Isolasi dan Enkapsulasi Bakteri Asam Laktat (BAL) Asal Ayam Kampung (Gallus Domesticus) sebagai Pengendali E.Coli
LAMPIRAN
Lampiran 1 : Skema Isolasi Bakteri Escherichia coli Ditimbang EMB 3,6 gr
Ditambahkan Aquades 100 ml Dimasukkan ke dalam erlenmeyer
Disiapkan NaCl fisiologis 0,9 % sebanyak 10 ml Dimasukkan kedalam tabung reaksi
Diautoklaf erlenmeyer berisi media dan tabung reaksi berisi NaCl fisiologis selama 15 menit dengan suhu 121 C Dituang media kedalam cawan petri
Disiapkan sampel (feses ayam segar) Dimasukkan feses kedalam tabung reaksi berisi NaCl fisiologis
Dihomogenkan Diambil 1 tetes feses yang sudah dihomogenkan dengan NaCl fisiologis
Dimasukkan kedalam cawan petri yang telah berisi media EMB Diinkubasi selama 24-48 jam
Diamati
Lampiran 2 : Skema Pewarnaan Gram Stock Bakteri
- Sebanyak satu ose (ose bulat) isolat diambil dari stok
- Dibuat ulasan pada gelas objek
- Difiksasi diatas api bu
- Sebanyak 2-3 tetes kristal violet diteteskan di atas permukaan preparat selama 1 menit
Preparat
- Dibilas dengan aquades
- Sebanyak 2 tetes dengan iodene
- Ditunggu selama 1 menit
- Dibilas dengan aquades
- Preparat dicuci dengan alkohol asam
- Ditetesi dengan zat warna safranin - Ditunggu 30 detik.
- Dikeringkan Diperiksa dibawah mikroskop dengan penngamatan menggunakan minyak imersi.
Kultur Murni Isolat BAL Lampiran 4 : Pertumbuhan Isolat pada Medium MRSB + Ox bile 5% Sebelum Inkubasi
Endapan Isolat pada Dasar Tabung Setelah inkubasi 1 X 24 Jam Daya Hambat BAL Terhadap Eschericia Coli (E.coli) Lampiran 5 : Luas Zona Bening Pada Saluran Pencernaan Ayam Kampung Perlakuan Ulangan
Zona Bening
0.5
0.7
2
4
2
0.5
0.2
1
2 A3
0.5
0.2
3
0.63
4
0.4
3
2
4.67
8
0.5
0.8
1
7 Yeyenum
0.5
0.7
3
0.63
7
0.5
0.5 7 -
0.3
2
2 Ileum
0.5
2.1
3
0.72
7
0.5
0.7
2
14.33
15
0.5
1.5
1
0.5
0.5
0.2
3
0.54
8
0.5
0.8
2
4.33
3
0.5
0.3
1
3 Cecum
0.7
5.33
DM Indeks Zona
0.2
3
0.63
8
0.5
0.8
2
10.33
8
0.5
0.8
1
2 Proventriculus
0.5
3
0.5
0.5 7 -
0.7
2
4
3
0.5
0.3
1
(%) A1
Total asam Tertitrasi
Bening (mm)
Rataan Zona
Bening (mm)
1.5
15 Ventriculus
2
0.7
0.5
0.2
1
2 Duodenum
0.5
0.2
3
0.5 2 -
0.2
2
3.67
7
0.5
1
1
2 A2
0.5
0.2
3
0.54
8
0.5
0.8
2
8.33
15
0.5
1.5
21 Lampiran 6: Konsentrasi Berbagai Alginat Alginat 2% Alginat 3% Alginat 4% Alginat 5%
- 2% A2
18.72
4.15 Rata-rata
90.37
18.11
20.04
3
4.25
91.62
18.36
20.04
2
4.2
93.32
20.06
18.40
1
3.22 5% A5
76.94 B
15.41
20.02
3.3 Rata-rata
76.59
15.34
20.03
3
3.25
78.01
20.05
91.77 AA
20.01
86.58
5.06 galat 12 113.77 9.48 -
92.99
0.01 Alginat 5 4407.95 881.59
0.05
F. Hit F tabel
DB JK KT
Sumber Keragaman
2.77 Lampiran 8: Tabel Anova Penentuan Biopolimer Konsentrasi Alginat Sebagai Bahan Pengkapsul
87.83 A
17.59
20.03
