Identifikasi Fragmen DNA Genomik Kelapa Sawit (Elaeis guineensis Jacq.) Hasil PCR (Polymerase Chain Reaction) Menggunakan Primer Spesifik untuk Beta Karoten

46

LAMPIRAN
Lampiran 1. Profil elektroforegram perbandingan primer SSR-3574
33D 33A 34D 34A 35D 35A 36D 36A 15D 15B 100bp 16D 16B 17D 17B 18D 18B

6D

6B

7D

Keterangan: M = DNA ladder 1kb (Marker), A = isolasi DNA berasal dari bagian akar,
D = isolasi DNA berasal dari bagian daun, B = isolasi DNA berasal dari bagian
buah

Lampiran 2. Profil elektroforesis perbandingan primer SSR-3574
7B

9D


9B 19D 19B 21D 21B 23D 23B 25D 100bp 25B 28D 28B 30D 30B 31D 32D

Keterangan: M = DNA ladder 1kb (Marker), D = DNA stok berasal dari bagian daun,
B = DNA stok berasal dari bagian buah P = DNA stok berasal dari bagian pollen,
O = DNA stok berasal dari bagian bunga betina

Universitas Sumatera Utara

47

Lampiran 3. Profil elektroforegram pengulangan proses PCR dengan Primer
Beta pada sampel bagian akar
M

33A 34A

35A 36A

19B


19B

β

Keterangan: M = DNA ladder 1kb (Marker), A = isolasi DNA berasal dari bagian akar,
B = isolasi DNA berasal dari bagian buah

Lampiran 4. Profil elektroforegram yang dianalisis menggunakan UVITEC
FIREREADER

Universitas Sumatera Utara

48

Lampiran 5. Profil elektroforegram yang dianalisis menggunakan UVITEC
FIREREADER

Lampiran 6. Pembuatan larutan stok dan buffer
A. Pembuatan Larutan Stok



CTAB 5 % (100 ml): Timbang NaCl sebanyak 2.0 gram dan CTAB
sebanyak 5.0 gram. Masukkan bahan kimia ke dalam erlenmeyer dan
ditambahkan 100 ml aquades. Aduk campuran larutan dengan menggunakan
stirrer kemudian diletakkan diatas hotplate.



Tris HCl 1 M pH 8.0 (100 ml): Timbang Tris sebanyak 12.114 gram.
Masukkan Tris ke dalam erlenmeyer dan ditambahkan 80 ml aquades. Aduk
campuran larutan dengan menggunakan stirrer kemudian diletakkan diatas
hotplate. Selanjutnya, ditambahkan 4.2 ml HCl pekat sedikit demi sedikit
sampai pH mencapai 8. Masukkan ke dalam gelas ukur, kemudian volume
ditepatkan dengan aquades hingga volume larutan menjadi 100 ml.



Tris HCl 1 M pH 7.4 (50 m): Timbang Tris

sebanyak 6.057 gram.


Masukkan Tris ke dalam erlenmeyer dan ditambahkan 30 ml aquades. Aduk

Universitas Sumatera Utara

49

campuran larutan dengan menggunakan stirrer kemudian diletakkan diatas
hotplate. Selanjutnya, ditambahkan NaOH 2.5 M sedikit demi sedikit sampai
pH mencapai 7.4. Masukkan ke dalam gelas ukur, kemudian volume
ditepatkan dengan aquades hingga volume larutan menjadi 50 ml.


EDTA 0.5 M pH 8.0 (100 ml) : Timbang EDTA sebanyak 18.612 gram dan
NaOH 2.0 gram. Masukkan bahan kimia ke dalam erlenmeyer dan
ditambahkan 80 ml aquades. Aduk campuran larutan dengan menggunakan
stirer kemudian diletakkan diatas hotplate. Selanjutnya, ditambahkan HCl
pekat sedikit demi sedikit sampai pH mencapai 8. Masukkan ke dalam gelas
ukur, kemudian volume ditepatkan dengan aquades hingga volume larutan
menjadi 100 ml.




NaCl 5 M(l00 ml): Timbang NaCl sebanyak 29.22 gram. Masukkan ke
dalam erlenmeyer dan ditambahkan 80 ml aquades. Aduk campuran larutan
dengan menggunakan stirrer kemudian diletakkan diatas hotplate. Masukkan
ke dalam gelas ukur, kemudian volume ditepatkan dengan aquades hingga
volume larutan menjadi 100 ml.

