIPA
Universitas Sebelas Maret, Surakarta.
Warsiki, E., E. Damayanthy dan R. Damanik. 2009. Karakteristik mutu sop daun
torbangun (Coleus amboinicus Lour) dalam kemasan kaleng dan
perhitungan total migrasi bahan kemasan. J. Teknol. Indust. Pertan.
18: 21-24.
Wattimena, G. A., L. W. Gunawan., N. A. Maatjik., E. Sjamsudin., N. M. A.
Wiendi dan A. Ernawati. 1992. Bioteknologi tanaman laboratorium kultur
jaringan. Pusat Antar Universitas. Institut Pertanian Bogor, Bogor.

Universitas Sumatera Utara

42

Wetherell, D. F. 1982. Pengantar propagasi tanaman secara in vitro. Oleh Dra.
Koensoemardiyah Seri Kultur Jaringan Tanaman. Avery Publ. Group Inc.
New Jersey. 110 pp.
Wetter, L. R dan F. Constabel. 1991. Metode kultur jaringan tanaman. Edisi
Kedua. Penerbit ITB Bandung, Bandung.
Yelnititis dan T. E. Komar. 2010. Upaya induksi kalus embriogenik dari potongan
daun ramin. Pusat Penelitian dan Pengembangan Hutan dan Konservasi
Alam. Kementerian Hutan, Bogor.

Universitas Sumatera Utara

17

BAHAN DAN METODE PENELITIAN
Tempat dan Waktu Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Kultur Jaringan UPT. Benih
Induk Hortikultura Gedung Johor, Dinas Pertanian, Sumatera Utara dan
Laboratorium Genetika Molekuler, Fakultas Pertanian, Universitas Sumatera
Utara. Penelitian ini dimulai pada bulan April 2016 sampai dengan Juli 2016.
Bahan dan Alat Penelitian
Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun
bangun-bangun (P.amboinicus) aksesi Medan (Krakatau) sebagai eksplan, larutan
stok media MS (Murashige and Skoog) sebagai komposisi media, NAA, 2,4 D
dan kinetin sebagai zat pengatur tumbuh, agar, aquadest steril, dan aluminium
foil. Bahan lain yang digunakan seperti metanol, kloroform, campuran asam asetat
anhidrida, asam sulfat pekat, larutan standar, larutan blanko, larutan sampel dan
bahan-bahan lainnya yang mendukung penelitian ini.
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah Laminar Air Flow
Cabinet (LAFC), botol kultur, autoklaf, waterbath, timbangan analitik, rak kultur,
hot plate dengan magnetik stirer, erlenmeyer, glassware, pipet ukur, dissecting
set, lampu bunsen, pH meter, oven, pipet tetes, dan alat-alat lainnya yang
mendukung penelitian ini.
Metode Penelitian
Penelitian ini dilakukan dengan menggunakan Rancangan Acak Lengkap
(RAL) non-faktorial dengan ulangan tidak sama, yaitu:
A1: MS + 1 mg/l NAA + 0,1 mg/l kinetin
A2: MS + 2 mg/l NAA + 0,1 mg/l kinetin

Universitas Sumatera Utara

18

A3: MS + 3 mg/l NAA + 0,1 mg/l kinetin
A4: MS + 1 mg/l 2,4 D + 0,1 mg/l kinetin
A5: MS + 2 mg/l 2,4 D + 0,1 mg/l kinetin
A6: MS + 3 mg/l 2,4 D + 0,1 mg/l kinetin
A7: MS + 0,1 mg/l kinetin
Jumlah perlakuan

:7

Jumlah ulangan

: 15

Jumlah eksplan tiap botol kultur : 1
Jumlah seluruh eksplan

: 105

Adapun model liner dari sidik ragam penelitian sebagai berikut:
Yijk = μ + τi + ε ij
i = 1,2,3,…7
Yijk

j = 1,2,3…15

= Nilai pengamatan unit percobaan pada perlakuan zat pengatur tumbuh
ke-i dan ulangan ke-j

µ

= Nilai tengah umum

τi

= Pengaruh zat pengatur tumbuh ke-i

ε ij

= Galat percobaan pada perlakuan zat pengatur tumbuh ke-i dan ulangan
ke-i
Jika perlakuan berbeda nyata dalam sidik ragam maka dilanjutkan dengan

Uji Jarak Berganda Duncan (Duncan Multiple Range Test) pada α = 5%
(Steel dan Torrie, 1995).

Universitas Sumatera Utara

19

PELAKSANAAN PENELITIAN
Sterilisasi Alat
Alat-alat dissecting-set dan glassware yang akan digunakan untuk kultur
in vitro dicuci dan dikeringkan. Kemudian alat-alat disterilkan dengan autoklaf
pada suhu 121oC dengn tekanan 17,5 psi selama 60 menit dan disterilkan secara
kering di dalam oven pada suhu 150oC selama 1-2 jam.
Pembuatan Media
Media yang digunakan adalah media MS padat. Sebelum dilakukan
pembuatan media MS, dilakukan pembuatan larutan stok ZPT NAA, 2,4 D dan
kinetin. Larutan stok NAA 2,4 D dan kinetin disaring menggunakan minisar guna
meningkatkan sterilitas dari hormon tersebut dan dilakukan di LAF.
Pada pembuatan media MS, tahap pertama adalah membuat larutan stok
bahan kimia hara makro dengan pembesaran 100x, hara mikro dengan
pembesaran 100x, larutan iron dengan pembesaran 100x, larutan vitamin dengan
pembesaran 100x, sukrosa 30 g, myo-inositol 0,1 g dan agar 7 g. Tahap
berikutnya, sukrosa dimasukkan ke dalam beaker glass yang telah berisi akuades
750 ml, lalu diaduk dengan menggunakan magnetic stirrer sebagai pengaduk.
Persiapan Ruang Kultur
Seluruh permukaan LAF sebelumnya dibersihkan terlebih dahulu dengan
di lap menggunakan alkohol 96% lalu disterilkan dengan sinar Ultra Violet
selama 1 jam sebelum proses penanaman dilakukan. Semua alat dan bahan yang
akan digunakan harus disemprot dengan alkohol 96% dan beberapa alat seperti
pinset, gunting, scalpel setelah disemprot lalu dibakar di dalam LAF selama 1
menit. Hal