2.8 Rata-rata
17.36
4.2 6% A6
20.05
3
2.7
90.80
18.17
20.01
2
2.8
86.11
17.24
20.02
1
15.61
2
Total 17 4521.72 -
47.73 E
20.05
3
2.5
57.20
11.48
20.07
2
2.1
58.98
11.82
20.04
1
9.56
56.11
20.04
10.44 52.04 - Rata-rata
20.06
3
10.02 50.02 -
20.03
2
8.23 41.11 -
20.02
1
Alginat Perlakuan Suspensi (g) beads (g) (%) Beads (mm) 1% A1
Lampiran 7 : Penentuan Biopolimer Konsentrasi Alginat Sebagai Bahan Pengkapsul Konsentrasi Kode Ulangan Massa Massa Rendemen Ukuran
11.25
2.2 Rata-rata
3.1
3
76.24
15.27
20.03
1
2.33 4% A4
70.66 C
14.16
20.03
2.2 Rata-rata
73.70
14.77
20.04
2.3
20.05
71.22
14.28
20.05
2
2.5
67.07
13.42
20.01
1
2.27 3% A3
57.43 D
11.52
- 3.11
The GLM Procedure Duncan's Multiple Range Test for TOKOL NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate. Alpha
0.05 Error Degrees of Freedom
12 Error Mean Square 9.4808 Number of Means 2 3 4 5 6 Critical Range 5.478 5.734 5.889 5.991 6.062 Means with the same letter are not significantly different.
Duncan Grouping Mean N PERLAKUAN A 91.770 3 A5 A A 87.830 3 A6 B 76.947 3 A4 C 70.663 3 A3 D 57.430 3 A2 E 47.723 3 A1
Lampiran 10 : Pengaruh Perbandingan Alginat- Filler Terhadap Rendemen Beads yang Dihasilkan
20.04
1
2
20.05
14.3
71.32
0.9
3
15.1
14.1
75.35
1.2 Rataan
20.04
14.5
72.36 CC
1.03 2:1
3.34
70.39
20.03
1
16.6
2
20.04
15.8
78.84
2.9
3
20.01
82.96
1
3 Rataan
20.03
16.2
80.87 B
2.97 Maltodekstrin 1:1
2.5
2.5 B4
1.67 B5
20.04
80.80
2.5
16.2
80.80
2.60
2
20.01
16.9
84.46
3
1
20.06
17.3
86.24
2.55 Rataan
20.04
16.8
83.83 BB
20.05
1.25 B6
18.4
3
91.82
1.9
2
20.06
18.8
93.72
2
20.01
3.75
19.3
96.45
1.7 Rataan
20.04
18.8
94.00 AA
1.87 3:1
3
16.2
Bahan Pengisi
20.03
66.83
1
3
20.02
12.6
62.94
0.5 Rataan
12.7
20.05
63.41 D
0.67 Susu Skim
1:1
2.5
2.5 B1
1
20.03
13.4
2
68.90
Beads (mm)
A : BP
Total Padatan 5%
Kode Perlakuan
Ulangan Massa Suspensi
(g) Massa Beads
(g) Rendemen
(%) Ukuran
Alginat (g)
0.5 Bahan Pengisi
BP (g)
Tanpa 1:0
5 B0
1
20.01
12.1
60.47
13.8
1.3
20.05
92.36
20.01
18.2
90.95
1.6
3
20.03
18.5
1.65 Rataan
2
20.04
18.4
91.80 A
1.75 3:1
3.75
1.25 B3
1
2
92.09
2
72.28
20.05
14.7
73.32
1.25
3
20.06
14.5
1.2 Rataan
18.5
20.05
14.3
71.50 C
1.25 2:1
3.34
1.67 B2
1
20.09
2.55 Ket : A= Alginat BP = Bahan Pengisi Lampiran 11 : Tabel Anova Pengaruh Perbandingan Alginat- Filler Terhadap Rendemen
Beads yang Dihasilkan
SK DB JK KT
F. Hit F.Tabel
0.05
0.01
- Perlakuan
6 136404.63 22734
64.82
2.85
4.46 14 134.37 9.60 - galat 20 136539.01
- Total Lampiran 12 : Uji Lanjut Duncan Dalam Perbandingan Alginat - Filler Terhadap Rendemen Beads yang Dihasilkan The SAS System 13:31 Thursday, November 20, 2014 4 The GLM Procedure NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate.