**Semua bahan di atas disterilkan dengan menggunakan autoklaf kecuali CTAB
5%.
B. Pembuatan Larutan Buffer


Buffer Ekstraksi/CTAB (100 ml): Campurkan 40 ml CTAB 5%, 25.1 ml
NaCl 5 M, 4 ml EDTA 0.5 M pH 8.0, 10 ml Tris HCl 1 M pH 8.0 dan 20.8 ml
aquades.

Universitas Sumatera Utara


50



Buffer TAE 50 X (100 ml): Campurkan 24.2 ml Tris HCl 1 M pH 7.4, 5.7
ml Asam Asetat Glasial, 10 ml EDTA 0.5 M PH 8.0, dan aquades hingga
volume larutan menjadi 100 ml.



Buffer TAE 1X (500 ml): Campurkan 10 ml Buffer TAE 50 X dan 490 ml
aquades.



Buffer TE (50 ml): Campurkan 0.5 ml Tris HCl 1 M pH 8.0, 0.1 m lEDTA
0.5 M pH 8.0 dan 49.4 ml aquades.




Kloroform Isoamilalkohol 24 : 1 (50 ml): Campurkan 48 ml Kloroform dan
2 ml Isoamilalkohol.



Ethanol 70 % (100 ml): Campurkan 70 ml Etanol dan 30 ml aquades.

Universitas Sumatera Utara

51

Lampiran 7. Hasil uji kuantitas dengan nanospektrometer
Sampel
A260/A280
Konsentrasi (ng/µl)
6D
2.38
765.60
6B
2.01

244.90
7D
2.45
616.60
7B
2.09
255.00
9D
1.83
172.50
9B
2.15
500.60
15D
2.06
407.00
15B
2.04
422.50
16D

2.04
817.60
16B
2.06
400.10
17D
2.57
739.40
17B
2.08
712.50
18D
1.63
257.20
18B
2.01
66.60
19D
2.36
692.10

19B
1.78
60.40
21D
1.78
270.80
21B
3.17
336.40
23D
1.90
226.90
23B
2.11
597.80
25D
2.04
471.70
25B
2.08

606.30
28D
1.88
570.30
28B
2.11
468.30
30D
1.94
929.90
30B
2.15
786.80
31D
2.00
338.70
31P
1.95
53.50
32D
2.03
951.20
32O
1.74
706.09
33D
1.99
724.30
33A
1.96
112.50
34D
2.05
863.40
34A
1.89
120.50
35D
2.11
1316.30
35A
1.91
100.90
36D
2.11
451.60
36A
2.02
135.40

Universitas Sumatera Utara

52

Lampiran 8. Data binari skoring
0
0
0
0
6B
0
0
0
0
6D
0
0
0
1
7B
0
1
0
1
7D
0
0
0
0
9B
0
0
0
1
9D
0
0
0
0
15B
0
0
0
0
15D
0
0
0
0
16B
0
0
0
0
16D
0
0
0
0
17B
0
0
0
1
17D
0
0
0
0
18B
0
0
0
0
18D
0
0
0
0
19B
0
0
0
1
19D
0
0
0
1
21B
0
0
0
1
21D
0
0
0
1
23B
0
0
1
1
23D
0
0
0
1
25B
0
0
0
1
25D
0
0
0
1
28B

0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
1
0
0
0
0
0
0
0

0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
1
1
1
1
0

0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
1
0
0
1
1
1
1
0

1
1
0
0
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
0
1
1
1
1
1
1

1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
0
1
1
1
1
1
1
1
1

0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
1
1
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0