ini

dilakukan untuk menghindari

resiko bahan penelitian

Universitas Sumatera Utara

20

terkontaminasi. Steril box dihidupkan dan disediakan alkohol 70% untuk
membersihkan alat yang telah digunakan.
Sterilisasi Eksplan
Eksplan yang digunakan untuk menginduksi kalus diambil dari daun muda
(daun ke-2 atau ke-3 dari atas) tanaman P. amboinicus. Sterilisasi eksplan
dilakukan dengan memberikan fungisida (dithane) yang dicampurkan dengan air.
Eksplan yang telah diambil dari lapangan kemudian dicuci di bawah air bersih
yang mengalir. Selanjutnya direndam dalam Bayclin 15 % yang ditambahkan
Tween 20 sebanyak 2 tetes selama 10 menit, lalu dibilas 3 kali dengan akuades
steril. Eksplan kembali direndam dengan alkohol 70% selama 3 menit. Dibilas
lagi dengan menggunakan akuades, lalu ditiriskan dengan menggunakan kertas
tisu.
Penanaman Eksplan
Eksplan ditanam pada botol kultur yang sudah berisi media sebanyak 30
ml/botol kultur. Eksplan yang telah disterilisasi dikeluarkan dengan menggunakan
pinset. Ukuran eksplan yang digunakan adalah 1x1 cm. Apabila ukuran eksplan
belum sesuai maka dapat dipotong dengan menggunakan gunting steril dan tajam
atau scalpel. Eksplan yang akan dikulturkan ke dalam media tanam diletakkan di
atas piringan kaca tebal yang sudah disemprot dengan alkohol 70 % dan telah
dilapisi dengan kertas plano. Kemudian eksplan ditanam ke dalam botol kultur
sesuai dengan perlakuan, setiap botol kultur terdiri dari 1 eksplan. Kemudian
ujung botol kultur ditutup dengan aluminium foil. Kegiatan penanaman dilakukan
di dalam LAF dan di bawah api bunsen. Kemudian botol kultur diletakkan di rak
kultur di bawah cahaya dan suhu yang telah telah ditetapkan.

Universitas Sumatera Utara

21

Pemeliharaan Eksplan
Ruangan ini diusahakan bebas dari bakteri dan cendawan, dimana setiap
hari disemprot dengan alkohol 96% atau dan disemprot formalin agar bebas dari
organisme yang menyebabkan terjadi kontaminasi. Dalam penelitian ini suhu
ruangan kultur yang digunakan +20-25°C dengan suhu optimum 180ºC dan
intensitas cahaya 2000 lux serta dengan kondisi ruangan memiliki air conditioner
dengan hefa yang dibersihkan selama 6 bulan sekali. Apabila mengalami
kontaminasi, segera diambil dari rak kultur agar mencegah kontaminasi ke tabung
lainnya.
Analisis Beta Sitosterol
Kalus yang sudah kering digerus dengan mortal, lalu sebanyak 100 mg
dimaserasi dengan pelarut metanol sebanyak 10 ml hingga menghasilkan residu.
Kemudian dimaserasi kembali dengan metanol sebanyak 5 ml lalu disaring.
Dipipet sebanyak 2 ml ekstrak ke dalam gelas piala dan diuapkan hingga
mengering di dalam penangas air. Residu diekstraksi dengan kloroform sebanyak
2 kali, setiap kali ekstraksi digunakan 2,5 ml kloroform, sehingga ekstrak
kloroform menjadi 5 ml. Kemudian dimasukkan 2 ml asam asetat anhidrida dan
0,1 ml asam sulfat pekat. Lalu diperhatikan apakah ada perubahan warna atau
tidak. Penetapan kadar sterol ini dilakukan dengan uji Liebermann-Burchard.
Prinsipnya yakni sterol akan larut dalam kloroform dan bereaksi dengan asam
kuat membentuk kompleks warna. Perubahan warna yang menunjukkan hasil
positif adalah timbulnya warna biru menjadi merah dibagian kloroform,
sedangkan dibagian asam berwarna kuning dan selanjutnya menjadi hijau pekat
(Bintang, 2010).

