☰ Kategori

Optimasi dan Validasi Metode Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) pada Penetapan Kadar Siklamat dalam Minuman Ringan

Lampiran n 1. Kroma atogram pe enyuntikan larutan Na a Siklamat untuk me encari

pH dap par fosfat ya ang optimu m pada ana alisis Dap par fosfat pH H 4,5 denga an perbandin ngan fase ge erak dapar f fosfat : met hanol (70:30) da an laju alir 1 1 ml/menit Dap par fosfat pH H 5,5 denga an perbandin ngan fase ge erak dapar f fosfat : met hanol (70:30) da an laju alir 1 1 ml/menit

Lampiran n 1. (Lanju utan)

Dap par fosfat pH H 6,0 denga an perbandin ngan fase ge erak dapar f fosfat : met hanol (70:30) da an laju alir 1 1 ml/menit Dap par fosfat pH H 6,5 dengan an perbandin ngan fase ge erak dapar f fosfat : meth hanol (70:30) da an laju alir 1 1 ml/menit

Lampiran n 1. (Lanju utan)

Dap par fosfat pH H 7,0 dengan an perbandin ngan fase ge erak dapar f fosfat : meth hanol (70:30) da an laju alir 1 1 ml/menit Dap par fosfat pH H 7,5 dengan an perbandin ngan fase ge erak dapar f fosfat : meth hanol (70:30) da an laju alir 1 1 ml/menit

Lampiran n 2. Kroma

kompo analisi atogram pe osisi fase ge is enyuntikan erak dapar

A B larutan Na fosfat : me a Siklamat ethanol yang untuk me g optimum encari pada

Lampiran n 2. (Lanju utan)

C D

Lampiran n 2. (Lanju utan)

E F

Lampiran n 2. (Lanju utan)

G Pe rbandingan n Fase Gera ak dapar fos sfat : metha anol (70 : 3 30) dengan n Laju

Alir 1 ml/ /menit dari A (BPFI), , B (Vitaco ool), C (Nut trijeruk), D D (Segar Sa ari), E (Sisri), F ( (Teajus), da an G (X-Teh

h) A

Lampiran n 2. (Lanju utan)

B C

Lampiran n 2. (Lanju utan)

D E

Lampiran n 2. (Lanju utan)

F G Pe rbandingan n Fase Gera ak Dapar fo osfat : meth anol (75 : 2 25) dengan n Laju

Alir 1 ml/ /menit dari A (BPFI), , B (Vitaco ool), C (Nut trijeruk), D D (Segar Sa ari), E (Sisri), F ( (Teajus), da an G (X-Teh

h)

Lampiran n 2. (Lanju utan)

A B

Lampiran n 2. (Lanju utan)

C D E

Lampiran n 2. (Lanju utan)

F G Perb bandingan F Fase Gerak k Dapar fos sfat : metha anol (80 : 2 20) dengan Laju

Alir 1 ml/ /menit dari A (BPFI), , B (Vitaco ool), C (Nut trijeruk), D D (Segar Sa ari), E (Sisri), F ( (Teajus), da an G (X-Teh

h)

Lampiran n 3. Kroma atogram lar rutan Na S iklamat BP PFI pada p pembuatan k kurva

kalibra asi A

Pe rbandingan n Fase Gera ak Dapar fo osfat : meth anol (70 : 3 30) dengan n Laju Alir 1 ml/m menit konse entrasi 50 p ppm.

B Pe rbandingan n Fase Gera ak Dapar fo osfat : meth anol (70 : 3 30) dengan n Laju Alir 1 ml/m menit konse entrasi 100 ppm.

Lampiran n 3. (Lanju utan)

C Per rbandingan Fase Gerak ak Dapar fo sfat : meth anol (70:3 30) dengan n Laju Alir 1 ml/m menit, kons sentrasi 150 0 ppm.

D Per rbandingan Fase Gera ak Dapar fo osfat : meth hanol (70:3 30) dengan Laju Alir 1 ml/m menit, kons sentrasi 200 0 ppm.

Lampiran n 3. (Lanju utan)

E Per rbandingan Fase Gera ak Dapar fo osfat : meth hanol (70:3 30) dengan Laju Alir 1 ml/m menit, kons sentrasi 250 0 ppm.

