METODOLOGI PENELITIAN 4.1 Jenis penelitian
Jenis penelitian ini merupakan uji laboratorium yang dianalisis secara deskriptif untuk mengetahui ada atau tidaknya kontaminasi S. aureus pada
sashimi di seluruh restoran jepang Kota Medan.
4.2 Waktu dan tempat penelitian 4.2.1 Waktu
Penelitian dilaksanakan pada bulan Agustus-November 2015.
4.2.2 Tempat
Pengumpulan data dilakukan di seluruh restoran jepang yang menyediakan masakan sashimi. Pemilihan tempat ini disebabkan tingginya tingkat konsumsi
Sashimi pada mahasiswa Universitas Sumatera Utara dan belum adanya penelitian tentang deteksi S. aureus pada sashimi di restoran jepang Kota Medan.
4.2.3. Tempat Uji Laboratorium
Di Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Sumatera Utara mengingat bahwa laboratorium ini merupakan laboratorium terdekat
sehingga mengurangi durasi waktu yang diperlukan untuk pengiriman sampel.
4.3. Populasi dan Sampel
Populasi dalam penelitian ini adalah sashimi yang disajikan diseluruh restoran jepang kota medan. Pengambilan sample dalam penelitian ini
menggunakan teknik simple random sampling karena populasi yang diteliti bersifat homogen. Rumus yang digunakan dalam penentuan jumlah sampel adalah
sebagai berikut:
Namun, jumlah populasi yang kurang dari 100 menyebabkan teknik pengambilan sampel ini tidak dapat digunakan. Dengan demikian, teknik yang
digunakan dalam pengambilan sampel adalah teknik total sampling.
Universitas Sumatera Utara
4.4 Metode pengumpulan data
Pengumpulan data primer dilakukan dengan observasi secara langsung dengan mengambil sampel sashimi dan melakukan uji laboratorium sehingga
diperoleh data jumlah sashimi yang terkontaminasi S. aureus.
4.4.1 Teknik Pengambilan Sampel
a. Persiapkan berbagai alat, seperti beaker glass sebagai tempat sampel, yakni
sashimi. b.
Persiapkan catatan pada formulir pemeriksaan tentang lokasi tempat pengambilan sampel dan tanggal pengambilan.
c. Makanan dibeli sebanyak satu porsi tanpa memberikan perlakuan khusus
pada sampel guna menghindari pemberian sampel yang berbeda dari yang biasa dijajakan.
d. Sampel dimasukkan ke dalam beaker glass yang sudah disterilkan dan diberi
kode penanda. e.
Sampel dikirim segera ke Laboratorium Mikrobiologi dengan secepatnya, maksimal 24 jam.
4.4.2 Alat dan Bahan
1. Alat •
Timbangan •
Blender •
Labu Erlenmeyer •
Inkubator suhu 37°C •
Tabung reaksi •
Ose •
Lampu spritus Bunsen •
Mikroskop •
Rak tabunng reaksi •
Cawan petri
Universitas Sumatera Utara
• Object glass
• Spidol
2. Bahan •
Media Manitol Salt Agar •
H
2 2
• Serum
• Media Blood agar
• Imvic
• Aquadest
• Selenith broth
• Larutan gentian violet
• Aceton alkohol
• Fuchsin air
• Minyak imersi
• Spritus
4.4.3 Cara Kerja
1. Isolasi Bakteri A.
Timbang sashimi sebanyak 25 gram, dihancurkan atau dicairkan. B.
Tambahkan dengan menggunakan aquadest 90 ml. C.
10 ml dari larutan tadi dimasukkan ke dalam labu Erlenmeyer yang sudah dibubuhi selenith broth sebagai media pengayaanya.
D. Ambil 5 cc ose cairan tadi dan tanam secara zigzag pada media Manitol Salt
Agar dan Blood agar. E.
Kemudian diinkubasi selama 18-24 jam pada suhu 37°C. F.
Amati koloni yang tumbuh. G.
Ambil koloni dengan menggunakan ose steril kemudian sapukan pada object glass, kemudian difiksasi dengan lampu bunsen.
H. Lakukan pewarnaan Gram.
I. Lihat di bawah mikroskop dengan pembesaran 1000x menggunakan minyak
imersi untuk identifikasi bakteri.
Universitas Sumatera Utara
2. Uji Biokimia Tes Katalase
1. Teteskan satu tetes hidrogen peroksida H
2
O
2
di atas kaca slide yang bersih.
