TOKSISITAS DAN AKTIVITAS ANTIOKSIDAN SECARA IN VITRO EKSTRAK ETANOL DAUN DAN KULIT BATANG BINTANGUR (Calophyllum rigidum Miq.) Toxicity and in vitro antioxidant activity of ethanolic extracts of bintangur (Calophyllum rigidum Miq.) leaf and stem bark

  

TOKSISITAS DAN AKTIVITAS ANTIOKSIDAN SECARA IN VITRO

EKSTRAK ETANOL DAUN DAN KULIT BATANG BINTANGUR

(Calophyllum rigidum Miq.)

  

Toxicity and in vitro antioxidant activity of ethanolic extracts of

bintangur (Calophyllum rigidum Miq.) leaf and stem bark

• * , Partomuan Simanjuntak * Eris Septiana

• Pusat Penelitian Bioteknologi LIPI

• e-mail : septiana.eris@gmail.com

  

ABSTRACT

Antioxidant and toxicity assays still become interesting topic due to their capability to inhibit free

radical without toxic effect for human. One of the plants that have antioxidant activity is from the

genus Calophyllum or commonly known as bintangur trees. The aim of this study is to evaluate in

vitro antioxidant activity and toxicity of leaf and stem bark ethanolic extracts of bintangur tree

(Calophyllum rigidum). In vitro antioxidant activity assay was carried out by free radical

scavenging DPPH method whereas brine shrimp lethality test was used to determine toxicity of the

extracts. The results of this study showed that the ethanolic extracts of leaf and stem bark of

bintangur has antioxidant activities with IC ^{50 values at 33.92 and 7.50 mg/L respectively. The} ethanolic extracts of leaf and stem bark of bintangur also has LC ^{50 values at 627.97 and 1063.17}

mg/L respectively. Therefore, ethanolic extract of stem bark has better antioxidant activity and

lesser toxicity than ethanolic extract of leaf of bintangur based on in vitro assay.

  Keywords : antioxidant, toxicity, DPPH, BSLT, Calophyllum rigidum

ABSTRAK

  Uji antioksidasi sekaligus uji toksisitas masih merupakan tema yang menarik karena kemampuannya dalam meredam radikal bebas tanpa efek toksik bagi manusia. Salah satu tanaman yang memiliki aktivitas antioksidan ialah dari genus Calophyllum atau yang biasa disebut sebagai pohon bintangur. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antioksidan dan toksisitas secara in vitro dari ekstrak etanol daun dan kulit batang bintangur (Calophyllum rigidum). Pengujian aktivitas antioksidan in vitro dilakukan menggunakan metode peredaman radikal bebas DPPH. Sedangkan uji toksisitas ekstrak secara in vitro menggunakan metode uji kematian larva udang Artemia salina (BSLT). Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun dan kulit batang bintangur memiliki aktivitas antioksidan dengan nilai IC ⁵⁰ masing-masing sebesar 33,92 dan 7,50 mg/L. Uji toksisitas menunjukkan bahwa ekstrak daun dan kulit batang bintangur memiliki LC ^{50 masing-masing sebesar 627,97 dan 1063,17 mg/L.} Oleh karena itu ekstrak etanol kulit batang bintangur Calophyllum rigidum mempunyai aktivitas antioksidan yang lebih baik serta lebih tidak toksik dibandingkan ekstrak etanol daun berdasarkan pengujian secara in vitro.

