V. KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 Kesimpulan
Ko-infeksi IMNV dengan berbagai dosis Vibrio harveyi 10
6
, 10
7
dan 10
8
cfuml dapat mempercepat awal mortalitas dan meningkatkan mortalitas dibandingkan dengan infeksi tunggal IMNV. Infeksi V. harveyi 10
7
cfuml tidak menyebabkan mortalitas, dan infeksi tunggal IMNV menyebabkan mortalitas
diawali pada hari ke-10 pasca infeksi dengan kumulatif 13.33. Sedangkan ko- infeksi virus IMNV dan V. harveyi 10
7
cfuml menyebabkan awal mortalitas udang lebih cepat hari ke-4 pasca infeksi dengan kumulatif lebih tinggi yaitu
40. Ko-infeksi juga mempercepat pertumbuhan Vibrio koloni berwarna hijau berpendar di tubuh udang, dengan densitas mencapai 108x10
5
± 27,06x10
5
cfuml pada hari ke-10 pasca infeksi.
Tidak ada perbedaan perkembangan gejala klinis visual maupun histopatologi antara infeksi tunggal IMNV dan ko-infeksi IMNV dengan V.
harveyi . Infeksi IMNV menunjukkan beberapa gejala yang nampak yaitu nekrosis
lebam putih, abnormalitas organ limfoid, terlihat badan inklusi pada sel otot, dan konfirmasi PCR di tubuh udang.
5.2 Saran
Perlu dilakukan penelitian lanjutan untuk mengetahui dampak penanggulangan penyakit IMN melalui pengendalian bakteri Vibrio, misalnya
penggunaan bakteri sebagai biokontrol Vibrio. Perlu juga dilakukan kuantifikasi IMNV di tubuh udang menggunakan Real Time PCR.
DAFTAR PUSTAKA
Alapide-Tendencia EV, Dureza LA. 1997. Isolation of Vibrio spp. from Penaeus monodon
Fabricius with red disease syndrome. Aquaculture 154:107– 114.
Andrade TPD, Srisuvan T, Tang KFJ, Lightner DV. 2007. Real-time reverse transcription polymerase chain reaction assay using TaqMan probe for
detection and quantification of Infectious myonecrosis virus IMNV. Aquaculture
264:9–15. Andrade TPD, Redman RM, Lightner DV. 2008. Evaluation of the preservation of
shrimp samples with Davidson’s AFA fixative for infectious myonecrosis virus IMNV in situ hybridization. Aquaculture 278:179–
183.
Chrisolite B, Thiyagarajan S, Alavandi SV, Abhilash EC, Kalaimani N, Vijayan KK, Santiago TC. 2008. Distribution of luminescent Vibrio harveyi and
their bacteriophages in a commercial shrimp hatchery in South India. Aquaculture
275:13–19. Coelho MGL, Silva ACG, Vila Nova CMV, Neto JMO, Lima ACN, Feijo RG,
Apolinaro DF, Maggioni R, Gesteira TCV. 2009. Susceptibility of the wild southern brown shrimp Farfantepenaeus subtilis to infectious
hypodermal and hematopoietic necrosis IHHN and infectious myonecrosis IMN. Aquaculture 294:1-4.
Costa AM, Buglione CC, Bezerra FL, Martins PCC, Barracco MA. 2009. Immune assessment of farm-reared Penaeus vannamei shrimp naturally infected
by IMNV in NE Brazil. Aquaculture 291:141-146. Egidius E. 1987. Vibriosis: pathogenicity and pathology, a review. Aquaculture
67:15-28. Flegel TW, Nielsen L, Thamavit V, Kongtim S, Pasharawipas T. 2004. Presence
of multiple viruses in non-diseased, cultivated shrimp at harvest. Aquaculture
240:55–68. Flegel TW. 2006. Detection of major penaeid shrimp viruses in Asia, a historical
perspective with emphasis on Thailand. Aquaculture 258:1-33. GÓmez-Gil B, Tron-Mayén L, Roque A, Turnbull JF, Inglis V, Guerra-Flores AL.
1998. Species of Vibrio isolated from hepatopancreas, haemolymph and digestive tract of a population of healthy juvenile Penaeus vannamei.
Aquaculture 163:1–9.
Intaraprasong A, Khemayan K, Pasharawipas T, Flegel TW. 2009. Species- specific virulence of Vibrio harveyi for black tiger shrimp is associated
with bacteriophage-mediated hemocyte agglutination. Aquaculture 296:185-192.
Kautsky N, Rönnbäck P, Tedengren M, Troell M. 2000. Ecosystem perspectives on management of disease in shrimp pond farming. Aquaculture 191:
145–161. Kreig NK, Peter H. 1984. Bergey’s manual of systematic bactheriology, vol 1.