2. Sterilkan osesengkelit.
3. Ambil koloni bakteri yang akan diuji.
4. Campurkan koloni yang diambil ke dalam hidrogen peroksida.
5. Interpretasi :
• Bila terbentuk gelembung udara
tes katalase positif. •
Bila tidak terbentuk gelembung udara tes katalase negatif.
Tes Koagulase
Terdapat dua cara untuk melakukan tes koagulase yaitu Slide Tes
1. Teteskan satu tetes aquadest diatas kaca slide yang bersih
2. Emulsikan koloni bakteri Staphylococcus sp. pada tetesan aquadest itu.
3. Tambahkan satu sengkelit plasma manusia.
4. Campuran tersebut diaduk menggunakan batang pengaduk.
5. Interpretasi
Perhatikan adanya gumpalan. •
Bila terbentuk gumpalan slide tes + : Staphylococcus
aureus. •
Bila gumpalan tidak terbentuk slide tes -
4.5 Metode Analisis Data
Data yang terkumpul dari uji laboratorium diolah dengan secara manual dan diolah dengan metode statistik deskriptif.
BAB 5
Universitas Sumatera Utara
HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN
5.1. Hasil Penelitian 5.1.1. Deskripsi Lokasi Penelitian
Penelitian dilakukan di seluruh restoran jepang yang ada di Kota Medan. Di Kota Medan terdapat sepuluh restoran Jepang yang menyajikan hidangan
sashimi berbahan dasar ikan salmon. Dari kesepuluh restoran tersebut seluruhnya bersedia dilakukan pemeriksaaan terhadap hidangan sashimi yang disajikan
restoran.
5.1.2. Karakteristik Sampel Penelitian
Sashimi yang diambil adalah sashimi yang dihidangkan di seluruh restoran jepang di Kota Medan. Waktu pengambilan sampel antara pukul 10.00 WIB –
12.00 WIB, kemudian sashimi tersebut langsung dibawa ke Laboratorium Mikrobiologi
Fakultas Kedokteran
USU untuk
diidentifikasi bakteri
Staphylococcus aureus . Ada beberapa informasi mengenai sample penelitian yang
tidak dicantumkan dalam penelitian ini untuk menjaga kerahasiaan data yang diperoleh dari penelitian ini yaitu nama dan alamat restoran.
5.1.3. Hasil Pemeriksaan Laboratorium
Dari pemeriksaan tersebut, didapatkan data bahwa dari 10 sampel sashimi yang diperiksa, 5 sampel 50 tidak ditemukan adanya pertumbuhan bakteri
Staphylococcus aureus , hanya 5 sampel 50 yang ditemukan adanya
pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus. Hal ini dapat dilihat pada tabel 5.1 di bawah ini.
Universitas Sumatera Utara
Tabel 5.1 Hasil analisis sashimi yang di jual di restoran Jepang Kota Medan tahun 2015
No Kode
Sampel Mikroskopis
pewarnaan gram
Identifikasi Hasil identifikasi
pada media MSA Tes
Katalase Tes
Koagulase 1.
A -
- -
- 2.
B Coccus gram
+ +
+ Staphylococcus
aureus 3.
C -
- -
- 4.
D -
- -
- 5.
E Coccus gram
+ +
+ Staphylococcus
aureus 6.
F -
- -
- 7.
G Coccus gram
+ +
+ Staphylococcus
aureus 8.
H -
- -
- 9.
I Coccus gram
+ +
+ Staphylococcus
aureus 10.
J Coccus gram
+ +
+ Staphylococcus
aureus
Universitas Sumatera Utara
5.2. Pembahasan
Dari pemeriksaan di Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Sumatera Utara, 10 sashimi yang diperiksa, 5 diantaranya tidak
ditemukan adanya Staphylococcus aureus, namun pada sampel tersebut ditemukan adanya pertumbuhan bakteri lain, yaitu Klebsiella, Eschericia coli,
Bacilus subtilis . Sedangkan 5 sampel lagi yang ditemukan adanya Staphylococcus
aureus juga ditemukan adanya bakteri Klebsiella, Eschericia coli, Bacilus
Subtilis .