  Kata Kunci : antioksidan, toksisitas, DPPH, BSLT, Calophyllum rigidum

TOKSISITAS DAN AKTIVITAS ANTIOKSIDAN SECARA IN VITRO EKSTRAK ETANOL DAUN DAN KULIT BATANG

  BINTANGUR (Calophyllum rigidum Miq.) In Vitro Toxicity and Antioxidant Activity of Ethanolic Extracts of Bintangur (Calophyllum rigidum Miq.) Leaf and Stem Bark

  PENDAHULUAN

  Antioksidan saat ini masih merupakan tema yang menarik karena kemampuannya dalam meredam radikal bebas dan menghambat peroksidasi lipid untuk melindungi tubuh manusia dari serangan beberapa penyakit akibat reaksi radikal. Radikal bebas memberikan dampak terhadap patogenesis dari beberapa penyakit pada manusia seperti arteriosklerosis, kanker, diabetes melitus, kerusakan hati, inflamasi, kerusakan jaringan kulit, jantung koroner dan arthritis (Moon, et al., 2006). Penggunaan antioksidan sintetis untuk mencegah kerusakan akibat radikal bebas telah dilaporkan menyebabkan timbulnya efek samping yang toksik sehingga perlu dilakukan pencarian sumber antioksidan baru dari alam (Radulovic et al., 2007). Salah satu bahan alam yang dilaporkan mempunyai aktivitas antioksidan ialah senyawa golongan polifenolik yang dapat ditemukan pada tanaman (Miller et al., 1995).

  Salah satu tanaman yang memiliki aktivitas antioksidan ialah dari genus

  Calophyllum atau yang biasa disebut sebagai

  pohon bintangur. Tanaman ini merupakan tanaman pohon yang sangat penting nilai manfaatnya berupa kayu berukuran besar (Taher et al., 2007). Penelitian tentang manfaat tanaman Calophyllum dari jenis selain C. rigidum sebagai antioksidan telah banyak dilakukan meliputi bagian kulit batang dan daun. Beberapa diantaranya ialah Calophyllum enervosum,

  C. rubiginosum, C. brasiliense, C. sclerophyllum,

  dan C. inophyllum (Taher et al., 2007; Taher

  et al., 2010; Blanco-Ayala et al., 2013; Katrin et al., 2014; Dutta and Ray, 2014).

  Pengobatan modern saat ini tidak hanya terfokus pada kandungan senyawa aktif suatu tanaman obat dalam mengobati suatu penyakit, akan tetapi juga harus diketahui toksisitasnya terhadap manusia. Efek toksik dapat terjadi pada organ tubuh seperti hati dan ginjal. Tingkat toksisitas suatu bahan obat berhubungan dengan interaksi senyawa kimia toksik dengan sel hati dan ginjal yang berfungsi sebagai organ penyaring (Bello et al., 2016). Oleh karena itu, pengujian tentang toksisitas sebuah bahan obat sangat penting dilakukan guna perlindungan penggunanya.

  Penggunaan bintangur (C. rigidum) sebagai obat tradisional telah dilakukan oleh beberapa masyarakat di Indonesia. seperti masyarakat di Kalimantan Barat yang memanfaatkan getahnya untuk mengobati koreng (Sangat, dkk. 2000). Akan tetapi belum ada penelitian tentang manfaat antioksidan dan toksisitas tanaman bintangur (C. rigidum). Oleh karena itu, penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antioksidan dan toksisitas secara

  in vitro dari ekstrak etanol daun dan kulit batang bintangur (C. rigidum).

METODE PENELITIAN

  Penelitian dilaksanakan pada bulan Mei sampai dengan Agustus 2017 di Laboratrorium Kimia Bahan Alam, Pusat Penelitian Bioteknologi LIPI, Cibinong, Jawa Barat. Sampel tanaman bintangur berupa bagian daun dan kulit batang (Gambar 1) diperoleh dari kecamatan Tebing, Kabupaten Karimun, Propinsi Kepulauan Riau. Simplisia tanaman bintangur berupa ranting dan daun terlebih dahulu dideterminasi di Herbarium Bogoriense, Pusat Penelitian Biologi, LIPI, Cibinong, Jawa Barat.

