III. BAHAN DAN METODE
3.1. Lokasi dan Waktu Penelitian
Penelitian dilaksanakan di Laboratorium Bioteknologi Tanah Departemen Ilmu Tanah dan Sumberdaya Lahan Fakultas Pertanian IPB dan Indonesian
Center for Biodiversity and Biotecnology ICBB, Nagrak, Situgede, Kabupaten
Bogor. Penelitian ini dilaksanakan sejak April sampai dengan Oktober 2010. 3.2. Bahan
dan Alat
Bahan dan alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah isolat ganggang terpilih dari koleksi ICBB dan beberapa jenis bahan kimia untuk
digunakan sebagai media biakan. Media biakan ganggang mikro yang digunakan adalah media standar BG11 dan media M4 Tabel 2. Media BG11 digunakan
dalam peremajaan serta tahap isolasi awal, kemudian digunakan Media M4 dalam kultivasi isolat ganggang mikro pada skala laboratorium maupun skala lapang.
Tabel 2. Komposisi Media Standar
Media BG 11 Komposisi
gL Media M4
Komposisi gL
NaNO
3
1.5 NaNO
3
1.5 K
2
HPO
4
0.04 KH
2
PO
4
0.049 MgSO
4
.7H
2
O 0.02 MgSO
4
0.0366 CaCl
2
.2H
2
O 0.036 CaCl
2
0.0271 Citric Acid
0.006 Citric Acid
0.006 Fe-ammonium citrate
0.006 Fe-ammonium citrate
0.006 EDTA
0.001 EDTA
0.001 Na
2
CO
3
0.075 Na
2
CO
3
0.02 Hara Mikro
1 ml Hara Mikro
1 ml
Komposisi Hara Mikro Komposisi Hara Mikro
H
3
BO
3
2.86 H
3
BO
3
2.86 MnCl
2
.4H
2
O 1.81 MnCl
2
0.1485 ZnSO
4
.7H
2
O 0.222 ZnSO
4
0.1245 Na
2
MoO
4
.2H
2
O 0.079 Na
2
MoO
4
.2H
2
O 0.0506
CuSO
4
.5H
2
O 0.39 CuSO
4
0.0506 CoNO
3 2
.6H
2
O 0.049 CoCl
2
.6H
2
O 0.043
Alat-alat yang digunakan adalah erlenmeyer, autoklaf, gelas ukur, shaker, laminar flow, spektrofotometer, timbangan, pipet mikro, kertas saring, ruang
asam, penangas, botol bening berbagai ukuran sebagai wadah biakan, aerator.
3.3. Pelaksanaan Penelitian
Bagan alur pelaksanaan penelitian disajikan pada Gambar 1.
Gambar 1. Bagan alur penelitian. Persiapan isolat ganggang mikro
4 isolat
Peremajaan ganggang mikro 4 isolat
Kultivasi isolat ganggang mikro dalam 50 ml media BG 11 laboratorium
Seleksi konsentrasi media optimum
Kultivasi isolat ganggang mikro dalam 2 L media
M4 Kultur ganggang mikro pada 150 L media
lapang, kolam raceways
Produksi biomassa Analisis produksi kadar
Nitrogen Total serta Protein
3.3.1.
Persiapan Isolat
Tahapan awal dilakukan dengan mempersiapkan isolat ganggang mikro yang dijadikan obyek perlakuan baik pada tahap kultivasi maupun kultur
ganggang mikro pada skala laboratorium maupun lapang. Isolat yang digunakan yaitu ICBB 9111, ICBB 9112, ICBB 9113 dan ICBB 9114. Isolat ganggang mikro
tersebut berasal dari koleksi Indonesian Center for Biodiversity and Biotecnology ICBB.
3.3.2.
Peremajaan Isolat
Tahapan peremajaan isolat ganggang mikro dilakukan terhadap 4 isolat yang sebelumnya telah ditumbuhkan di dalam wadah biakan. Tahap ini diawali
dengan persiapan media standar BG11. Kemudian 2 ml isolat yang telah dimurnikan diinokulasikan ke dalam media BG11 dengan volume 50 ml dalam
botol bening berukuran ± 100 ml. Setelah itu dilakukan proses inkubasi selama 3 minggu dengan cara digoyang shaker dan diletakkan di bawah sinar matahari
secukupnya.
3.3.3.
Kultivasi pada Media dengan Konsentrasi Berbeda
Tahapan ini dilakukan dengan mengkultivasi isolat ganggang ke dalam 5 media dengan konsentrasi hara yang telah dimodifikasi dari media standar M4.
Tujuan dari modifikasi untuk mendapatkan konsentrasi terbaik untuk pertumbuhan pada masing-masing ganggang mikro yang akan digunakan pada
tahap kultivasi selanjutnya. Konsentrasi dipilih berdasarkan laju pertumbuhan serta nilai Optical Density OD masing-masing ganggang. Kelima konsentrasi
media tersebut adalah: 0,75 kali komposisi media standar M4 0,75 M4, satu kali M4, 1,25 kali M4 1,25 M4, 1,50 kali M4 1,50 M4, dan 1,75 kali M4 1,75
M4. Kemudian 3 ml masing-masing isolat yang telah dimurnikan diinokulasikan kembali ke dalam 5 konsentrasi media M4 dengan volume 50 ml untuk melihat
pertumbuhan dari setiap isolat. Setelah itu dilakukan inkubasi selama 31 hari. Komposisi perlakuan media standar disajikan pada Tabel 3.
Tabel 3. Komposisi Perlakuan Konsentrasi Media M4
Media M4
Komposisi gl
Perlakuan 0.75 M4
1 M4 1,25 M4
1.5 M4 1.75 M4
Kategori