Staphylococcus aureus merupakan bakteri yang dapat menyebabkan
penyakit bawaan pangan, pada dasarnya bakteri ini merupakan flora normal pada permukaan kulit terutama disekitar hidung dan mulut Pratami, 2013. Bakteri
Staphylococcus aureus tumbuh dengan mudah pada sebagian besar media
bakteriologis dengan kondisi aerob atau mikroaerofilik, bakteri ini tumbuh paling cepat pada suhu 37°C Jawetz, 2014. Staphylococcus aureus dapat
mengkontaminasi makanan atau bahan olahan pangan yang menimbulkan keluhan seperti pusing, muntah-muntah, kram usus, diare berdarah dan berlendir pada
beberapa kasus, sakit kepala, kram otot, berkeringat, menggigil, detak jantung lemah, pembengkakan saluran pernafasan. Keluhan tersebut timbul setelah 1-7
jam, namun bisa juga terjadi 2-4 jam setelah mengkonsumsi makanan yang terkontaminasi.
Keracunan oleh Staphylococcus aureus diakibatkan oleh enterotoksin yang tahan panas yang dihasilkan oleh bakteri tersebut Kusuma, 2009. Selain itu
enterotoksin Staphylococcus aureus dapat menimbulkan Sindroma syok toksik SST yang timbul secara tiba-tiba dengan gejala demam tinggi, muntah, diare,
mialgia, ruam, dan hipotensi, dengan gagal jantung dan ginjal pada kasus yang berat. SST sering terjadi dalam lima hari permulaan haid pada wanita muda yang
menggunakan tampon, atau pada anak-anak dan pria dengan luka yang terinfeksi stafilokokus. Staphylococcus aureus dapat diisolasi dari vagina, tampon, luka atau
Universitas Sumatera Utara
infeksi lokal lainnya, tetapi praktis tidak ditemukan dalam aliran darah Jawetz et al.,
2014. Keberadaan Staphylococcus aureus dalam bahan pangan erat kaitannya
dengan sanitasi pekerja serta kebersihan lingkungan dan peralatan pengolahan Hidayati, 2012. Bahan makanan yang biasa terkontaminasi oleh Staphylococcus
aureus adalah bahan makanan yang disiapkan menggunakan tangan, seperti
penyiapan sayuran mentah untuk salad Agnesia, 2008. Sashimi merupakan bahan makanan yang diolah menggunakan tangan dan tanpa dimasak, sehingga
berpotensi untuk terkontaminasi oleh Staphylococcus aureus. Pada penelitian ini terbukti ditemukan 5 dari 10 sajian sashimi yang ada di restoran jepang di kota
medan terkontaminasi Staphylococcus aureus. Ditemukannya bakteri Staphylococcus aureus ini bisa diakibatkan oleh
proses penyajian sashimi yang tidak steril yaitu tangan penyaji sashimi ataupun peralatan yang digunakan untuk menyajikan sashimi tersebut terkontaminasi. Hal
ini sesuai dengan penelitian yang dilakukan oleh Karimela dkk pada tahun 2013 di Manado yang menyatakan bahwa cara pengolahan yang kurang saniter dan
higienis serta penyimpanan dalam keadaan tidak dilindungi atau tidak dikemas dengan baik pada kondisi tropik mengakibatkan produk ikan olahan tradisional
sangat rentan terhadap kerusakan mikrobiologis yaitu berupa infeksi bakteri. Asumsi lain ditemukannya Staphylococcus aureus pada identifikasi bakteri ini
adalah adanya kontaminasi pada peralatan yang digunakan untuk proses identifikasi bakteri tersebut ataupun kontaminasi pada media transport yang
digunakan untuk membawa sampel ke laboratorium pemeriksaan. Selain Staphylococcus aureus, bakteri lain penyebab penyakit bawaaan
pangan yang ditemukan pada penelitian ini adalah Salmonela, Bacillus cereus, Klebsiela
, Eschericia coli. Ditemukannya bakteri lain erat kaitannya dengan lingkungan yang kotor memudahkan perkembangan mikroorganisme dalam
produk ikan Salamena, 2014.
Universitas Sumatera Utara
Pada kelompok yang tidak ditemukannnya bakteri Staphylococcus aureus hal ini diduga karena proses pembuatan sashimi tersebut telah higienis ataupun
peralatan yang digunakan untuk proses identifikasi bakteri dilaboratorium pemeriksaan sudah steril.
Universitas Sumatera Utara
BAB 6 KESIMPULAN DAN SARAN
6.1. Kesimpulan