  Proses ekstraksi dilakukan dengan maserasi. Sebanyak 50 g simplisia daun dan 300 g simplisia kulit batang bintangur masing-masing direndam dengan 1 L etanol teknis 96% dalam toples kaca selama 24 jam. Perendaman masing-masing bagian dilakukan sebanyak tiga kali. Filtrat dari

  % Penghambatan = (A

• –B)/ A x 100 % .… (1) Keterangan: A = serapan DPPH 0,4 mM tanpa bahan uji

  A

  10 mL sehingga didapatkan

  Dipipet sebanyak 2 mL dari larutan 2000 mg/L kemudian ditambahkan air laut sampai 20 mL untuk mendapatkan larutan ekstrak 200 mg/L. Dipipet sebanyak 2 mL dari larutan 200 mg/L kemudian ditambahkan air laut sampai 20 mL untuk mendapatkan larutan ekstrak 20 mg/L. Dipipet sebanyak 5 mL masing-masing larutan ekstrak 2000, 200, dan 20 mg/L ke dalam wadah uji. Sebanyak total 30 ekor larva udang A. salina untuk masing-masing konsentrasi ekstrak dimasukkan ke dalam tiga wadah uji yang telah berisi larutan bahan uji kemudian ditambahkan air laut sampai

  menggunakan larva udang Artemia salina (Meyer et al., 1982). Air laut dimasukkan ke dalam bejana yang dibagi menjadi dua ruangan dengan sekat. Sejumlah 100 mg telur A. salina dimasukkan ke dalam salah satu ruang kemudian ditutup. Sisi ruang yang lain dibiarkan terbuka dengan diberi penerangan lampu selama 48 jam. Telur yang menetas dan berubah jadi larva digunakan dalam penelitian. Sebanyak masing-masing 40 mg ekstrak etanol daun dan kulit batang bintangur dilarutkan dalam 20 mL air laut sebagai larutan 2000 mg/L.

  Uji Toksisitas. Pengujian toksisitas in vitro

  B = serapan DPPH 0,4 mM dengan bahan uji

  30 menit. Seluruh pengujian dilakukan tiga kali pengulangan. Serapan seluruh sampel kemudian diukur pada panjang gelombang 517 nm. Aktivitas antioksidan didapatkan dengan menggunakan persamaan (1) dan nilai IC ⁵⁰ yang merupakan bilangan yang menunjukkan konsentrasi sampel uji yang mampu menghambat proses oksidasi sebesar 50%. Nilai IC ^{50 diperoleh dengan} cara dibuat kurva linear antara konsentrasi larutan uji (sumbu x) dan % aktivitas antioksidan (sumbu y) dan dihitung berdasarkan persamaan regresi y= ax + b, dengan nilai y=50.

  Eris Septiana*, Partomuan Simanjuntak*

  C) (Merck) sebagai baku pembanding dengan konsentrasi sebesar 1, 3, 5, 7, dan 9 mg/L, serta larutan blanko (larutan DPPH (Sigma) 0,4 mM tanpa penambahan ekstrak uji). Seluruh sampel larutan uji, blanko dan asam askorbat (vitamin C) diinkubasi pada suhu 37 °C selama

  antioksidan dilakukan dengan metode peredaman radikal bebas dengan menggunakan senyawa DPPH (Tiwari et al., 2006) dengan modifikasi pada panjang gelombang dari 515 nm mejadi 517 nm. Konsentrasi larutan uji untuk ekstrak etanol 96 % kulit batang bintangur sebesar 5, 10, 15, 20, dan 25 mg/L, sedangkan untuk ekstrak etanol 96 % daun bintangur sebesar 5, 10, 25, 50, dan 100 mg/L. Asam askorbat (vitamin

  Gambar 1. Bagian daun (A) dan kulit batang (B) tanaman bintangur (Calophullum rigidum) Uji Aktivitas Antioksidan. Uji aktivitas

  didapatkan ekstrak kental etanol daun dan kulit batang bintangur.

