CARA MEMBUAT MEDIA TUMBUH DALAM PENGEMBA

CARA MEMBUAT MEDIA TUMBUH DALAM PENGEMBANGAN MASSAL APH
GOLONGAN JAMUR
Pengendalian

Organisme

Pengganggu

Tumbuhan

(OPT)

dengan

mengedepankan prinsip ramah lingkungan dan tidak mengganggu keseimbangan alam
menuntut tanggungjawab yang besar dari para pelaku perlindungan perkebunan.
Penerapan PHT dengan memadukan berbagai cara pengendalian yang kompatibel
merupakan langkah yang tepat untuk mengendalikan OPT. Penerapan PHT tersebut
antara lain dengan memanfaatkan penggunaan Agens Pengendali Hayati untuk
pengendalian OPT.
Dalam perkembangannya ada dua macam teknologi untuk pengembangan

agens pengendali hayati jenis jamur yaitu media cair dan media padat. Pengembangan
media cair menggunakan media ekstrak kentang gula dan media padat menggunakan
media jagung.

Standart Operasional Pembuatan Media Agar :
1. Siapkan bahan berupa : Dextrose 20 gr, Bacto agar 20 gr, aquades 1L dan
kentang 200 gr.
2. Kentang di kupas, dicuci bersih dan dipotong dadu, kemudian masukkan dalam
beker glass, tambahakan 1L aquades.
3. Panaskan kentang dan aquades tersebut diatas kompor/hot plate, kemudian
disaring.
4. Tambahkan bacto agar dan dextrose kedalam beker glass aduk hingga larut.
5. Tambahkan volume air hingga 1 L.
6. Panaskan diatas kompor/hot plate, aduk terus hingga mengental (1-2 jam).
7. Siapkan test tube pada rak atau erlenmeyer yang telah disteril, serta spet 5ml.
8. Setelah media PDA agak mengental kompor dimatikan.
9. Ambil PDA dengan menggunakan spet sebanyak 5 ml dan tuangkan kedalam
testube, kemudian ditutup kapas dan aluminium foil.
10. Untuk erlenmeyer, tuangkan media PDA kedalam erlenmeyer sesuai dengan
yang kita inginkan, untuk digunakan sebagai stok, kemudian ditutup dengan

kapas dan aluminium foil.

11. Test tube dan erlenmeyer yang telah terisi PDA kemudian dibungkus plastik dan
disteril dengan menggunakan autoclave.
12. Setelah proses sterilisasi selesai, test tube kemudian dimiringkan.
13. Inkubasikan media tersebut selama 1-2 hari, apabila ada kontaminasi
disingkirkan.
14. Setelah diinkubasikan media siap digunakan untuk perbanyakan jamur.

15. Bahan untuk perbanyakan jamur meliputi isolat jamur Metarhizium anisopliae,
media agar dalam test tube, jarum inokulasi, alkohol 70%, bunsen dan tissue.
16. Sebelum digunakan terlebih dahulu LAF di sterilisasi dengan menggunakan
alkohol dan sinar UV.
17. Biarkan beberapa saat (1 jam) LAF siap digunakan.
18. Masukkan seluruh bahan dan peralatan kedalam LAF.
19. Nyalakan bunsen, bakar jarum inokulasi diatas bunsen sampai merah membara,
20. Diamkan beberapa saat sampai jarum inokulasi agak dingin.
21. Ambil isolat Metarhizium anisopliae dengan jarum inokulasi dan pindahkan ke
media miring.
22. Lakukan langkah tersebut diatas secara aseptis, tutup kembali test tube dengan

kapas dan aluminium foil.
23. Beri label, dan inkubasikan kurang lebih selama 21 hari.
24. Isolat jamur siap digunakan kembali.
25. Proses Pembuatan PDA (Potato Dextrose Agar) dapat dilihat pada bagan
dibawah ini:

Dextrose 20 gr

Bacto Agar
20 gr

Aquades 1 ltr

Kentang 200
gr

Masukkan Beaker Glass

Kupas
Cuci

Timbang
Iris Kecil2

Ekstrak Kentang

Panaskan
dengan hot
plate ± 600
Saring

Media PDA Siap
Pakai

Cek Volume s/d 1
liter
Panaskan
sampai
mendidih

Masukkan test

tube & Petridish

Sterilkan denan
autoclave 15
PS, 300
Didinginkan

Standart Pembuatan Media Padat (Jagung giling) :
1. Jagung giling dicuci dengan air mengalir sampai bersih.
2. Didihkan air dalam dandang. Setelah mendidih dan tampak uap air mengepul
masukkan jagung giling ke dalam dandang tersebut dan tutup rapat. Sesekali
tuangkan sedikit air mendidih dan diaduk sampai merata.
3. Setelah matang angkat dan tiriskan diatas angsang, tunggu sampai jagung giling
tersebut agak dingin.
4. Masukkan jagung giling tersebut kedalam plastik tahan panas sebanyak 100
gram.
5. Gulung plastik tersebut dan masukkan ke dalam autoclave untuk disteril.

6. Setelah disteril, buka autoclave dan biarkan sampai dingin.
7. Siapkan entkas, bunsen,alkohol, kapas, dll untuk inokulasi.

8. Pindahkan inokulum dari test tube ke media jagung giling.
9. Lakukan langkah tersebut diatas secara aseptis.
10. Tutup rapat dan inkubasikan sampai jamur tumbuh.
Proses Pembuatan media Jagung dapat dilihat pada bagan di bawah ini:

ISOLAT

Inokulasi

Masukkan Kantong
Plastik @ 100-200gr

Jagug Giling

Media Jagung siap
Pakai
Sterilkan
Autoclave
15 psi,
Selama

45’

Cuci Bersih
Kukus Pakai
dandan

1
2
Taburkan pada
media jagung

Inkuba
sikan
2-4
mingg
u

Fermentor

Inokulum siap

aplikasi

Inkubas
ikan ±
2-4
minggu

Inokulum siap aplikasi

Standart Pembuatan Media Cair (Ekstrak Kentang Gula) :
1. Kentang dibersihkan, dipotong dadu (1x1x1cm2) dan timbang sebanyak 150 gr.
2. Siapkan beker glass yang berisi 1 L aquades.
3. Masukkan kentang kedalam beaker glass yang berisi aquades.

4. Panaskan kentang sampai lunak (± 20 menit), kemudian disaring dan ambil
ekstraknya saja.
5. Tambahkan 10 gr gula pasir, aduk sampai larut.
6. Ekstrak kentang gula (EKG) kemudian disaring kemudian disterilkan.
7. Pindahkan EKG kedalam erlenmeyer steril. inokulasikan isolat jamur tersebut
kedalam erlenmeyer.

8. Siapkan erlenmeyer yang berisi larutan KMnO4, glasswool pada tabung pastik,
selang dan aerator.
9. Rangkai alat-alat tersebut seperti pada gambar dibawah ini :

5

2
1

3
4

Keterangan :
1. Aquades
2. EKG
3. KMnO4
4. Aerator
5. Glasswool