A,

B, C, D, d dan E merup pakan krom matogram ha asil penyun ntikan laruta an Na Siklamat B BPFI denga an konsentr rasi 50 ppm m, 100 ppm m, 150 ppm, , 200 ppm m, dan 250 ppm. Dengan m menggunaka an KCKT d dengan kolo om Agilent t C

18 (150 x 4,6

mm), per rbandingan fase gera ak dapar fosfat : m methanol ( (70:30), vo olume penyuntik kan 20 µl d dengan auto osampler , la aju alir 1 m ml/menit, de etektor UV pada panjang ge elombang 2 201 nm.

Lampiran 4. Perhitungan persamaan regresi dari kurva kalibrasi Na Siklamat

BPFI yang diperoleh secara KCKT pada panjang gelombang 201 nm konsenterasi (X) vc luas area (Y) untuk Na Siklamat

Konsentrasi Luas Area (ppm) ₂ ₂ No.

XY X Y

X Y 1 0 0 0,0000 2 50 31,53 1575 2500 992,25 3 100 64,2 6420 10000 4121,64 4 150 90,8 13620 27500 8244,64 5 200 120,7 24140 40000 14568,49 6 250 151,1 37775 62500 22831,21 50758,23

∑ 750 458,3 83530 137500 Rata2 125 76,38

Y = ax + b

,

= 0,5998 b = Y a

= (76,38) – (0,5998) (125) = 1,405 Sehingga diperoleh persamaan regresi Y = 0,5998 X + 1,405

Untuk mencari hubungan konsentrasi (X) dengan luas area (Y) digunakan pengujian koefisien korelasi (r) ∑XY ∑X ∑Y /n r

∑X ∑X /n ∑Y ∑Y /n

, / / , , /

26242,5 = 43750 x 15751,75

26242,5 26251,46

= 0,9996

Lampiran 5. Perhitungan recovery dengan metode adisi standar

Ditimbang seksama 1,003 g sampel Vitacool dan ditambahkan baku Na Siklamat sebanyak 1 ml (mengandung 200 ppm Na Siklamat) dan dimasukkan kedalam labu tentukur 10 ml, dilarutkan dan dicukupkan dengan pelarut hingga garis tanda sehingga diperoleh larutan dengan kadar baku siklamat 20,71 ppm, dikocok, kemudian disaring dengan membran filter PTFE 0,2 µm. Diinjeksikan sebanyak 20 µl menggunakan autosampler ke sistem KCKT dan dideteksi pada panjang gelombang 201 nm dengan perbandingan fase gerak dapar fosfat : methanol (70:30), laju alir 1 ml/menit. Dilakukan sebanyak 6 kali perlakuan.

Lampiran n 6. Kroma atogram ha asil recovery y dari sampel Vitacooll

A B

Lampiran n 6. (Lanju utan)

C D

Lampiran n 6. (Lanju utan)

E F

A,

B, C, D,

E, dan F merupakan n kromatogr ram hasil Recovery tanpa penambah han bahan b baku larutan n sampel V Vitacool , ya ang dianalis sa secara K KCKT dengan me enggunakan n kolom Ag gilent C (1 50 x 4,6 mm m), perband dingan

18

fase gerak k dapar fos sfat : metha anol (70:30 0), volume penyuntika an 20 µl de engan , laju alir r 1 ml/menit t, detektor U UV pada pa anjang gelom mbang 201 nm.

autosampl ler

Lampiran n 6. (Lanju utan)

A B

Lampiran n 6. (Lanju utan)

C D

Lampiran n 6. (Lanju utan)

E F

A, B, C, , D, E, d dan F meru upakan kro omatogram hasil R Recovery de engan penambah han bahan b baku larutan n sampel V Vitacool , ya ang dianalis sa secara K KCKT dengan m menggunaka an kolom A Agilent C (150 x 4, 6 mm), pe erbandingan n fase

18

gerak Da apar fosfat : methano ol (70:30), volume p penyuntikan n 20 µl de engan , laju alir r 1 ml/menit t, detektor U UV pada pa anjang gelom mbang 201 nm.