  rotary vacuum evaporator hingga

  masing-masing bagian diuapkan dengan

  B

TOKSISITAS DAN AKTIVITAS ANTIOKSIDAN SECARA IN VITRO EKSTRAK ETANOL DAUN DAN KULIT BATANG

  ^14,82 25 50 100 ^{26,15 47,11 85,58 93,21} a k ti v it a s a n ti o k si d a n ( % ) konsentrasi ekstrak (mg/L)

  Keterangan: ^* (Minami, et al., 1994) Penelitian dengan menggunakan

  Calophyllum rigidum baik di Indonesia

  20

  40

  60

  80 100

  5

  10

  20

  Aktif 3. Vit. C 3,56±0,265 Sangat

  40

  60

  80 100

  5

  10

  15

  20

  ^82,59 25 ^{42,43 94,29 96,6 97,57} a k ti v it a s a n ti o k si d a n ( % ) konsentrasi ekstrak (mg/L)

  Aktif

  BINTANGUR (Calophyllum rigidum Miq.) In Vitro Toxicity and Antioxidant Activity of Ethanolic Extracts of Bintangur (Calophyllum rigidum Miq.) Leaf and Stem Bark

  konsentrasi akhir bahan uji sebesar 1000, 100, dan 10 mg/L. Kelompok kontrol berisi air laut dan larva udang tanpa penambahan bahan uji. Seluruh pengujian diinkubasi selama 24 jam pada suhu ruang. Setelah inkubasi, larva dihitung jumlah yang mati dan hidup dalam masing-masing pengujian.

  Ekstrak etanol kulit batang memiliki aktivitas yang lebih tinggi dengan ditunjukkan oleh nilai IC ^{50 yang lebih rendah} dibanding dengan ekstrak etanol daun. Akan tetapi keduanya masih lebih rendah aktivitasnya dibandingkan dengan kontrol positif vitamin C. Kekuatan aktivitas antioksidan dapat dikelompokkan ke dalam kategori sangat aktif jika memiliki IC ^{50 <10} mg/L, aktif jika memiliki IC ^{50 <100 mg/L,} dan tidak aktif jika memiliki IC ^{50 >100 mg/L}

  Nilai LC ^{50 (kadar senyawa yang mampu} membunuh larva hingga 50%) dihitung menggunakan analisis probit.

  HASIL DAN PEMBAHASAN Aktivitas Antioksidan

  Determinasi simplisia menunjukkan bahwa simplisia yang digunakan adalah

  Calophyllum rigidum (Miq.) dari suku

  Clusiaceae. Rendemen ekstrak etanol daun

  C. rigidum sebesar 8,2% lebih tinggi

  dibandingkan dengan bagian kulit batang sebesar 7,6%. Hasil pengujian aktivitas antioksidan ekstrak etanol daun dan kulit batang bintangur dapat dilihat pada Gambar 2 dan 3 serta Tabel 1.

  Gambar 2. Aktivitas antioksidan ekstrak etanol daun tanaman bintangur (Calophullum rigidum)

  (Minami, et al., 1994). Oleh karena itu ekstrak etanol kulit batang memiliki aktivitas antioksidan yang sangat aktif, sedangkan ekstrak etanol daun aktivitas antioksidannya aktif.

  Ekstrak etanol daun 33,92±0,082 Aktif 2.

  Gambar 3. Aktivitas antioksidan ekstrak etanol kulit batang tanaman bintangur (Calophullum rigidum)

  Penggunaan metode peredaman DPPH merupakan metode yang umum digunakan dalam penelitian uji antioksidan.

  Prinsip kerja metode ini ialah adanya interaksi antioksidan dengan DPPH yang menyebabkan senyawa DPPH yang berwarna ungu akan dirombak menjadi senyawa

  α, α-diphenyl-β- picrylhydrazyl

  yang berwarna kuning (Fitriana, et al., 2016). Efek antioksidan dalam metode peredaman radikal bebas DPPH terjadi karena kemampuan suatu senyawa dalam mendonasikan hidrogen (Babu, et al., 2013).