The Williams and Wilkin Co., Baltimore. Lavilla-Pitogo CR, Baticados MCL, Cruz-Lacierda ER, De La Pena LD. 1990.
Occurrence of luminous bacterial diseases of Penaeus monodon larvae in the philiphines. Aquaculture 91:1-13.
Lee KK, Yang TI, Liu PC, Wu JL, Hsu YL. 1999. Dual challenges of infectious pancreatic necrosis virus and Vibrio carchariae in the grouper,
Epinephelus sp. Virus Res. 63:131–134.
Lightner DV, Pantoja CR, Poulos BT, Tang KFJ, Redman RM, Andrade TPD, Bonami JR. 2004. Infectious myonecrosis: new disease in Pacific white
shrimp. Global Aquaculture Advocate, 7, 85. Liu H, Soderhall K, Jiravanichpaisal P. Antiviral immunity in crustaceans. J. Fish.
Shell. Immunol. 27:79-88.
Logan NA. 1994. Bacterial systematics. Blackwell Scientific Publication. London.
Manilal A, Sujith S, Selvin J, Shakir C, Gandhimathi R. 2010. Virulence of vibrios isolated from diseased black tiger shrimp, Penaeus monodon,
fabricius. Journal of the World Aquaculture Society 41:332-343. Nunes AJP, Martins PCC, Gesteira TCV. 2004. Carcinicultura ameaçada:
produtores sofrem com as mortalidades decorrentes do vírus da mionecrose infecciosa IMNV. Pan. Aquic. 14:37–51.
OIE Office International Epizootics. 2009. Manual of Diagnostic Tests for Aquatic Animals: Chapter 2.2.3. Infectious Myonecrosis.
96-104p. Phuoc LH, Corteel M, Nauwynck H J, Pensaert MB, Alday-Sanz V, Broeck van
den W, Sorgeloos P, Bossier P. 2008. Increased susceptibility of white spot syndrome virus-infected Litopenaeus vannamei to Vibrio
campbellii. Environ. Microbiol. 10:2718–2727.
Phuoc LH, Corteel M, Nguyen CT, Nauwynck H, Pensaert M, Alday-Sanz V, Broeck van den W, Sorgeloos P, Bossier P. 2009. Effect of dose and
challenge routes of Vibrio spp. on co-infection with white spot syndrome virus in Penaeus vannamei. Aquaculture 290:61-68.
Pinheiro ACAS, Lima APS, de Souza ME, Neto ECL, Adrião M, Gonçalves VSP, Coimbra MRM. 2007. Epidemiological status of Taura syndrome and
Infectious myonecrosis viruses in Penaeus vannamei reared in Pernambuco Brazil. Aquaculture 262:17–22.
Poulos BT, Tang KFJ, Pantoja CR, Bonami JR, Lightner DV. 2006. Purification and characterization of infectious myonecrosis virus of penaeid shrimp.
J. Gen. Vir. 87:987-996.
Rodriguez SAS, Gomez-Gil B, Lozano R. 2010. Density of Vibrios in Hemolymph and Hepatopancreas of Diseased Pacific White Shrimp,
Litopenaeus vannamei , from Northwestern Mexico. Journal Of The
World Aquaculture Society 41:76-83.
Roza D, Zafran, Taufik I, Girsang MA.1997. Pengendalian Vibrio harveyi secara biologis pada larva udang windu Penaeus monodon: Isolasi bakteri
penghambat. Jurnal Penelitian Perikanan Indonesia 3:1-10. Rukyani A. 1993. Penanggulangan penyakit udang windu Penaeus monodon.
Pusat Penelitian Pengembangan Perikanan, Jakarta. Saulnier D, Haffner P, Goarant C, Levy P, Ansquer D. 2000. Experimental
infection models for shrimp vibriosis studies: a review. Aquaculture 191: 133–144.
Senapin S, Phewsaiya K, Briggs M, Flegel TW. 2007. Outbreaks of infectious myonecrosis virus IMNV in Indonesia confirmed by genome
sequencing and use of an alternative RT-PCR detection method. Aquaculture
266:32-38. Tan Y, Xing Y, Zhang H, Feng Y, Zhou Y, Shi ZL. 2009. Molecular detection of
three shrimp viruses and genetic variation of white spot syndrome virus in Hainan Province, China, in 2007. J. Fish. Dis. 32:777-784.
Tang J, Ochoa WF, Sinkovits RS, Poulos BT, Ghabrial SA, Lightner DV, Baker TS, Nibert ML. 2008. Infectious myonecrosis virus has a totivirus-like,
120-subunit capsid, but with fiber complexes at the fivefold axes. PNAS 45105:17527-17531.