autosampl ler

Lampiran 7. Hasil pengujian validasi, dengan parameter akurasi, presisi, batas

76,6 0,0 1253,67 1310,35

6 20,71

75,7 75,8 1238,66 1240,33

5 20,71

76,3 77,4 1248,67 1267,00

4 20,71

deteksi (LOD), batas kuantitasi (LOQ) Na Siklamat pada Vitacool dengan menggunakan metode adisi standar

3 20,71

75,3 75,4 1231,99 1233,66

2 20,71

1 20,71 76,1 78,4 1245,33 1283,68

Sebelum Penambahan Setelah Penambahan

Sebelum Penambahan Sesudah Penambahan

No Baku yang ditambahkan ( ppm ) Luas Area Kadar ( ppm )

76,5 77,1 1252,00 1262,00 Kadar rata – rata (%) Recovery = 101,98 Standar Deviasi = 1,8745 Relative Standar Deviasi (%) = 0,15 Batas Deteksi (LOD) (ppm) = 9,3756 Batas Kuantitasi (LOQ) (ppm) = 31,2521

Lampiran 8. Contoh perhitungan % recovery dengan metode adisi standar A-B

% Recovery = x 100%

Baku yang ditambahkan

Keterangan : A = Konsentrasi sampel setelah penambahan baku siklamat B = Konsentrasi sampel sebelum penambahan baku siklamat % Recovery = 1266,17 – 1245,05 x100% 20,71 = 101,98%

Lampiran 9. Perhitungan batas deteksi (LOD) dan batas kuantitasi (LOQ)

Persamaan Regresi : Y = ax + b Y = 0,5998X + 1,69

2 No Konsentrasi Luas Area Yi Y – Yi ( Y – Yi )

X Y 1 50 31,53 31,68

0,15 0,0225 2 100 64,2 61,67

2,93 8,5849 3 150 90,8 91,66

0,86 0,7398 4 200 120,7 121,65

0,95 0,9025 5 250 151,1 151,64

0,54 0,2915

10,541 ∑ ₂

( Y  Yi )



Standar Deviasi ( Sy / x ) 

n 

2 10,541

  Sy x

/  5 

x Sy x 3 / Batas Deteksi ( LOD ) 

Slope 3 x 1,8745

LOD  , 5998

LOD = 9,3756 µg/ ml x Sy x

10 / LOQ 

Batas Kuantitasi ( ) Slope

10 x 1,8745

LOQ 

, 5998 LOQ = 31,2521 µg/ ml

Lampiran n 10. Krom matogram da ari Nutrijeru

uk A B

Lampiran n 10. (Lanjutan)

C D

Lampiran n 10. (Lanj utan)

E F

A, B, C, D ,E dan F F merupaka an kromato ogram peny yuntikan 6 k kali dari la arutan Nutrijeruk k yang dian nalisa secara a KCKT de engan meng gunakan ko olom Agilen nt C

18

(150 x 4,6 6 mm), perb bandingan fa fase gerak d dapar fosfat : methanol (70:30), vo olume penyuntik kan 20 µl d dengan auto osampler , la aju alir 1 m ml/menit, de etektor UV pada panjang ge elombang 2 201 nm.

Lampiran 11. Contoh perhitungan untuk mencari kadar Na siklamat dalam sampel Y = 0,5998X + 1,405 Luas area = 57,97 Berat Sampel = 1,0307 g

X = 57,97 – 1,405 0,5998

= 94,3064 ppm Rumus perhitungan kadar Na Siklamat = Dimana K = Kadar total Na Siklamat dalam sampel (ppm)

X = Konsentrasi Na Siklamat Sesudah pengenceran (ppm) V = Volume sampel (ml)

Fp = Faktor pengenceran Bs = Berat sampel

Kadar total Na Siklamat = 94,3064 ppm 200 10/1

1,002 g = 188,82 mg/200 g = 943,06 mg/kg

Kadar Na Siklamat ke-6 pengulangan pada sampel Nutrijeruk dan kadar Na siklamat pada % perolehan kembali dapat dihitung dengan cara yang sama seperti contoh di atas

Lampiran 12. Analisis data statistik untuk mencari kadar sebenarnya dari

penyuntikkan larutan nutrijeruk Kadar (mg/kg)