Alpha
0.05 Error Degrees of Freedom
14 Error Mean Square 5.784095 Number of Means 2 3 4 5 6 7 Critical Range 4.212 4.413 4.538 4.622 4.681 4.724 Means with the same letter are not significantly different.
Duncan Grouping Mean N PERLAKUAN A 93.997 3 B5 A A 91.800 3 B2 B 83.833 3 B6 B B 80.867 3 B3 C 72.353 3 B4 C C 71.500 3 B1
Lampiran 13 : Pengaruh Perbandingan Alginat- Filler Terhadap Efisiensi dan Viabilitas Enkapsulasi
1
20.06
2
90.91 C2
92.73
9.09
9
18.4
20.04
90.21
8.94
93.42
9.03
8.87
15.6
20.04
91.24 Rataan
93.50
9.02
8.91
18.8
9.08
20.03
8.98
6
10.92 Galat
5.14
0.01 Perlakuan 2 1697.28 848.64 133.63
0.05
SK DB JK KT F HIT F tabel
92.75 Lampiran 14 : Tabel Anova Pengaruh Perbandingan Alginat- Filler Terhadap Efisiensi Enkapsulasi
95.26
9.10
18.8
95.19
20.04
95.08 Rataan
97.85
9.12
8.99
19.3
20.01
3
92.27
15.2
3
Perlakuan Ulangan Massa Massa Populasi BAL Populasi BAL Efiisiensi Viabilitas suspensi (g)
2
20.02
3
68.97
64.77
8.77
9.05
13.4
20.05
61.70 C0
9.05
59.27
8.88
9.06
12.1
20.01
1
Setelah Enkapsulasi (%) (%)
Sebelum Enkapsulasi
Beads (g)
12.6
8.75
88.14
8.94
93.86
9.05
8.77
15.5
20.01
2
91.27 C1
92.91
9.02
16.1
60.85
20.09
1
65.25
61.63
8.80
9.05
12.7
20.03
65.09 Rataan
38.10 6.35 - Total 8 1735.39 - Lampiran 15 : Uji Lanjut Duncan Perbandingan Alginat- Filler Terhadap Efisiensi Enkapsulasi
The SAS System 19:24 Thursday, November 28, 2014 The GLM Procedure Duncan's Multiple Range Test for TOKOL NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate.
Alpha
0.05 Error Degrees of Freedom
6 Error Mean Square 6.350722 Number of Means 2 3 Critical Range 5.035 5.218 Means with the same letter are not significantly different.
Duncan Grouping Mean N PERLAKUAN A 95.257 3 C2 B 93.42 3 C1 C 61.630 3 C0
Lampiran 16 : Tabel Anova Pengaruh Perbandingan Alginat-Filter terhadap Viabilitas Enkapsulasi
F tabel SK DB JK KT F HIT
0.05
0.01 Perlakuan 2 1147.08 573.54
70.89
5.14
10.92 Galat
6
48.54
8.09 Total 8 1195.62 Lampiran 17 : Uji Lanjut Duncan Perbandingan Alginat- Filter terhadap Viabilitas
Enkapsulasi The SAS System 10:01 Thursday, December 8, 2014 4
The GLM Procedure Duncan's Multiple Range Test for TOKOL NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate.
