23
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
3.3.4 Pengujian Aktivitas Antimikroba Ekstrak Herba Kemangi
3.3.4.1 Sterilisasi Alat dan Bahan
Seluruh alat yang akan digunakan dicuci bersih dan dikeringkan. Tabung reaksi, gelas ukur dan erlenmeyer
ditutup mulutnya dengan kapas. Cawan petri dibungkus dengan kertas. Kemudian semuanya dimasukkan dalam
plastik tahan panas dan disterilkan dengan autoklaf pada suhu 121 C selama 30 menit. Pinset dan jarum ose disterilkan
dengan cara memijarkan pada pada api bunsen. Seluruh media pembenihan Nutrien Agar, Sabouraud
Dextrose Agar dan Sabouraud Dextrose Liquid disterilkan dengan autoklaf pada suhu 121 C selama 15 menit.
Pengerjaan aseptis dilakukan di dalam Laminar Air Flow yang sebelumnya telah dibersihkan dengan larutan alkohol
70, lalu disterilkan dengan lampu UV yang dinyalakan selama kurang lebih 2 jam sebelum digunakan Pertiwi,
2010.
3.3.4.2
Pembuatan Medium
1.
Nutrient Agar NA
Sebanyak 28 gram medium disuspensikan ke dalam 1 L akuades. Medium dipanaskan sampai mendidih agar
tercampur dengan sempurna. Kemudian didiamkan dan disterilkan di dalam autoklaf selama 15 menit, pada suhu
121 C, tekanan 1-2 atm.
2.
Sabouraud Dextrose Agar SDA
Sebanyak 65 gram SDA disuspensikan dengan 1 L akuades. Medium dipanaskan sampai mendidih agar
tercampur dengan sempurna. Kemudian didiamkan dan disterilkan di dalam autoklaf selama 15 menit, pada suhu
121 C, tekanan 1-2 atm.
24
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
3.
Sabouraud Dextrose Liquid SDL
Sebanyak 30 gram medium disuspensikan ke dalam 1 L akuades. Medium dipanaskan sampai mendidih agar
tercampur dengan sempurna. Kemudian didiamkan dan disterilkan di dalam autoklaf selama 15 menit, pada suhu
121 C, tekanan 1-2 atm. 3.3.4.3
Peremajaan Mikroba
1.
Peremajaan Bakteri Uji Staphylococcus aureus
Bakteri uji diremajakan dengan menggoreskan bakteri menggunakan jarum ose pada media agar miring
Nutrien Agar dan diinkubasi pada suhu 37 C selama 24
jam Nurcahyanti, Dewi Timotius, 2011.
2.
Peremajaan Jamur Uji Candida albicans
Jamur uji diremajakan dengan menggoreskan jamur menggunakan jarum ose pada media agar miring
Sabouraud Dextrose Agar dan diinkubasi pada suhu
ruang selama 3 hari Rathi, Bhaskar Patel 2010. 3.3.4.4
Pembuatan Suspensi Inokulum
1.
Pembuatan Suspensi Staphylococcus aureus
Staphylococcus aureus disuspensikan dalam larutan NaCl 0,9 steril. Kemudian suspensi tersebut diukur
absorbansinya menggunakan spektrofotometer pada panjang gelombang 600 nm sampai diperoleh absorbansi
0,1 setara dengan 1,5x10
6
CFUmL Kuete et al., 2011.
2.
Pembuatan Suspensi Candida albicans
Candida albicans disuspensikan ke dalam larutan NaCl 0,9 dan diukur absorbansinya sampai diperoleh
absorbansi 0,12-0,15 setara dengan 1,5 x 10
6
CFUmL saat diukur menggunakan spektrofotometer pada panjang
gelombang 530 nm dengan larutan NaCl 0,9 sebagai
blanko Rathi, Bhaskar Patel, 2010.
25
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
3.3.4.5 Pembuatan Larutan Uji
Kategori