2 No ( X - ) ( X - )

X 1 1091,95 30,24 914,46 2 1106,45 44,74 2001,67 3 943,06 -118,65 14077,82

4 1074,94 13,23 175,03 5 1064,27 2,56 6,55 6 1089,61 27,9 778,41

2

= 17953,94 ∑ X=6370,28

∑ (X - ) =1061,71 ₂ X 

X 17953,94 ( )

 SD  

= 59,92

n 

5

α = 0,01, dk = n – 1 = 6 – 1 = 5 Diperoleh t = 4,0321

tabel

Dasar penolakan data apabila t hitung tabel ≥ t

X 

X

t hitung =

SD / n

| 30,24 | t hitung data 1 = = 1,24 59.92 /

6

| 44,74 |

t data 2 = = 1,83

hitung 59,92 /

6 |  118 , 65 |

t hitung data 3 = = 4,85

59,92 /

6 | 13 , 23 |

t hitung data 4 = = 0,54

59,92 /

6 | 2 , 56 |

t data 5 = = 0,10

hitung 59,92 /

6 | 27,9 |

t hitung data 6 = = 1,14

59,92 /

6

t hitung data ke-3 > dari t tabel maka data ditolak

Lampiran 12. (Lanjutan)

Kadar (ppm)

2 No ( X - ) ( X - )

X 1 1091,95 6,506 42,33 2 1106,45 21,006 441,25 3 1074,94 -10,504 110,33 4 1064,27 -21,174 448,34 5 1089,61 4,166 17,36

2

= 1059,61 ∑ X=5427,22 ∑ (X - )

=1085,444

2 X  X 1059,61 ( )





SD  = 16,28 n 

4

α = 0,01, dk = n – 1 = 5 – 1 = 4 Diperoleh t tabel = 4,6041 Dasar penolakan data apabila t hitung tabel

≥ t

X 

X

t hitung =

SD / n | 6 , 506 |

t data 1 = = 0,89

hitung 16,28 /

5 | 21,006 |

t hitung data 2 = = 2,89

16,28 /

5 | -10,504 |

t hitung data 3 = = 1,44

16,28 /

5 | 21,174 |

t data 4 = = 2,91

hitung 16,28 /

5 | 4 , 166 |

t hitung data 5 = = 0,57

16,28 /

5 Jadi kadar sebenarnya terletak antara :

SD

X

µ = ± t (1-1/2 x

α)dk n

16,28

= 1085,444± 4,6041 x

5

= (1085,444± 33,52) ppm

Lampiran 13. Tabel hasil analisa kadar Na siklamat dalam Nutrijeruk

No Berat

Sampel (g)

Volume (ml)

Fp Kadar (ppm)

Theoritical Plate Tailing Factor

Luas Area 1 1,0307 200 10/1 1091,95 2525 1,01 66,9

2 1,0351 200

10/1 1106,45 2703 1,20 67,8 3 1,0402 200 10/1 943,06 2946 1,14 58,0 4 1,0415 200

10/1 1074,94 2530 1,16 65,9 5 1,0430 200

10/1 1064,27 2759 1,07 65,2 6 1,0358 200

10/1 1089,61 2703 1,16 66,8

Lampiran n 14. Kroma atogram dar ri larutan V Vitacool

A B

Lampiran n 14. (Lanju utan)

C D

Lampiran n 14. (Lanju utan)

E F

A, B, C, D ,E dan F F merupaka an kromato ogram peny yuntikan 6 k kali dari la arutan Vitacool yang diana alisa secara KCKT den ngan mengg gunakan ko olom Agilen nt C

18

(150 x 4,6 6 mm), perb bandingan fa fase gerak d dapar fosfat : methanol (70:30), vo olume penyuntik kan 20 µl d dengan auto , la aju alir 1 m ml/menit, de etektor UV pada

osampler panjang ge elombang 2 201 nm.