Universitas Sumatera Utara

22

Peubah Amatan
Persentase Terbentuknya Akar (%)
Persentase terbentuknya kalus dihitung pada 4 MST dengan rumus:
Persentase terbentuknya kalus = Jumlah akar yang terbentuk
x 100 %
Jumlah seluruh eksplan yang ditanam
Persentase Terbentuknya Kalus (%)
Persentase terbentuknya kalus dihitung pada 4 MST dengan rumus:
Persentase terbentuknya kalus = Jumlah kalus yang terbentuk
x 100 %
Jumlah seluruh eksplan yang ditanaman
Umur Munculnya Akar (HST)
Pengamatan dilakukan dengan mencatat hari saat akar pertama kali
muncul. Munculnya kalus ditandai dengan adanya tonjolan-tonjolan berjejal
berwarna putih kompak pada permukaan eksplan.
Umur Munculnya Kalus (HST)
Pengamatan dilakukan dengan mencatat hari saat kalus pertama kali
muncul. Munculnya kalus ditandai dengan adanya tonjolan-tonjolan berjejal
berwarna putih kompak pada permukaan eksplan.
Berat Segar Akar (gram)
Diukur pada akhir penelitian dengan menimbang akar.
Berat Segar Kalus (gram)
Diukur pada akhir penelitian dengan menimbang kalus.
Jumlah Akar
Dihitung pada akhir penelitian.

Universitas Sumatera Utara

23

Warna kalus
Warna kalus diamati pada akhir penelitian dengan menggunakan skoring
warna kalus, yaitu sebagai berikut:
1 = kalus berwarna putih kecoklatan
2 = kalus berwarna coklat muda
3 = kalus berwarna coklat
4 = kalus berwarna coklat tua
5 = kalus berwarna coklat kehitaman
(Nuke, 2008).
Tekstur Kalus
Ditentukan pada akhir penelitian apakah kalus yang terbentuk kalus
bertekstur kompak atau remah.
Morfogenesis
Ditentukan pada akhir penelitian apakah eksplan mengalami morfogenesis
langsung atau tidak langsung.
Kandungan β-Sitosterol
Ditentukan pada akhir penelitian apakah ada atau tidak terkandung
β-sitosterol melalui perubahan warna.

Universitas Sumatera Utara

24

HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil
Dari hasil analisis data yang dilakukan, diperoleh bahwa perlakuan ZPT
memberikan pengaruh nyata terhadap berat segar akar dan jumlah akar tetapi
belum memberikan pengaruh nyata terhadap persentase terbentuknya akar,
persentase terbentuknya kalus, umur muncul akar, umur muncul kalus, dan berat
segar kalus.
Persentase Terbentuknya Akar (%)
Berdasarkan hasil pengamatan dan sidik ragam terhadap parameter
persentase terbentuknya akar pada perlakuan ZPT (Lampiran 1-2) belum
menunjukkan pengaruh yang berbeda nyata.
Rataan persentase terbentuknya akar dari perlakuan ZPT dapat dilihat pada
Tabel 1.
Tabel 1. Pengaruh perlakuan ZPT terhadap persentase munculnya akar (%)
Perlakuan
% Terbentuk Akar
A1
66,67
A2
50,00
A3
66,67
A4
14,29
A5
11,11
A6
0,00
A7
50,00
Keterangan: Angka 0,00 menunjukkan eksplan tumbuh steril tetapi tidak terbentuk akar

Gambar eksplan sebelum dan sesudah membentuk akar pada salah satu
perlakuan dapat dilihat pada gambar 1.

Universitas Sumatera Utara

25

a
Gambar 1. a. Eksplan sebelum membentuk akar
b. Eksplan setelah membentuk akar

b

Persentase Terbentuknya Kalus (%)
Berdasarkan hasil pengamatan dan sidik ragam terhadap parameter
persentase terbentuknya kalus pada perlakuan ZPT belum menunjukkan pengaruh
yang berbeda nyata (Lampiran 3-4).
Rataan persentase terbentuknya kalus dari perlakuan ZPT dapat dilihat
pada Tabel 2.
Tabel 2. Pengaruh perlakuan ZPT terhadap persentase munculnya kalus (%)
Perlakuan
% Terbentuk Kalus
A1
22,22
A2
0,00
A3
25,00
A4
85,71
A5
66,67
A6
87,50
A7
25,00
Keterangan: Angka 0,00 menunjukkan eksplan tumbuh steril tetapi tidak terbentuk kalus

Gambar eksplan sebelum dan sesudah membentuk kalus pada salah satu
perlakuan dapat dilihat pada gambar 2.

Universitas Sumatera Utara

26

a
Gambar 2. a. Eksplan sebelum membentuk kalus
b. Eksplan setelah membentuk kalus

b

Umur Munculnya Akar (hari)
Berdasarkan hasil pengamatan dan sidik ragam terhadap parameter umur
muncul akar pada perlakuan ZPT belum menunjukkan pengaruh yang berbeda
nyata (Lampiran 5-6).
Rataan umur muncul akar dari perlakuan ZPT dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel 3. Pengaruh perlakuan ZPT terhadap umur muncul akar (hari)
Perlakuan
Umur Muncul Akar (hari)
A1
14,83
A2
11,33
A3
14,50
A4
12,00
A5
14,00
A6
A7
15,57
Keterangan: Tanda (-) menunjukkan eksplan tumbuh steril tetapi tidak terbentuk akar

Umur Munculnya Kalus (hari)
Berdasarkan hasil pengamatan dan sidik ragam terhadap parameter umur
muncul kalus pada perlakuan ZPT belum menunjukkan pengaruh yang berbeda
nyata (Lampiran 7-8).
Rataan umur muncul kalus dari perlakuan ZPT dapat dilihat pada Tabel 4.