Alpha
0.05 Error Degrees of Freedom 6 Error Mean Square 8.0901 Number of Means 2 3 Critical Range 5.683 5.890 Means with the same letter are not significantly different.
Duncan Grouping Mean N PERLAKUAN A 92.753 3 C B 76.483 3 B C 65.253 3 A
Lampiran 18 : Pembuatan Beads Basah BAL Terenkapsulasi Dalam Bentuk Kering Pengukuran Massa Beads Selama Pengering
Massa Massa Beads Saat Pengeringan Jam Ke-
Perlakuan Ulangan Massa Beads
Beads Kering
1
2
3
4
5
6
7
8 (g)
(gr)
1 5.03 5.03 4.44 4.08 3.6 2.38 0.78 0.76 0.75 0.7
0.6 Alginat
2 5.1 5.1 4.28 4.28 3.96 2.68 1.6 1.33 1.3
1.1
0.84 5%
3 5.01 5.01 4.37 4.07 3.26 2.19 2 1.4 1.23 0.92
0.8 Rataan
0.75
1 5.01 5.01 4.82 4.36 3.92 3.26 1.7 1.69 1.64 1.2
1.10 Alginat : Malto
2 5.07 5.07 4.33 3.97 3.35 2.94 2.39 1.25 1.21 0.8
0.70 (2:1)
3 5.03 5.03 4.72 4.04 3.27 2.85 2.1 1.35 1.19
1
0.85 Rataan
0.8
0.88 Perubahan Kadar Air Beads Pada Saat Pengeringan Perlakuan Ulangan Perubahan Kadar Air Beads Pada Jam Ke- (%)
1
2
3
4
5
6
7
8 1 88.07 86.49 85.29 83.33 74.79 23.08 21.05 20.00 14.29 Alginat 5% 2 83.53 80.37 80.37 78.79 68.66 47.50 36.84 35.38 23.64 3 84.03 81.69 80.34 75.46 63.47 60.00 42.86 34.96 13.04
Rataan 85.21 82.85 82.00 79.19 68.97 43.53 33.58 30.11 16.99 1 78.04 77.18 74.77 71.94 66.26 35.29 34.91 32.93 8.33 Alginat : 2 86.19 83.83 82.37 79.10 76.19 70.71 44.00 42.15 12.50
Maltodekstrin 3 83.10 81.99 78.96 74.01 70.18 59.52 37.04 28.57 15.00 (2:1)
Rataan 82.45 81.00 78.70 75.02 70.87 55.18 38.65 34.55 11.94 Lampiran 19 : Viabilitas BAL Tanpa Enkapsulasi selama Penyimpanan Perlakuan
Pengenceran JumlahPopulasi
9.10
68
47
9.83
9.67 A2B1
10
5
272 217
8.43
8.34
9.02
9.06
10
10
6
129 145
9.11
9.16
10
7
33
64
9.52
9.81 A2B2
7
9.20
5
2 (log cfu/g)
Jumlah Populasi BAL
Jumlah populasi BAL
(log cfu/g) Rataan
Ulangan
1 Rataan Ulangan
2 Rataan Koloni
BAL (log cfu/g)
Ulangan
1 Ulangan
2 Ulangan
1 Ulangan
(log cfu/g) A2B0
9.22
10
5
274 244
8.44
8.39
9.16
9.09
9.13
10
6
167 160
10
218 208
9.32
8.82
9.02
10
7
23
29
9.36
9.46 A2B4
10
8.22
9.06
8.94
144 104
10
6
86
73
8.93
8.86
10
7
15
23
9.18
9.16
6
8.34
7
8.32
8.92