Lampiran 15. Analisis data statistik untuk mencari kadar sebenarnya dari

penyuntikkan larutan Vitacool Kadar (mg/kg)

2 No ( X - ) ( X - )

X 1 1077,11 1,72 2,96 2 1041,93 -33,46 1119,57 3 1114,29 38,9 1513,21 4 1074,44 -0,95 0,9025 5 1153,80 78,41 6148,13 6 990,75 -84,64 7163,93

∑ X = 6452,32

2

=15948,70 ∑ (X - )

= 1075,39 ₂

( X  X ) 15948,70 



SD  = 56,48 n 

6 

1

α = 0,01, dk = n – 1 = 6 – 1 = 5 Diperoleh t tabel = 4,0321 Dasar penolakan data apabila t hitung tabel

≥ t

X 

X

t hitung =

SD / n 1 ,

72

t hitung data 1 = = 0,07

56,48 /

6  33 ,

46

t hitung data 2 = = 1,45

56,48 /

6 38 ,

9

t data 3 = = 1,69

hitung 56,48 /

6  ,

95

t hitung data 4 = = 0,04

56,48 /

6 78 ,

41

t hitung data 5 = = 3,40

56,48 /

6

Lampiran 15. (Lanjutan)  86 ,

64

t hitung data 6 = = 3,67

56,48 /

Jadi kadar sebenarnya terletak antara :

SD

X

µ = ± t (1-1/2 x

α)dk n

56 ,

48

= 1075,39 ± 4,0321 x

6

= (1075,39 ± 92,98) ppm

Lampiran 16. Tabel hasil analisa kadar Na siklamat dalam Vitacool

No Berat

Sampel (g)

Volume (ml)

Fp Kadar (ppm)

Theoritical Plate Tailing Factor

Luas Area 1 1,0052 10

10/1 1153,80 2782 1,51 70,6 2 1,0038 10 10/1

1077,11 2149 1,92 66,0 3 1,0047 10 10/1

1114,29 2988 1,54 68,2 4 1,0035 10 10/1

1041,93 2239 1,78 63,9 5 1,0038 10 10/1

1074,44 3053 1,42 65,9 6 1,0021 10 10/1

990,75 2982 1,14 60,8

Lampiran n 17. Kroma atogram dar ri larutan Se egar Sari

A B

Lampiran n 17. (Lanju utan)

C D

Lampiran n 17. (Lanju utan)

E F

A,

B, C, D , ,E dan F m merupakan kromatogra am penyunt tikan 6 kali i dari larutan Se egar Sari yang diana alisa secara a KCKT de engan meng ggunakan k kolom Agilent C C

18 (150 x 4 4,6 mm), p perbandinga an fase ger ak dapar fo osfat : met hanol

(70:30), v volume pen nyuntikan 2 20 µl denga an autosam mpler , laju alir 1 ml/m menit, detektor U UV pada pan njang gelom mbang 201 n nm.

Lampiran 18. Analisis data statistik untuk mencari kadar sebenarnya dari

penyuntikkan larutan Segar Sari Kadar (mg/kg)

2 No

( X - ) ( X - )

X 1 627.13 6,92 47,89 2 565,77 -54,44 2963,71 3 596,95 -23,26 541,03 4 708,15 87,94 7733,44 5 622,12 1,91 3,65 6 601,12 -19,09 364,43

2

= 11654,15 ∑ X = 3721,24 ∑ (X - )

= 620,21 ₂ X 

X ( ) 11654,15

 SD  

= 48,28

n 

1

6 

1 Pada tingkat kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01, dk = n – 1 = 6 – 1 = 5

Diperoleh t = 4,0321

tabel

Dasar penolakan data apabila t hitung tabel ≥ t

X 

X

t hitung =

SD / n 6 ,

92

t hitung data 1 = = 0,35

48,28 /

6 54 , 44 

t data 2 = = 2,76

hitung 48,28 /

6  23 ,

26

t hitung data 3 = = 1,18

48,28 /

6 87 ,

94

t hitung data 4 = = 4,46

48,28 /

6 1 ,

91

t data 5 = = 0,09

hitung 48,28 /

6  19 ,

09

t hitung data 6 = = 0,97

48,28 /

6

t hitung data ke-4 > dari t tabel maka data ditolak

Lampiran 18. (Lanjutan)

Untuk itu dihitung kembali dengan cara yang sama tanpa mengikutsertakan data ke-4 Kadar (mg/kg)