Universitas Sumatera Utara

27

Tabel 4. Pengaruh perlakuan ZPT terhadap umur muncul kalus (hari)
Perlakuan
Umur Muncul Kalus (hari)
A1
18,00
A2
A3
13,33
A4
17,17
A5
15,00
A6
16,57
A7
14,50
Keterangan: Tanda (-) menunjukkan eksplan tumbuh steril tetapi tidak terbentuk kalus

Berat Segar Akar (gram)
Berdasarkan hasil pengamatan dan sidik ragam terhadap berat segar akar
pada perlakuan ZPT menunjukkan pengaruh yang berbeda nyata (Lampiran 9-10).
Rataan berat segar akar dari perlakuan ZPT dapat dilihat pada Tabel 5.
Tabel 5. Pengaruh perlakuan ZPT terhadap berat segar akar (g)
Perlakuan
Berat Segar Akar (g)
A1
0,05c
A2
0,06b
A3
0,08a
A4
0,01d
A5
0,01d
A6
0,00d
A7
0,02d
Keterangan: -Angka-angka yang diikuti huruf yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata pada
Uji Jarak Berganda Duncan pada taraf 5%
-Angka 0,00 menunjukkan eksplan tumbuh steril tetapi tidak terbentuk akar

Pada Tabel 5, memperlihatkan berat segar akar tertinggi pada perlakuan
A3 (MS + 3 mg/l NAA + 0.1 mg/l kinetin) dengan rataan (0,08) dan terendah
pada perlakuan A6 (MS + 3 mg/l 2,4 D + 0.1 mg/l kinetin) dengan rataan (0,00).
Berat Segar Kalus (gram)
Berdasarkan hasil pengamatan dan sidik ragam terhadap berat segar kalus
pada perlakuan ZPT belum menunjukkan pengaruh yang berbeda nyata (Lampiran
11-12).
Rataan berat segar kalus dari perlakuan ZPT dapat dilihat pada Tabel 6.

Universitas Sumatera Utara

28

Tabel 6. Pengaruh perlakuan ZPT terhadap berat segar kalus (g)
Perlakuan
Berat Segar Kalus (g)
A1
0,004
A2
0,00
A3
0,01
A4
0,01
A5
0,02
A6
0,02
A7
0,002
Keterangan: Angka 0,00 menunjukkan eksplan tumbuh steril tetapi tidak terbentuk kalus

Jumlah Akar
Berdasarkan hasil pengamatan dan sidik ragam terhadap jumlah akar pada
perlakuan ZPT menunjukkan pengaruh yang berbeda nyata (Lampiran 13-14).
Rataan jumlah akar dari perlakuan ZPT dapat dilihat pada Tabel 7.
Tabel 7. Pengaruh perlakuan ZPT terhadap jumlah akar (akar)
Perlakuan
Jumlah Akar
A1
11,11b
A2
12,83b
A3
22,25a
A4
2,14e
A5
2,67d
A6
0,00f
A7
9,00c
Keterangan: -Angka-angka yang diikuti huruf yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata pada
Uji Jarak Berganda Duncan pada taraf 5%
-Angka 0,00 menunjukkan eksplan tumbuh steril tetapi tidak terbentuk akar

Pada Tabel 7, memperlihatkan jumlah akar tertinggi pada perlakuan A3
(MS + 3 mg/l NAA + 0.1 mg/l kinetin) dengan rataan (22,25) dan terendah pada
perlakuan A6 (MS + 3 mg/l 2,4 D + 0.1 mg/l kinetin) dengan rataan (0,00).
Warna Kalus
Semua kalus yang terbentuk dari perlakuan ZPT memiliki warna putih
kecoklatan. Warna kalus yang terbentuk dapat diamati secara visual.

Universitas Sumatera Utara

29

Tekstur Kalus
Semua kalus yang terbentuk dari perlakuan ZPT adalah kalus bertekstur
remah (friable).
Tabel 8. Pengaruh perlakuan ZPT terhadap tekstur kalus
Perlakuan
Tekstur Kalus
A1
Remah
A2
Remah
A3
Remah
A4
Remah
A5
Remah
A6
Remah
A7
Remah
Morfogenesis
Morfogenesis pada eksplan terjadi secara langsung dan tidak langsung
(melalui kalus terlebih dahulu).

a
b
Gambar 3. Morfogenesis eksplan, a. Kemunculan akar langsung dari eksplan,
b. Kemunculan akar tidak langsung dari eksplan
Kandungan β-Sitosterol
Berdasarkan uji kualititatif pada perlakuan ZPT menunjukkan tidak
adanya perubahan warna.

Universitas Sumatera Utara

30

Tabel 9. Pengaruh perlakuan ZPT terhadap kandungan β-sitosterol
Hasil Reagen Sterol
(Liebermand-Burchard)
Perlakuan
Keterangan
Akar
Kalus
A1
Coklat
Coklat
Tidak ada sterol
A2
Coklat
Tidak ada sterol
A3
Coklat
Coklat
Tidak ada sterol
A4
Coklat
Coklat
Tidak ada sterol
A5
Coklat
Coklat
Tidak ada sterol
A6
Coklat
Tidak ada sterol
A7
Coklat
Coklat
Tidak ada sterol
Keterangan: Coklat = tidak ada kandungan sterol; hijau = terdapat kandungan sterol; tanda (-)
tidak ada biomassa

a
b
Gambar 4. a. Sebelum penambahan asam asetat anhidrida dan asam sulfat
b. Sesudah penambahan asam asetat anhidrida dan asam sulfat
Pembahasan
Pengaruh Zat Pengatur Tumbuh pada Eksplan Daun P. amboinicus terhadap
Pertumbuhan Biomassa Secara In Vitro
Dari hasil analisis data secara statistik diketahui bahwa perlakuan ZPT
memberikan pengaruh nyata terhadap berat segar akar dan jumlah akar tetapi
belum memberikan pengaruh nyata terhadap peubah amatan lain.
Pada peubah amatan berat segar akar terdapat perlakuan A3 (MS + 3 mg/l
NAA + 0.1 mg/l kinetin) dengan rataan tertinggi (0,08) dan perlakuan A6 (MS + 3
mg/l 2,4 D + 0.1 mg/l kinetin) dengan rataan terendah (0,00). Hasil penelitian