9.00
8.96
10
6
109
88
9.04
8.94
10
24
10
54
9.38
9.73 A2B3
10
5
248 203
8.39
8.31
8.97
8.93
8.95
9.20 Lampiran 20 : Viabilitas BAL Dengan Enkapsulasi selama Penyimpanan Perlakuan Pengenceran
16
BAL Jumlah populasi
8.91
23
9.49
9.36 A1B1
10
5
209 178
8.32
8.25
8.91
8.91
10
7
6
97
88
8.99
8.94
10
7
27
34
9.43
9.53 A1B2
31
10
5
2 A1B0
BAL (log cfu/g) Rataan
Ulangan
1 (log cfu/g)
Rataan Ulangan
2 (log cfu/g)
Rataan Koloni
BAL (log cfu/g)
Ulangan
1 Ulangan
2 Ulangan
1 Ulangan
10
9.09
5
203 197
8.31
8.29
8.97
8.92
8.94
10
6
130 124
9.11
10
190 160
21
8.11
8.93
8.87
10
7
35
21
9.54
9.32 A1B4
10
5
128 130
8.11
86
8.72
8.65
8.69
10
6
53
44
8.72
8.64
10
7
74
6
8.28
7
8.20
8.93
8.85
8.89
10
6
84
66
8.92
8.82
10
38
10
33
9.58
9.52 A1B3
10
5
164 150
8.21
8.18
8.90
8.79
8.84
9.36 Lampiran 21 : Kestabilan BAL Selama Penyimpanan Perlakuan
Jumlah Populasi BAL (log cfu/g)
1
3.64
3
3.8
2
4.37
2
3.8
4
1
4.24 A2B2
4
4.2 A1B2
3.6 A1B3
3
4.2
3
4.3
2
4.3
2
4.33
4.5
1
4.33 A2B1
3
1
1
3.8
3
3.5
3
3.4
2
3.6
2
3.36
3.2
1
3.63 A2B4
1
3.8
3.6 A1B4
3
3.6
3
3.3
2
4
2
3.46
3.5
1
3.80 A2B3
4.5
6.54 A1B1
Rataan Jumlah Populasi BAL (log cfu/g)
8.9
A2B1
9.13 100
9.09
9.16
97.09 A2B0
8.69
8.65
8.72
98.88 A1B4
8.85
8.79
99.39 A1B3
9.1
8.89
8.85
8.93
99.61 A1B2
8.91
8.91
8.91
8.92 8.95 100 A1B1
8.97
Ulangan 1 Ulangan 2 A1B0
Kestabilan jumlah BAL (%)
9.05
9.08
3
1
6.54
3
6.45
2
5.3
2
6.46
6.39
1
6.08 A2B0
6.39
Ulangan pH Rata-rata Perlakuan Ulangan pH Rata-rata A1B0
99.45 A2B2
97.97 Lampiran 22: Pengaruh Lama Penyimpanan terhadap pH pH BAL Tanpa Enkapsulasi pH BAL Setelah Enkapsulasi Perlakuan
8.94
8.82
9.06
98.08 A2B4
8.95
8.93
8.97
98.52 A2B3
8.99
9
8.98
3.5 Lampiran 23: Kestabilan BAL dalam Menghambat E.coli Perlakuan
Luas diameter zona bening (mm
18
7
9
46.55 A2B0
20
22
21 21 100 A2B1
18
18.4
20
18.80
89.52 A2B2
17.6
12
16
17
81.90 A2B3
16.6
15
14
15.20
72.38 A2B4
14.8
12
13
13
8
67.24 A1B4
2
20 19.33 100 A1B1
) Rataan Daya
Hambat (mm
2
) Kestabilan BAL
Menghambat E.coli (%)
Ulangan
1 Ulangan
2 Ulangan
3 A1B0
22
16
14
13
16
19
16.33
84.48 A1B2
18
14
12
14.67
75.86 A1B3
19
8
12
63.17