ultraviolet dan cahaya tampak memiliki energi yang cukup untuk mempromosikan elektron pada kulit terluar ke tingkat energi yang lebih tinggi.
Spektrum UV-Vis mempunyai bentuk yang lebar dan hanya sedikit informasi tentang struktur yang bisa didapatkan dari spektrum ini. Tetapi
spektrum ini sangat berguna untuk pengukuran secara kuantitatif. Konsentrasi dari analit di dalam larutan bisa ditentukan dengan mengukur absorban pada panjang
gelombang tertentu dengan menggunakan hukum Lambert-Beer Dachriyanus, 2004.
Sinar Ultraviolet mempunyai panjang gelombang antara 200-400 nm, sementara sinar tampak mempunyai panjang gelombang 400-800 nm
Dachriyanus, 2004.
2.4.2 Komponen Spektrofotometri UV-Vis
Untuk mendapatkan hasil pengukuran yang optimum, setiap komponen dari instrumen yang dipakai harus berfungsi dengan baik. Komponen-komponen
spektrofotometri UV-Vis meliputi sumber sinar, monokromator, dan sistem optik. i.
Sebagai sumber sinar; lampu deuterium atau lampu hidrogen untuk pengukuran UV dan lampu tungsten digunakan untuk daerah visibel.
ii. Monokromator; digunakan untuk mendispersikan sinar ke dalam
komponen-komponen panjang gelombangnya yang selanjutnya akan dipilih oleh celah slit. Monokromator berputar sedemikian rupa sehingga
kisaran panjang gelombang dilewatkan pada sampel sebagai scan instrumen melewati spektrum.
Universitas Sumatera Utara
iii. Optik-optik; dapat didesain untuk memecah sumber sinar sehingga sumber
sinar melewati 2 kompartemen, dan sebagai mana dalam spektrofotometer berkas ganda double beam, suatu larutan blanko dapat digunakan dalam
satu kompartemen untuk mengkoreksi pembacaan atau spektrum sampel. Yang paling sering digunakan sebagai blanko dalam spektrofotometri
adalah semua pelarut yang digunakan untuk melarutkan sampel atau pereaksi Rohman, 2007.
2.4.3 Hukum Lambert-Beer
Hukum Lambert-Beer Beer’s law adalah hubungan linearitas antara absorban dengan konsentrasi larutan analit Dachriyanus, 2004.
Menurut hukum Lambert, serapan A berbanding lurus dengan ketebalan lapisan b yang disinari :
A= k. b Dengan bertambahnya ketebalan lapisan, serapan akan bertambah.
Menurut Hukum Beer, yang hanya berlaku untuk cahaya monokromatis dan larutan yang sangat encer, serapan A dan konsentrasi c adalah proporsional:
A= k. c Jika konsentrasi bertambah, jumlah molekul yang dilalui berkas sinar
akan bertambah, sehingga serapan juga bertambah. Kedua persamaan ini digabungkan dalam hukum Lambert-Beer, maka
diperoleh bahwa serapan berbanding lurus dengan konsentrasi dan ketebalan lapisan:
A= k . c. b
Universitas Sumatera Utara
Umumnya digunakan dua satuan c konsenterasi zat yang menyerap yang berlainan, yaitu gram per liter atau mol per liter. Nilai tetapan K dalam hukum
Lambert-Beer tergantung pada sistem konsentrasi mana yang digunakan. Bila c dalam gram perliter, tetapan tersebut disebut dengan absorptivitas a dan bila
dalam mol per liter tetapan tersebut adalah absorbtivitas molar ∈ . Jadi dalam
sistem yang direkombinasikan, Hukum Lambert-Beer dapat mempunyai dua bentuk:
A= a. b. c
gliter atau
A= ∈. b. c
molliter
Penandaan lain untuk a adalah ekstingsi spesifik, koefisien ekstingsi, dan absorbsi spesifik, sedangkan
∈ adalah koefisien ekstingsi molar Day and Underwood, 1999.
Ada beberapa hal yang harus diperhatikan dalam analisis dengan spektrofotometri ultraviolet yaitu:
1. Penentuan panjang gelombang serapan maksimum
Panjang gelombang yang digunakn untuk analisis kuantitatif adalah panjang gelombang dimana terjadi absorbansi maksimum. Untuk memperoleh panjang
gelombang serapan maksimum dapat diperoleh dengan membuat kurva hubungan antara absorbansi dengan panjang gelombang dari suatu larutan baku dengan
konsentrasi tertentu.
2. Pembuatan kurva kalibrasi
Dilakukan dengan membuat seri larutan baku dalam berbagai konsentrasi kemudian asorbansi tiap konsentrasi di ukur lalu dibuat kurva yang merupakan
Universitas Sumatera Utara
hubungan antara absorbansi dengan konsentrasi. Kurva kalibrasi yang lurus menandakan bahwa hukum Lambert-Beer terpenuhi.
3. Pembacaan absorbansi sampel
Absorbansi yang terbaca pada spektrofotometer hendaknya antara 0,2 sampai 0,8 atau 15 sampai 70 jika dibaca sebagai transmitan. Hal ini
disebabkan karena pada kisaran nilai absorbansi tersebut kesalahan fotometrik yang terjadi adalah paling minimal Rohman, 2007.
2.4.3 Analisis Kuantitatif