Universitas Sumatera Utara

31

menunjukkan bahwa bobot segar akar dipengaruhi oleh kombinasi auksin dan
sitokinin jenis tertentu dalam konsentrasi tertentu. Menurut Wattimena, et al
(1992) auksin berperan dalam berbagai aspek pertumbuhan dan perkembangan
tanaman antara lain pembesaran sel, penghambatan mata tunas samping, aktivitas
sel kambium, dan pertumbuhan akar. Auksin sintentik yang biasa digunakan
dalam kultur in vitro adalah 2,4 D, NAA, dan pikloram. Sedangkan sitokinin
mempengaruhi berbagai proses fisiologis di dalam tanaman terutama mendorong
pembelahan sel.
Pada peubah amatan jumlah akar terdapat perlakuan A3 (MS + 3 mg/l
NAA + 0.1 mg/l kinetin) dengan rataan tertinggi (22,25) dan perlakuan
A6 (MS + 3 mg/l 2,4 D + 0.1 mg/l kinetin) dengan rataan terendah (0,00).
Penambahan auksin atau sitokinin ke dalam media kultur dapat meningkatkan
induksi akar eksplan daun. Penambahan 3 ppm NAA pada taraf perlakuan
tertinggi pada P. amboinius berpengaruh terhadap jumlah akar. Lestari (2011)
menyatakan bahwa penambahan auksin atau sitokinin dapat meningkatkan
konsentrasi zat pengatur tumbuh endogen di dalam sel, sehingga menjadi faktor
pemicu dalam proses tumbuh dan perkembangan jaringan. Pada penelitian
Mahadi, et al (2013) menunjukkan bahwa NAA dan kinetin berpengaruh nyata
terhadap jumlah akar eksplan buah Naga (Hylocereus costaricensis). Rataan
jumlah akar eksplan buah naga tertinggi pada perlakuan 0,4 ppm NAA dan 4 ppm
kinetin. Hal ini diduga bahwa interaksi antagonis antara auksin dan sitokinin
merupakan salah satu cara tumbuhan dalam mengatur derajat pertumbuhan akar.
Persentase terbentuknya akar tertinggi pada perlakuan A1 (MS + 1 mg/l
NAA + 0.1 mg/l kinetin) dan A3 (MS + 3 mg/l NAA + 0.1 mg/l kinetin) dengan

Universitas Sumatera Utara

32

rataan (66,67) % dan terendah pada perlakuan A6 (MS + 3 mg/l 2,4 D + 0.1 mg/l
kinetin) dengan rataan terendah (0,00). Pada pengamatan persentase tumbuh,
terdapat eksplan yang mengalami browning. Browning mulai terlihat pada 2 MST
yang ditandai dengan perubahan warna pada eksplan dari hijau menjadi cokelat
dimulai dari tepi yang mengalami pelukaan hingga akhirnya menyebar ke seluruh
bagian eksplan. Hal ini diakibatkan oleh senyawa fenolik yang berasal dari bagian
tanaman yang luka dan dapat menyebabkan kematian. Menurut Wetherell (1982),
browning merupakan terjadinya warna cokelat pada jaringan yang baru dipotong.
Hal ini disebabkan karena terjadinya reaksi antara senyawa fenolik yang
diproduksi jaringan dengan oksigen.
Persentase terbentuknya kalus tertinggi pada perlakuan A6 (MS + 3 mg/l
2,4 D + 0.1 mg/l kinetin ) dengan rataan (87,50) % dan terendah pada perlakuan
A2 (MS + 2 mg/l NAA + 0.1 mg/l kinetin ) dengan rataan terendah (0,00). Pada
pengamatan 2 MST eksplan ditandai dengan perubahan warna dari hijau menjadi
cokelat dimulai dari tepi yang mengalami pelukaan hingga akhirnya menyebar ke
seluruh bagian eksplan. Hal ini diakibatkan oleh senyawa fenolik yang berasal
dari bagian tanaman yang luka. Menurut Collin dan Edwards (1998) senyawa
fenolik diproduksi sebagai respon atas kondisi stress yang dialami oleh tanaman.
Senyawa ini bersifat racun dan dapat menyebabkan kematian pada jaringan
tanaman.
Umur munculnya akar adalah waktu yang dibutuhkan untuk melihat
respon tanaman dalam menghasilkan akar baru. Dalam penelitian ini umur
munculnya akar paling lama adalah 17 hari dan umur munculnya akar paling
cepat adalah 7 hari. Umur munculnya akar 7 hari terdapat pada perlakuan A2