2 No ( X - ) ( X - )

X 1 627,13 24,51 600,74 2 565,77 -36,85 1357,92 3 596,95 -5,67 32,15 4 622,12 19,5 380,25 5 601,12 -1,5 2,25

2

∑ X = 3013,09 = 2373,31 ∑ (X - )

= 602,62 ₂ X

X (  ) 2373,31





SD  = 24,36 n 

5 

1

α = 0,01, dk = n – 1 = 5 – 1 = 4 Diperoleh t tabel = 4,6041 Dasar penolakan data apabila t

hitung tabel

≥ t

X 

X

t =

hitung SD / n

24 ,

51

t hitung data 1 = = 2,25

24,36 /

5 36 , 85 

t hitung data 2 = = 3,38

24,36 /

5  5 ,

67

t hitung data 3 = = 0,52

24,36 /

5 19 ,

5

t hitung data 4 = = 1,79

24,36 /

5 1 ,

5

t data 5 = = 0,14

hitung 24,36 /

SD

X

µ = ± t (1-1/2 x

α)dk n

24,36

= 602,62 ± 4,6041 x

5

= (602,62 ± 112,16) ppm

Lampiran 19. Tabel hasil analisa kadar Na siklamat dalam Segar Sari

No Berat

Sampel (g)

Volume (ml)

Fp Kadar (ppm)

Theoritical Plate Tailing Factor

Luas Area 1 1,0082 10 10/1 596,95 2782 0,79 37,2

2 1,0084 10 10/1 622,12 2149 0,77 38,7 3 1,0058 10 10/1 565,77 2988 0,83 35,3 4 1,0082 10 10/1 601,12 2239 1,22 37,5 5 1,0085 10 10/1 627,13 3053 1,21 39,0 6 1,0163 10 10/1 708,15 2982 1,35 43,9

Lampiran 20. Daftar Spesifikasi Sampel

1. Nutrijeruk Komposisi : Air, gula pasir, asam sitrat, aroma orange, Na siklamat, Na benzoat, CI 19140, FCF 15985,

Vitamin C No Batch : 0CAFE Produsen : Union Pasifik Indonesia No. Pendaftaran : MD 213127501535 Tgl. Kadaluwarsa : 31 Desember 2014

2. Vitacool Komposisi : Air, gula pasir, perisa stroberi, Na siklamat, Na benzoat, pewarna merah No. Batch : - Produsen : PT Makmur Artha Sejahtera No. Pendaftaran : MD 250010003826 Tgl. Kadaluwarsa : 20 April 2014

3. Segar Sari Komposisi : Mengandung 0,194 g/sachet Na Siklamat No. Batch : 004A13 Produsen : PT. Kinosentra Industrindo No. Pendaftaran : MD 249911155354 Tgl. Kadaluwarsa : Januari 2015

4. X-Teh Komposisi : Air, gula pasir, ekstrak teh alami, aroma, siklamat,

K. Sorbat No. Batch : - Produsen : Union Pasifik Indonesia No. Pendaftaran : - Tgl. Kadaluwarsa : Desember 2014

5. Teajus Komposisi : Gula, ekstrak teh, pemanis buatan Na Siklamat

(0,11g/sachet), aspartam (0,07g/sachet), mengandung fenilalanin No. Batch : 13122 Produsen : Wings Indonesia No. Pendaftaran : MD 550113018390 Tgl. Kadaluwarsa : Agustus 2014

6. Sisri Komposisi : Gula, ekstrak teh, pemanis buatan Na Siklamat No. Batch : C2413 Produsen : PT. Forisa Nusapersada No. Pendaftaran : MD 649910328304 Tgl. Kadaluwarsa : April 2015

Lampiran 21. Tabel Nilai Distribusi t

Lampiran 22. Sertifikat Na Siklamat BPFI

Lampiran 23. Gambar alat – alat yang digunakan

Alat KCKT (Agilent)

Gambar 5 Sonifikator (Branson 1510) Gambar 5 Sonifikator (Branson 1510)

Sonifikator (Branson 1510) Pompa Vakum (Gast DO A-PG04-BN) dan alat penyaring fase gerak

Lampiran 23. (Lanjutan) Gambar 7 Sonifikator Kudos

Sonifikator Kudos Neraca Analitik