Tang KFJ, Pantoja CR, Poulos BT, Redman RM, Lightner DV. 2005. In Situ Hybridization demonstrates that Lithopenaeus vannamei, L. stylirostris
and Penaeus monodon are susceptible to experimental infection with infectious myonecrosis virus IMNV. Dis. Aquat. Org. 63:261-265.
Tsai JM, Shiau LJ, Lee HH, Chan PWY, Lin CY. 2002. Simultaneous detection of white spot syndrome virus WSSV and Taura syndrome virus TSV by
multiplex reverse transcription-polymerase chain reaction RT-PCR in Pacific white shrimp Penaeus vannamei. Dis. Aquat. Org. 50:9–12.
Van de Braak CBT, Botterblom MHA, Taverne N, van Muiswinkel WB, Rombout JHWM, van der Knaap WPW. 2002. The roles of haemocytes
and the lymphoid organ in the clearance of injected Vibrio bacteria in Penaeus monodon shrimp.
J. Fish. Shell. Immunol. 13:293–309.
Vandenberghe J, Li Y, Verdonk L, Li J, Sorgeloos P, Xuh S, Swings J. 1998. Vibrios associated with Penaeus chinensis Crustacea: Decapoda larvae
in Chinese shrimp hatcheries. Aquaculture 169:121–132. Walker PJ, Winton JR. 2010. Emerging viral disease of fish and shrimp. Vet. Res.
4151:1-24. Wurmann C, Madrid RM, Brugger AM. 2004. Shrimp farming in Latin America:
currents status, opportunities, challenges and strategies for sustainable development. Aquac. Econ. Manag. 8:117–141.
Yeh SP, Chen YN, Hsieh SL, Cheng W, Liu CH. 2009. Immune response of white shrimp, Litopenaeus vannamei, after a concurrent infection with white
spot syndrome virus and infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus. J. Fish. Shell. Immunol. 26:582-588.
Zhang XH, Austin B. 2000. Pathogenicity of Vibrio harveyi to salmonid. J. Fish. Dis.
23: 93-102.
Lampiran 1. Pembuatan Media Bakteri SWC dan TCBS.
1. Sea Water Complete SWC Cair.
Media SWC pada penelitian ini digunakan untuk kultivasi Vibrio harveyi yang akan digunakan untuk perlakuan infeksi. Media SWC cair sebanyak 1000 ml
dibuat dari bahan-bahan bacto peptone 5 g, yeast extract 1 g, glycerol 3 ml, air laut 750 ml dan akuades 250 ml.
Media SWC 1000 ml tersebut dilakukan dengan mencampurkan semua bahan sesuai takaran di atas. Pencampuran dilakukan di labu erlenmeyer yang
juga langsung digunakan sebagai wadah kultivasi. Selanjutnya campuran bahan- bahan dipanaskan di penangas air pada suhu 100
o
C sampai larut sempurna. Setelah larut, media selanjutnya disterilkan menggunakan autoklaf pada suhu
121
o
C dan tekanan 1 atm selama 15 menit.
2. Thiosulphate Citrate Bile Salt Sucrose TCBS Agar.
Media agar TCBS digunakan untuk menumbuhkan bakteri Vibrio karena media ini bersifat spesifik untuk menumbuhkan bakteri Vibrio. Dalam penelitian
ini, TCBS digunakan untuk pengukuran atau penghitungan Vibrio pasca perlakuan infeksi.
Untuk pembuatan 1000 ml media ini dilakukan dengan melarutkan bubuk media agar TCBS sebanyak 98 gram dalam 1000 ml akuades steril. Larutan
tersebut dipanaskan di penangas air pada suhu 100
o
C hingga larut sempurna.
Lampiran 2. Prosedur Pembuatan Preparat Histologi Jaringan.
Pada penelitian ini dilakukan pembuatan preparat histologi untuk jaringan otot dan organ limfoid udang uji. Dalam pembuatan preparat histologi jaringan
dilakukan tahap sebagai berikut:
1. Preparasi Jaringan.
Preparasi jaringan terdiri dari 5 tahap, yaitu: 1. Dehidrasi
2. Clearing 3. Impregnasi
4. Embedding 5. Blocking
Proses jaringan ini bertujuan agar jaringan yang umumnya lunak nantinya dapat dipotong setebal 3-5 µm, diwarnai dan dilihat bentuk selnya di bawah
mikroskop. Bila sayatan jaringan lebih tebal, maka bentuk sel dari jaringan tersebut tidak jelas karena terjadi penumpukan atau saling tindih menindih satu sel
dengan yang lainnya. Untuk mendapatkan sayatan yang tipis, maka jaringan perlu “diikat” dalam parafin. Agar “ikatan” dalam parafin tidak mudah lepas, maka
perlu dilakukan beberapa tahapan proses pembuatannya.
a. Proses Dehidrasi