suhu 45 C Sharmin, et al, 2007. Cacing Ascaridia galii aktivitas proteolitik
optimumnya terjadi pada suhu 70 C Balqis, 2007. Sedangkan suhu optimum
protease isolat bakteri termofilik Bacillus Termofilik dari sumber air panas Plantungan adalah 65
C. Suhu ini hampir sama dengan jenis bakteri termofil yang lain.
Gambar. 4.5 Profil pengaruh suhu pada laju reaksi hidrolisis enzimatis kasein oleh protease dari isolate bakteri termofilik Bacillus termofilik
Untuk mengetahui lebih jelas suhu optimum protease yang dihasilkan, maka dari data pada Tabel 4.4 selanjutnya dibuat grafik dengan mengalurkan
waktu inkubasi dengan laju reaksi. Grafik pengaruh suhu optimum protease disajikan pada Gambar 4.5.
Berdasarkan data dari Tabel 4.4 dan Gambar 4.5 tersebut bahwa aktivitas optimum hidrolisis kasein oleh isolat bakteri termofilik terjadi pada suhu 65
C.
4.3.3. Penentuan pH Optimum Protease
Pada penelitian ini, untuk mengetahui pH optimum protease dalam menghidrolisis larutan kasein 1 dalam buffer sodium asetat 0,05 M dengan pH
divariariasi 4, 4,5, 5, 5,5 dan buffer fosfat 0,05 M dengan pH divariariasi 6, 7,
7,5, 8, 8,5 dan 9 , kemudian ditambahkan 100 µL supernatan, untuk selanjutnya
diinkubasi pada suhu 65 C, selama 30 menit. Pengukuran absorbansi protease
disajikan pada table 4.5. Tabel 4.5. Hasil pengukuran aktivitas enzim pada pH inkubasi yang berbeda
protease isolat bakteri termofilik Bacillus termofilik No pH Tabung
A λ = 275 nm A rata-
rata Δ A =As-
Ak 1
2 3
1 4
enzim 0,692
0,692 0,691
0,6916 0,0046
kontrol 0,687
0,687 0,687
0,6870 2
4,5 enzim
0,708 0,708
0,708 0,7080
0,0174 kontrol
0,690 0,690
0,691 0,6903
3 5
enzim 0,744
0,744 0,744
0,7440 0,0200
kontrol 0,724
0,724 0,724
0,7240 4
5,5 enzim
0,709 0,708
0,708 0,7083
0,0230 kontrol
0,685 0,686
0,685 0,6853
5 6
enzim 0,658
0,658 0,658
0,6580 0,0260
kontrol 0,632
0,632 0,632
0,6320 6
7 enzim
0,750 0,751
0,750 0,7503
0,0270 kontrol
0,723 0,724
0,723 0,7233
7 7,5
enzim 0,720
0,720 0,720
0,7200 0,0340
kontrol 0,686
0,686 0,686
0,6860 8
8 enzim
0,820 0,820
0,821 0,8203
0,0587 kontrol
0,761 0,762
0,762 0,7616
9 8,5
enzim 0,767
0,768 0,768
0,7673 0,0453
kontrol 0,721
0,723 0,722
0,7220 10
9 enzim
0,675 0,675
0,676 0,6753
0,0420 kontrol
0,632 0,634
0,634 0,6333
Dari kurva kalibrasi larutan tyrosin metode Horikoshi, diperoleh persamaan y = 0,4080x – 0,029, maka aktivitas protease dapat dihitung. Hasil
pengamatan pengaruh pH pada reaksi hidrolisis enzimatis larutan kasein oleh protease , seperti yang tersaji dalam Tabel 4.6 dan Gambar 4.5.
Tabel 4.6. Pengaruh pH pada aktivitas enzim protease dalam reaksi hidrolisis kasein
No pH
Aktivitas Protease x 10
-3
U.mL
-1
Aktivitas Protease relatif 1
4 27,410
38,31 2
4,5 37,853
52,90 3
5 39,974
55,87
4 5,5
42,421 59,29
5 6
44,868 62,71
6 7
45,684 63,85
7 7,5
51,395 71,83
8 8
71,545 100
9 8,5
60,613 84,72
10 9
57,921 80,96
Untuk mengetahui lebih jelas pH optimum protease yang dihasilkan, maka dari data pada Tabel 4.6 selanjutnya dibuat grafik dengan mengalurkan waktu
inkubasi dengan laju reaksi. Grafik tersebut dapat dilihat pada Gambar 4.6.
Gambar. 4.6 Profil pengaruh pH pada laju reaksi hidrolisis enzimatis kasein oleh protease dari isolat bakteri termofilik Bacillus termofilik
Menurut Jang, et al, 2007, pH optimum aktivitas enzim proteolitik yang dihasilkan oleh Thermopilic Bacillus sp terjadi pada pH 8. Pada pH 8 ini saat
aktivitas enzim proteolitik mencapai optimum, terjadi akibat protoniasi sisi asam amino pada sisi aktifnya, yaitu gugus yang bereran pada proses katalitik
melepaskan protonnya sehingga menjadi aktif. Aktivitas proteolitik optimum Bacillus thermorubber terjadi pada pH 9 Sharmin, et al, 2007, Cacing Ascaridia
galii aktivitas proteolitik optimumnya terjadi pada pH 7 Balqis, 2007, Bacillus termofilik strain HS08 aktivitas proteolitik optimumnya terjadi pada pH 7,5
Guangrong, et al, 2006, Bacillus subtilis BAC4 aktivitas proteolitik
optimumnya terjadi pada pH 9 Supartono, 2003, Bacillus sp aktivitas proteolitik optimumnya terjadi pada pH 7 Naiola, et al, 2007, Taxoplasma gandii aktivitas
proteolitik optimumnya terjadi pada pH 7,5 Aftab, et al, 2006, Bacillus firmus 7728 aktivitas proteolitik optimumnya terjadi pada pH 9 Rao, et al. 2007.
Berdasarkan data dari Tabel 4.6 dan Gambar 4.6 bahwa pH optimum hidrolisis enzimatis larutan kasein oleh protease dari isolat bakteri termofilik
Bacillus termofilik adalah 8. pH optimum ini hampir sama dengan jenis bakteri termofilik yang lain seperti Thermopilic Bacillus sp.
4.3.4 Penentuan Energi Aktivasi Protease