Universitas Sumatera Utara

33

(MS + 2 mg/l NAA + 0.1 mg/l kinetin). Hal ini disebabkan oleh beberapa faktor
yang menghambat proses pertumbuhan akar eksplan. Menurut Conger (1980)
faktor-faktor yang mempengaruhi keberhasilan perbanyakan dengan eksplan yaitu
genotip eksplan, ukuran eksplan, jaringan asal eksplan dan umur fisiologi eksplan.
Tidak semua jaringan tanaman memiliki kemampuan yang sama untuk
berdiferensiasi. Wetherell (1982) menyatakan bahwa tanaman yang memiliki
hubungan kekerabatan yang dekat pun belum tentu menunjukkan respon in vitro
yang sama.
Dalam penelitian ini umur munculnya kalus paling lama adalah 23 hari
dan umur munculnya kalus paling cepat adalah 6 hari. Umur munculnya kalus 6
hari terdapat pada perlakuan A3 (MS + 3 mg/l NAA + 0.1 mg/l kinetin). Hal ini
disebabkan oleh beberapa faktor yang menghambat proses pertumbuhan kalus
eksplan seperti jaringan asal eksplan dan umur fisiologi eklspan. Menurut
Shofiyani dan Purnawanto (2010) kemampuan pembentukkan kalus dari jaringan
tergantung dari umur fisiologi dari jaringan waktu diisolasi, musim pada waktu
bahan tanaman diisolasi, bagian tanaman yang dipakai, dan jenis tanaman. Suatu
sifat yang diamati dalam jaringan yang membentuk kalus adalah bahwa
pembelahan sel tidak terjadi pada semua sel dalam jaringan asal, tetapi hanya sel
di lapisan perisfer yang membelah terus menerus sedangkan sel-sel di tengah tetap
quiscent.
Pada peubah amatan berat segar kalus terdapat perlakuan A5
(MS + 2 mg/l NAA + 0.1 mg/l kinetin) dan A6 (MS + 3 mg/l 2,4 D + 0.1 mg/l
kinetin) dengan rataan tertinggi (0,02) dan terendah pada perlakuan A2 (MS + 2
mg/l NAA + 0.1 mg/l kinetin) dengan rataan terendah (0,00). Biomassa kalus

Universitas Sumatera Utara

34

adalah bobot yang didapat pada kalus dengan pemberian ZPT sehingga perlu
kesesuaian jenis dan taraf konsentrasi dari ZPT tersebut. Puteri (2014)
menyatakan bahwa perbedaan tersebut memiliki pengaruh yang berbeda terhadap
eksplan yang ditanam pada media MS yang dimodifikasi dengan pemberian
konsentrasi zat pengatur tumbuh yang berbeda dan terdapat sifat determinasi yang
berbeda dari setiap sel eksplan. Pengaruh tersebut terlihat pada biomassa kalus
yang ditimbang dari masing-masing perlakuan.
Pada kalus yang terbentuk adalah kalus bertekstur remah (friable). Kalus
tumbuh menjadi fragmen-fragmen yang kecil. Hal ini diduga dipengaruhi oleh
medium, keseimbangan ZPT maupun jenis tanaman. Shofiyani dan Purnawanto
(2010) menyatakan beberapa kalus ada yang mengalami pembentukan lignifikasi
sehingga kalus tersebut mempunyai tekstur yang keras dan kompak. Namun ada
kalus yang tumbuh terpisah-pisah menjadi fragmen-fragmen yang kecil, kalus
yang demikian dikenal dengan kalus remah (friable). Santoso dan Nursandi
(2004) menambahkan bahwa kalus freabel dapat diperoleh dengan memanipulasi
medium, misalnya dengan mengatur macam dan perbandingan zat pengatur
tumbuh, dapat pula dengan pergantian medium cair dan lain sebagainya. Tentu
saja semua itu sangat tergantung pada jenis tanaman, macam bahan, medium
dasar dan lingkungan lain.
Kalus yang terbentuk memiliki warna putih kecoklatan. Kalus yang
terbentuk dapat menunjukkan bahwa keberadaan kalus mempunyai aktifitas
pembelahan. Hal ini bisa dilihat dari penyerapan warna yang cukup tinggi.
Shofiyani dan Purnawanto (2010) menyatakan warna kalus dapat bermacam-

Universitas Sumatera Utara

35

macam tergantung dari jenis sumber eksplan itu diambil, seperti warna kekuningkuningan, putih, hijau, kuning kejingga-jinggaan.
Dari berbagai jenis perlakuan terlihat adanya variasi kemunculan akar
P. amboinicus yang dipengaruhi oleh ZPT ke dalam media kultur. Kemunculan
akar pada penelitian ini ada 2 macam yaitu akar yang muncul langsung dari
eksplan dan akar yang muncul bukan dari eksplan. Akar yang muncul langsung
dari eksplan terdapat pada perlakuan A2 (MS + 2 mg/l NAA + 0.1 mg/l kinetin)
dan A5 (MS + 2 mg/l 2,4 D + 0.1 mg/l kinetin), sedangkan kemunculan akar
melalui kalus terlebih dahulu (yang muncul bukan dari eksplan) yaitu kalus
mengalami diferensiasi menjadi akar pada perlakuan A1 (MS + 1 mg/l NAA + 0.1
mg/l kinetin), A3 (MS + 3 mg/l NAA + 0.1 mg/l kinetin), A4 (MS + 1 mg/l 2,4 D
+ 0.1 mg/l kinetin) dan A7 (MS + 0,1 mg/l kinetin). Pada perlakuan A6 (MS + 3
mg/l 2,4 D + 0.1 mg/l kinetin) tidak adanya terbentuknya akar tetapi eksplan
tumbuh menjadi kalus. Kemunculan akar merupakan morfogenesis dari kalus.
Adanya penambahan auksin secara eksogen mengakibatkan eksplan mampu
berdediferensiasi menjadi kalus atau tumbuh menjadi akar. Morfogenesis
terbentuk tergantung dari rasio konsentrasi sitokinin dan auksin. Wattimena, et al
(1992) menyatakan bahwa untuk

pertumbuhan akar hanya diperlukan

auksin tanpa sitokinin atau sitokinin dalam konsentrasi rendah. Marlin (2005)
menambahkan bahwa pada saat level auksin relatif tinggi daripada taraf sitokinin,
maka morfogenesis jaringan akan lebih mengarah pada pembentukan akar.