  Tabel 1. Aktivitas antioksidan bintangur

  No. Sampel

  IC ^{50 ±SD} (mg/L) Aktivitas

• ^* 1.

  Ekstrak etanol kulit batang 7,50±0,076 Sangat Eris Septiana*, Partomuan Simanjuntak*

  maupun di dunia belum banyak dipublikasikan. Padahal keberadaan tanaman ini di tempat pengambilan sampel yaitu di daerah Kabupaten Karimun begitu banyak dan belum dimanfaatkan sebagai obat tradisional oleh masyarakat sekitar. Sampai saat ini hanya satu jurnal yang membahas tentang manfaat tanaman C.

  merupakan metode yang ekonomis, membutuhkan jumlah bahan uji yang sedikit, cepat, dan dapat digunakan untuk mendeteksi bahan toksik dari ekstrak tanaman (Gadir, 2012). Selain itu, metode BSLT memiliki korelasi positif dengan pengujian secara in vivo menggunakan hewan coba (Naidu et al., 2014).

  60

  40

  20

  19,06 mg/L terhadap larva A. salina (Putra, dkk., 2016). Nilai ini jauh dibawah nilai LC ⁵⁰ ekstrak etanol daun maupun kulit batang C.

  nagassarium memiliki nilai LC ^{50 sebesar}

  tetapi, penelitian tentang toksisitas terhadap larva udang telah dilakukan pada ekstrak dari jenis Calophyllum yang lain. Ekstrak etanol daun tanaman C.

  rigidum belum pernah dilakukan. Akan

  Keterangan: ^* (Meyer, et al., 1982) Seperti halnya uji aktivitas antioksidan, uji toksisitas terhadap larva udang A. salina dari tanaman bintangur C.

  Ekstrak etanol kulit batang 1063,17 Tidak toksik

  Ekstrak etanol daun 627,97 Toksik 2.

  No. Sampel LC ⁵⁰ (mg/L) Toksisitas

• ^* 1.

  Tabel 2. Toksisitas tanaman bintangur

  Gambar 4. Toksisitas ekstrak etanol daun dan kulit batang tanaman bintangur (Calophullum rigidum) terhadap larva udang Artemia salina

  Shrimp Toxicity Test (BSLT). Metode ini

  rigidum untuk kesehatan. Takahashi et al.

  Hasil uji toksisitas menggunakan larva udang A. salina dapat dilihat pada Gambar 4 dan Tabel 2. Ekstrak etanol daun bintangur memiliki toksisitas yang lebih tinggi dibandingkan dengan ekstrak etanol kulit batang. Suatu ekstrak kasar dikatakan toksik jika memiliki LC ^{50 < 1000 mg/L dan} tidak toksik jika memiliki nilai LC ^{50 > 1000} mg/L (Meyer, et al., 1982). Kandungan bahan toksik dalam suatu bahan obat sangat penting terutama menyangkut pada perlindungan kesehatan masyarakat. Pesatnya perkembangan tanaman obat mengharuskan telaah lebih lanjut tentang aspek toksisitas untuk memastikan keamanan dan efektivitas bahan alam berkhasiat obat. Pengujian toksisitas suatu bahan obat dapat dilakukan secara in vitro menggunakan metode Brine

  Toksisitas Ekstrak

  yang sedikit lebih kuat dibandingkan dengan Calophyllum rigidum dalam penelitian ini yaitu dengan nilai IC ^{50 sebesar} 7,50 mg/L.

  Calophyllum tersebut memiliki aktivitas

  yang sangat aktif dengan nilai IC ^{50 masing-} masing sebesar 5,189 dan 3,02 mg/L (Lopa, 2013; Aritonang, 2013). Kedua jenis

  lanigerum memiliki aktivitas antioksidan

  Ekstrak etanol kulit batang C. canum dan C.

  Calophyllum untuk antioksidan telah banyak dilakukan seperti C. canum dan C. lanigerum.

