Pembuatan Larutan Pereaksi Pembuatan Kitosan Nanopartikel Pembuatan Kitosan Nanopartikel yang Bermuatan Ion Logam Pembuatan Media Padat Nutrient Agar NA Pembuatan Media Padat Muller Hinton Agar MHA

- Akuades - Natrium tripolifosfat - Serbuk ZnO Merck - Media Nutrient Agar NA Merck - Media Muller Hinton Agar MHA Oxoid - Biakan Escherichia coli - Biakan Staphylococcus aureus

3.2 Prosedur penelitian

3.2.1 Pembuatan Larutan Pereaksi

a. Larutan asam asetat 1 Sebanyak 10 mL asam asetat glacial dimasukkan ke dalam labu takar 1000 dihomogenkan. b. Larutan natrium tripoliphosfat 1 Sebanyak 1 g natrium tripoliphosfat dilarutkan dengan 50 mL akuades. Kemudan dimasukkan ke dalam labu takar 100 mL dan diencerkan dengan akuades sampai garis tanda, lalu dihomogenkan. c. Larutan kitosan 0,3 Sebanyak 3 g kitosan dilarutkan dengan 1000 mL larutan asam asetat 1.

3.2.2 Pembuatan Kitosan Nanopartikel

Ditambahkan 40 mL larutan tripoliphosfat ke dalam 1000 mL larutan kitosan 0,3. Diaduk dengan pengaduk selama 20 menit. Larutan tersebut diletakkan pada ultrasonik bath selama 30 menit. Disentrifugasi pada 1.200 rpm selama 10 menit kemudian didekantasi. Endapan dimasukkan ke dalam freeze dryer kemudian dikarakterisasi dengan SEM dan FT-IR. Universitas Sumatera Utara

1.2.2 Pembuatan Kitosan Nanopartikel yang Bermuatan Ion Logam

Dilarutkan 0,3 g kitosan nanopartikel ke dalam 100 mL asam asetat 1. Ditambahkan larutan ion Zn 2+ hingga konsentrasi 120 μgmL dan diaduk selama 12 jam pada temperatur kamar. Sebagian larutan tersebut dicetak film pada plat kaca. Film tersebut dikeringkan hingga benar-benar kering kemudian diuji karakterisasinya dengan FT-IR dan sebagian larutan digunakan untuk uji aktivitas antibakteri.

1.2.4 Pembuatan Media Padat Nutrient Agar NA

Dilarutkan 2 g NA dalam 100 mL akuades. Dipanaskan di atas hot plate sambil diaduk menggunakan batang pengaduk sampai mendidih. Dibagi dalam beberapa tabung reaksi sebanyak 5 mL. Ditutup rapat dengan kapas. Disterilisasi dalam autoklaf pada suhu 121 C tekanan 1-2 atm selama 15 menit. Dibiarkan sampai memadat dalam keadaan miring.

1.2.5 Pembuatan Media Padat Muller Hinton Agar MHA

Dilarutkan 3,4 g MHA dalam 100 mL akuades. Dipanaskan di atas hot plate sambil diaduk menggunakan batang pengaduk sampai mendidih. Ditutup rapat dengan kapas. Disterilisasi dalam autoklaf pada suhu 121 C tekanan 1-2 atm selama 15 menit. Universitas Sumatera Utara

1.2.6 Penyedian Biakan Stok Bakteri