0
1
0
1
0
1
0
1
0
0
0
1
0
1
0
1
1
1
1
1
1
0
0

0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0

0
0
1
1
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0

0
1
1
1
1
1
0
1
0
0
1
1
0
1
0
1
1
1
1
1
1
1
1

0
0
1
0
0
0
0
0
0
0
0
1
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0

0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
1
1
1
1
1
0
0
0

Universitas Sumatera Utara

53

28D
30B
30D
31D
31P
32D
32O
33A
33D
34A
34D
35A
35D
36A
36D

0
0
0
0
0
1
0
0
0
#
0
#
0
#
0

0
0
0
0
0
1
0
0
0
#
0
#
0
#
1

0
0
0
0
0
0
0
0
0
#
0
#
0
#
0

1
1
1
1
0
1
0
0
0
#
1
#
1
#
0

0
0
0
0
0
0
0
0
0
#
0
#
0
#
0

1
0
1
0
0
0
0
0
0
#
0
#
0
#
0

1
1
0
0
0
1
0
0
0
#
0
#
0
#
0

1
1
1
1
1
1
1
1
1
#
1
#
1
#
1

1
1
1
1
1
1
0
0
1
#
1
#
1
#
1

0
0
0
1
0
1
0
0
0
#
0
#
0
#
0

0
1
1
1
0
0
0
0
1
#
1
#
1
#
1

1
0
0
0
0
1
0
0
0
#
0
#
0
#
0

0
0
0
0
0
1
0
0
0
#
0
#
0
#
0

1
1
1
1
0
0
0
0
1
#
1
#
1
#
1

0
0
0
0
0
0
0
0
0
#
0
#
0
#
1

1
1
1
0
0
0
0
0
0
#
0
#
0
#
0

Universitas Sumatera Utara

54

Lampiran 9. Data PCoA (Principal Coordinates Analysis)
Axis 1

Axis 2

Axis 3

Axis 4

Axis 5

Sampel
Coord.

Cos²

Coord.

Cos²

Coord.

Cos²

Coord.

Cos²

Coord.

Cos²

6B

-0.2911

769

0.1363

169

-0.0297

8

0

0

0

0

6D

0.026

24

0.1264

566

-0.1287

586

0

0

0

0

7B

0.3263

461

-0.1167

59

-0.1604

111

0

0

0

0

7D

0.3996

819

-0.1038

55

-0.1632

137

0

0

0

0

9B

-0.0918

229

0.143

557

-0.0929

235

0

0

0

0

9D

0.1321

859

0.0885

386

-0.0456

102

0

0

0

0

15B

-0.2911

769

0.1363

169

-0.0297

8

0

0

0

0

15D

0.026

24

0.1264

566

-0.1287

586

0

0

0

0

16B

-0.2911

769

0.1363

169

-0.0297

8

0

0

0

0

16D

-0.2911

769

0.1363

169

-0.0297

8

0

0

0

0

17B

-0.058

45

0.1058

151

-0.0761

78

0

0

0

0

17D

0.1852

462

0.0318

14

-0.0675

61

0

0

0

0

18B

-0.2911

769

0.1363

169

-0.0297

8

0

0

0

0

18D

0.026

24

0.1264

566

-0.1287

586

0

0

0

0

19B

-0.5406

951

0.0551

10

0.0952

29

0

0

0

0

19D

0.2288

566

0.0046

0

0.1305

184

0

0

0

0

21B

0.4169

-0.0567

20

-0.1091

75

0

0

0

0

21D

0.179

746

0.0608

86

0.0069

1

0

0

0

0

23B

0.2367

643

0.0054

0

0.1661

317

0

0

0

0

23D

0.2473

533

-0.0181

3

0.1926

323

0

0

0

0

25B

0.2052

642

0.0307

14

0.1234

232

0

0

0

0

Universitas Sumatera Utara

55

25D

0.1327

233

0.0327

14

0.2021

541

0

0

0

0

28B

0.0478

118

0.1026

544

-0.002

0

0

0

0

0

28D

0.1876

275

-0.0292

7

0.313

765

0

0

0

0

30B

0.2144

736

0.0298

14

0.1109

197

0

0

0

0

30D

0.2103

660

0.0351

18

0.0718

77

0

0

0

0

31D

0.1587

538

0.0611

80

-0.0288

18

0

0

0

0

31P

-0.2911

769

0.1363

169

-0.0297

8

0

0

0

0

32D

0.0827

27

-0.1254

63

0.2718

294

0

0

0

0

32O

-0.5406

951

0.0551

10

0.0952

29

0

0

0

0

33A

-0.5406

951

0.0551

10

0.0952

29

0

0

0

0

33D

0.026

24

0.1264

566

-0.1287

586

0

0

0

0

34A

-0.1795

40

-0.6661

546

-0.0537

4

0.528

343

0.2335

67

34D

0.1321

859

0.0885

386

-0.0456

102

0

0

0

0

35A

-0.1795

40

-0.6661

546

-0.0537

4

-0.4662

267

0.3405

143

35D

0.1321

859

0.0885

386

-0.0456

102

0

0

0

0

36A

-0.1795

40

-0.6661

546

-0.0537

4

-0.0618

5

-0.574

405

36D

0.0973

103

0.0509

28

-0.1837

366

0

0

0

0

Keterangan : Axis
1
2
3
4
5

Eigenvalue
0.06456
0.04319
0.0147
0.01316
0.01316

Inertia%
33.67
22.52
7.67
6.86
6.86

Universitas Sumatera Utara

56

Lampiran 10. Data dissimilarity index

Keterangan : 1000 bootstrap
Universitas Sumatera Utara

57

Lampiran 11. Data ukuran pasangan basa amplikon DNA
Sampel Produk PCR
6B
6D
7B
7D
9B
9D
15B
15D
843
1934
2248
1934
1934
1934
843
1934
738
1060
1934
1756
843
1060
738
1060
843
1756
1060
738
843
843
738
1060
843
738
738
340
843
428
428
428