  Meskipun demikian, beberapa penelitian menggunakan tanaman genus

  Leishmania penyebab penyakit Leishmaniasis.

  kemampuan dalam membunuh protozoa

  rigidum) asal Myanmar mempunyai

  (2004) melaporkan bahwa ekstrak metanol kulit batang C. kunstleri (sinonim dari C.

  80 100 10 100 1000 ^{10 16,7 80 30 33,4 46,7} k em a ti a n l a rv a ( % ) konsentrasi ekstrak (mg/L) daun kulit batang

TOKSISITAS DAN AKTIVITAS ANTIOKSIDAN SECARA IN VITRO EKSTRAK ETANOL DAUN DAN KULIT BATANG

  BINTANGUR (Calophyllum rigidum Miq.) In Vitro Toxicity and Antioxidant Activity of Ethanolic Extracts of Bintangur (Calophyllum rigidum Miq.) Leaf and Stem Bark rigidum pada penelitian ini yaitu masing- masing sebesar 627,97 dan 1063,17 mg/L.

  Lopa, DS. 2013. Isolasi, Uji Aktivitas Antioksidan dan Karakterisasi Senyawa Aktif dari Kulit Batang Calophyllum

  Fitriana, WD., Ersam, T., Shimizu, K., and Fatmawati, S. 2016. Antioxidant Activity of Moringa oleifera Extracts. Indonesian

  Journal of Chemistry, 16(3): 297-301.

  Gadir, SA. 2012. Assessment of Bioactivity of Some Sudanese Medicinal Plants Using Brine Shrimp (Artemia salina) Lethality Assay. Journal of Chemical and

  Pharmaceutical Research, 4(12): 5145- 5148.

  Katrin, Elya B., Mahamufrudho A., and Rissyelly. 2014. Radical Scavenging Activity of Extract, Fraction and Chemical Compound from Calophyllum

  sclerophyllum Vesq. Stembark by Using 1,1-Diphenyl-2-Pycril Hydrazil (DPPH). International Journal of PharmTech Research, 6(1): 396-402.

  canum Hook F. Skripsi. Universitas Indonesia: Depok.

  Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun dan kulit batang C. rigidum lebih tidak toksik dibandingkan dengan ekstrak etanol daun C. nagassarium.

  Meyer BN., Ferrigni NR., Putnam JE., Jacobsen LB., Nichols DE., and McLaughlin JL. 1982. Brine Shrimp: a Convenient General Bioassay for Active Plant Constituents. Journal of Medicinal Plants Research, 45(5): 31-34.

  Miller MJ., Diplock AT., and Rice-Evan CA.

  1995. Evaluation of the Total Antioxidant Activity as a Marker of the Deterioration of Apple Juice on Storage. Journal of

  Agricultural and Food Chemistry, 43(7): 1794-1801.

  Moon BS., Ryoo IJ., Yun BS., Bae KS., Lee KD., Yoo ID., and Kim JP. 2006. Glyscavins A,B and

  C, New Phenolic Glycoside

  Journal of Pharma and Bio Sciences, 5(3): 441-450.

  and Flavonoid Contents. International

  inophyllum in Relation to Total Phenol

  Antioxidant Potentials of Leaf Aqueous and Methanolic Extracts of Calophyllum

   Dutta S, and Ray S. 2014. Evaluation of

  BMC Complementary & Alternative Medicine, 13:262 doi:

  KESIMPULAN

  Ekstrak etanol kulit batang bintangur Calophyllum rigidum mempunyai aktivitas antioksidan yang lebih baik serta lebih tidak toksik dibandingkan ekstrak etanol daun berdasarkan pengujian secara in vitro.

UCAPAN TERIMA KASIH

  Penulis mengucapkan terima kasih kepada PKT Kebun Raya Bogor atas kegiatan Ekspedisi Kebun Raya Batam 2017.