Universitas Sumatera Utara

36

Penggunaan ZPT Terhadap Kandungan β-Sitosterol pada Biomassa In Vitro
P. amboinicus
Berdasarkan analisis sterol menggunakan reagen Liebermand-Burchard
diperoleh bahwa ekstrak akar dan kalus P. amboinicus tidak mengandung
senyawa sterol/beta sitosterol. Hasil negatif ini diduga karena kandungan senyawa
sterol yang sedikit, sehingga saat diekstraksi dan dianalisis tidak dapat terdeteksi
dengan

pendekatan

reagen

Liebermand-Burchard.

Faktor-faktor

yang

mempengaruhi produksi metabolit sekunder adalah ekspresi sintesis senyawa
metabolit sekunder, asal eksplan dan kondisi yang mempengaruhi kultur in vitro.
Fancy dan Rumpel (2008) menyatakan bahwa sintesis senyawa metabolit
sekunder dipengaruhi banyak faktor antara lain: faktor genetik, faktor di dalam
kultur atau di luar kultur dan tahap perkembangan organ yang menghasilkannya.
Pada penelitian ini, ekstrak akar dan kalus P. amboinicus tidak
mengandung sterol yang disebabkan tidak terlokalisasinya sterol pada bagian akar
dan kalus. Hal ini diduga karena jenis eksplan yang bersumber dari daun dan
perbedaan morfologi pada tanaman berpengaruh terhadap kandungan sterol secara
in vitro. Pada penelitian Aminah (2016) sterol dapat terlokalisasi pada bagian
daun tanaman P. amboinicus secara konvensional, maka kemungkinan
akumulasinya di dalam kultur in vitro tidak dapat terjadi karena biomassa dalam
organ penyimpanannya yang berupa akar dan kalus sangat sedikit. Dalimoenthe
(1987) menyatakan reserpin terlokalisasi sebagian besar pada bagian akar tanaman
R. serpentina di alam, maka kemungkinan akumulasinya di dalam kultur in vitro
tidak dapat terjadi karena organ penyimpanannya yang berupa akar tidak tersedia
di dalam kultur kalus tersebut. Perbedaan morfologi pada tanaman yaitu ada

Universitas Sumatera Utara

37

senyawa-senyawa tertentu yang disintesis atau diakumulasikan hanya oleh organ
atau jaringan tertentu. Misalnya nikotin disintesis oleh bagian akar tembakau,
kemudian diangkut (ditranslokasikan) ke daun untuk disimpan. Pembentukan
morfin tidak dapat terjadi, karena bentuk sel yang tidak teratur pada kultur
tersebut.

Universitas Sumatera Utara

38

KESIMPULAN DAN SARAN
Kesimpulan
1. Eksplan daun yang dikulturkan dalam medium MS + 3 mg/l NAA + 0,1
mg/l kinetin dapat menginduksi akar dengan memberikan hasil terbaik
berdasarkan peubah amatan persentase terbentuknya akar, berat segar akar,
dan jumlah akar sedangkan medium MS + 3 mg/l 2,4 D + 0,1 mg/l kinetin
dapat menginduksi kalus dengan memberikan hasil terbaik berdasarkan
peubah amatan persentase terbentuknya kalus dan berat segar kalus.
2. Biomassa akar dan kalus yang dihasilkan secara in vitro tidak
menunjukkan adanya kandungan β-Sitosterol pada P. amboinicus
Saran
Sebaiknya perlu dilakukan penelitian lanjutan berdasarkan faktor-faktor
yang mempengaruhi dalam biomassa dan produk metabolit sekunder dengan cara
pemilihan sel, modifikasi medium, penggunaan elicitor, dan sebagainya.

Universitas Sumatera Utara

5

TINJAUAN PUSTAKA
Botani Tanaman
Menurut

Pandey

(2007)

tanaman

bangun-bangun

dapat

diklasifikasikan sebagai berikut: Kingdom: Plantae; Divisio: Angiospermae;
Sub

Divisio:

Spermatophyta;

Class:

Dicotyledoneae;

Ordo:

Lamiales;