16B
843
738

16D
843
738

17B
1934
991
843
738

17D
2248
1934
991
843
738
428

18B
843
738

18D
1934
1060
843
738

Universitas Sumatera Utara

58

Lampiran 12. Data ukuran pasangan basa amplikon DNA
Sampel Produk PCR
19B
19D
21B
21D
23B
23D
25B
25D
738
3029
3029
3029
3029
3029
1934
1934
2248
1934
1934
1934
1934
1060
843
1934
1060
1060
1060
1060
843
738
1060
843
843
843
843
738
568
843
428
738
738
738
568
501
738
428
568
568
501
428
568
501
501
428
462
428
428
428
354

28B
1934
843
738
428

28D
3029
1934
1146
843
738
568
501
428

30B
3029
2248
1934
1060
843
738
568
428

30D
3029
2248
1934
1060
843
738
501
428

31D
1934
1060
991
843
738
428

31P
843
738

Universitas Sumatera Utara

59

Lampiran 13. Data ukuran pasangan basa amplikon DNA
Sampel Produk PCR
32D
32O
33A
33D
34A
34D
1756
738
738
1934
1934
1146
1060
1060
991
843
843
843
738
738
738
738
428
568
428
340
156

35A

35D
1934
1060
843
738
428

36A

36D
2248
1934
1060
843
738
340

Universitas Sumatera Utara

60

Lampiran 14. Foto kegiatan penelitian
Isolasi DNA

Uji Kuantitas

Elektroforesis

Preparasi PCR

Universitas Sumatera Utara

Dokumen yang terkait

Pertumbuhan Bibit Kelapa Sawit ( Elaeis Guineensis Jacq.) Dengan Menggunakan Media Sekam Padi dan Frekuensi Penyiraman di Main Nursery

10 98 74

Perbandingan antara Metode SYBR Green dan Metode Hydrolysis Probe dalam Analisis DNA Gelatin Sapi dan DNA Gelatin Babi dengan Menggunakan Real Time Polymerase Chain Reaction (PCR)

1 64 90

Analisis Cemaran Daging Babi Pada Kornet Sapi di Wilayah Ciputat dengan Menggunakan Metode Polymerase Chain Reaction (PCR)

3 16 72

Perbandingan antara metode SYBR green dan metode hydrolysis probe dalam analisis DNA gelatin sapi dan DNA gelatin babi dengan menggunakan real time PCR

1 33 90

Identifikasi Fragmen DNA Genomik Kelapa Sawit (Elaeis guineensis Jacq.) Hasil PCR (Polymerase Chain Reaction) Menggunakan Primer Spesifik untuk Beta Karoten

2 16 75

Identifikasi Fragmen DNA Genomik Kelapa Sawit (Elaeis guineensis Jacq.) Hasil PCR (Polymerase Chain Reaction) Menggunakan Primer Spesifik untuk Beta Karoten

0 0 13

Identifikasi Fragmen DNA Genomik Kelapa Sawit (Elaeis guineensis Jacq.) Hasil PCR (Polymerase Chain Reaction) Menggunakan Primer Spesifik untuk Beta Karoten

0 0 2

Identifikasi Fragmen DNA Genomik Kelapa Sawit (Elaeis guineensis Jacq.) Hasil PCR (Polymerase Chain Reaction) Menggunakan Primer Spesifik untuk Beta Karoten

0 0 5

Identifikasi Fragmen DNA Genomik Kelapa Sawit (Elaeis guineensis Jacq.) Hasil PCR (Polymerase Chain Reaction) Menggunakan Primer Spesifik untuk Beta Karoten

0 0 10

Identifikasi Fragmen DNA Genomik Kelapa Sawit (Elaeis guineensis Jacq.) Hasil PCR (Polymerase Chain Reaction) Menggunakan Primer Spesifik untuk Beta Karoten

1 2 3