DAFTAR PUSTAKA

  Medical Sciences, 4(1):

  Bello I., Bakkouri AS., Tabana YM., Al-Hindi

  Babu, D., Gurumurthy, P., Borra, SK., and Cherian, KM. 2013. Antioxidant and Free Radical Scavenging Activity of Triphala Determined by Using Different In Vitro Models. Journal of Medicinal Plants Research, 7(39): 2898-2905.

  Skripsi. Universitas Indonesia: Depok.

  Aritonang, RRY. 2013. Uji Aktivitas Antioksidan dan Identifikasi Golongan Senyawa Kimia Ekstrak Etanol dan Fraksi Teraktif Kulit Batang Bintangur Belulang Calophyllum lanigerum miq.

  4 doi:

  Blanco-Ayala T., Lugo-Huitron R., Serrano- Lopez EM., Reyes-Chilpa R., Rangel-Lopez

  E., Pineda B., Medina-Compos ON., Sanchez-Chapui L., Pinzon E., Cristina TS., Silva-Adaya D., Pedraza-Chaverri J., Rios C., Cruz VPD, and Torres-Ramos M. 2013.

  Antioxidant Properties of Xanthones from Calophyllum brasiliense: Prevention of Oxidative Damage Induced by FeSO ⁴ .

  B., Al-Mansoub MA., Mahmud R., and Asmawi MZ. 2016. Acute and Sub-Acute Toxicity Evaluation of the Methanolic Extract of Alstonia scholaris Stem Bark. Eris Septiana*, Partomuan Simanjuntak*

  Antioxidant Produced by a Fungus

  Obat Indonesia (Etnofitomedika). Pustaka Populer Obor. Indonesia.

  Tiwari V., Shanker R., Srivastava J., and Vanker PS. 2006. Change in Antioxidant Activity of Spices-Turmeric and Ginger on Heat Treatment. Electronic Journal of

  Agatsuma, Y., and Sekita, S. 2004. In Vitro Screening of Leishmanicidal Activity in Myanmar Timber Extracts. Biological and Pharmaceutical Bulletin, 27(6): 921-925.

  93-98. Takahashi, M., Fuchino, H., Satake, M.,

  Calophyllum enervosum. Iranian Journal of Pharmacology & Therapeutics, 6(1):

  Antimicrobial, Antioxidant and Cytotoxic Activities of Garcinia eugenifolia and

  Taher M., Idris MS., and Arbain D. 2007.

  rubiginosum. American Journal of Applied Sciences, 7(10): 1305-1309.

  Taher M., Attoumani N., Susanti D., Ichwan SJA., and Ahmad F. 2010. Antioxidant Activity of Leaves of Calophyllum

  21. Sangat HM., Zuhud EAM., dan Damayanti EK. 2000. Kamus Penyakit dan Tumbuhan

  Mycelia sterilia F020054. Journal of Antibiotics. 59(11): 735-739.

  Stojanovic, G., Smelcerovic, A., Spiteller, M. and Asakawa, Y. 2007. Screening of In Vitro Antimicrobial and Antioxidant Activity of Nine Hypericum Species from the Balkans. Food Chemistry, 103(1): 15-

  96-102. Radulovic, N., Stankov-Jovanovic, V.,

  nagassarium Burm.f.) Terhadap Larva Artemia salina Leach. Jurnal Kimia, 10(1):

  2016. Isolasi dan Identifikasi Senyawa Sitotoksik Daun Nagasari (Calophyllum

  13(1): 101-107. Putra, IWPE., Santi, SR., dan Rustini, NL.

  Mentha spicata L (Lamiaceae). Tropical Journal of Pharmaceutical Research,

  2014. Acute Oral Toxicity and Brine Shrimp Lethality of Methanol Extract of

  Naidu, JR., Ismail, R., and Sasidharan, S.

  Environmental, Agricultural and Food Chemistry, 5(2): 1313-1317.