Family: Lamiaceae; Genus: Plectranthus; Spesies: Plectranthus amboinicus
(Lour.) Spreng.
Bangun–bangun mempunyai nama binomial Plectranthus amboinicus
yang dulu dinamakan sebagai Coleus amboinicus, merupakan herba sukulen semi
semak tahunan dengan tinggi 100-120 cm dan tidak berumbi. P. amboinicus
bercabang dan mempunyai bulu-bulu tegak yang halus. Daun berukuran lebar,
berbentuk bulat telur/oval, dan tebal dengan bulu-bulu yang banyak. Bunga-bunga
bertangkai pendek dan berwarna keunguan. P. amboinicus termasuk ke dalam
famili Lamiaceae, mempunyai bau harum seperti oregano yang menyegarkan
(Aziz, 2013).
Tanaman ini berakar tunggang dan tumbuh dari ruas-ruas tanaman yang
menyentuh tanah. Akarnya berkembang baik pada tanah yang gembur dan subur.
Batangnya berbentuk persegi, berkayu lunak, beruas-ruas yang dapat menempel
di tanah, mudah tumbuh, dan mudah patah. Penampang batang berdiameternya
±15 mm, tengah ±10 mm, dan ujung ±5 mm. Batang yang masih muda berambut
kasar. Percabangan tanaman ini simpodial, dan berwarna hijau pucat
(Ramachandran, 1997).
Daunnya tunggal, mudah patah, bulat telur, tepi beringgit, ujung dan
pangkal membulat, berambut, panjang 6,5 - 7 cm, lebar 5,5 - 6,5 cm, panjang

Universitas Sumatera Utara

6

tangkai 2,4 - 3 cm berwarna hijau atau keunguan, pertulangan menyirip dan
berwarna hijau muda. Bagian bawah daun mempunyai banyak rambut glandular
yang menyebabkan tampilan berkilat (Prakash et al., 2012).
Tanaman ini memiliki bunga majemuk, bentuk tandan, berambut halus,
kelopak berbentuk mangkok dan setelah mekar pecah menjadi lima. Putik
panjangnya ± 17 mm, kepala putik berwarna coklat, benang sarinya empat, kepala
sarinya berwarna kuning, dan mahkotanya berbentuk mangkok yang berwarna
keunguan (Ramachandran, 1997).
Bangun-bangun tumbuh dengan baik pada daerah bercurah hujan tinggi
dan sedang antara 800-1200 mm/tahun. Tanaman ini sangat membutuhkan sinar
matahari yang banyak untuk pertumbuhannya, serta mampu hidup pada
ketinggian ± 100 m di atas permukaan laut hingga ± 1200 m di atas permukaan
laut (Prakash et al., 2012).
Kandungan Zat Gizi Tanaman Bangun-bangun
Menurut Damanik et al., (2014) komposisi zat gizi sop daun bangunbangun yang terkandung dalam 150 gram sebagai berikut:
Tabel 1. Kandungan zat gizi sop daun bangun-bangun yang terkandung dalam 150
gram
Zat Gizi
Rata-rata ± SD
Lemak (g)
16,3 ± 4,6
Protein (g)
2,4 ± 0,1
Karbohidrat (g)
5,3 ± 0,3
Air (g)
121,5 ± 14,7
Mineral
Seng
2,8 ± 0,1
Besi
6,8 ± 0,1
Kalsium
393,1 ± 6,5
Magnesium
124,1 ± 6,3
Pottasium
1219,2 ± 80,7

Universitas Sumatera Utara

7

Tanaman ini mengandung fenolik, terpenoid, nitrogen, vitamin, dan
metabolit

sekunder

yang

berfungsi

sebagai

antioksidan,

antimikroba,

anti-inflamasi, antitumor, antimutagen, antikanker, dan diuretik. Kandungan
nutrisi daun bangun-bangun menurut Sahay et al., (2011) adalah sebagai berikut:
Tabel 2. Kandungan zat gizi daun bangun-bangun
Komponen
Kandungan (% )
Protein
0,6
Vitamin
Asam askorbat
0,003
Tiamin
0,00008
Mineral
Kalsium
0,158
Fosfor
0,016
Kalium
0,138
Natrium
0,0047
Magnesium
0,088
Logam
Besi
0,262
Seng
0,0003
Tembaga
0,00012
Kromium
0,000022
Serat total
1,87
Fitat
0,00092
Oksalat
0,02
Klorofil-a
0,44 ± 0,13
Klorofil-b
0,29 ± 0,10
Xanthofil
0.356 mg/g berat kering
α- karoten
0.157 mg/g berat kering
β- karoten
0.0035 mg/g berat kering
Metabolit Sekunder Tanaman Bangun-bangun
Produk metabolisme detoksifikasi ini diduga akibat kemampuan tumbuhan
menghasilkan senyawa kimia sebagai senjata untuk mempertahankan diri dari
serangan hama dan faktor lingkungan yang terjadi pada tumbuhan. Jenis senyawa
metabolit sekunder yang dimetabolisme tergantung pada faktor biogenetik
tumbuhan. Senyawa kimia tersebut seperti alkaloid, flavonoid, triterpenoid, tanin,

Universitas Sumatera Utara

8

dan saponin. Senyawa-senyawa ini berperan sebagai bahan aktif yang dapat
kemungkinan dapat menghambat pertumbuhan bakteri (Darminto et al., 2009).
Konsentrasi metabolit sekunder dan komposisinya dipengaruhi oleh faktor
internal (genetik, kondisi kesehatan tanaman, umur) dan faktor eksternal
(lingkungan). Ekspresi sintesis senyawa metabolit sekunder tergantung pada
tahap perkembangan organ yang menghasilkannya. Hal-hal yang menentukan
keberhasilan produksi biomassa adalah sumber karbohidrat, suplai nitrogen,
kalium, vitamin dan ZPT (Fancy dan Rumpel, 2008).
Perbedaan morfologi pada tanaman yakni ada senyawa-senyawa tertentu
yang disintesis atau diakumulasikan hanya oleh org