3.7.7 Perlakuan I Nilai
Ambil kultur Enterococcus faecalis yang telah dikultur selama 24 jam. Dilakukan perhitungan OD Enterococcus faecalis dengan cara :
Absorbansi OD
Enterococcus faecalis
1. Ambil 200µL bakteri Enterococcus faecalis dan 200µL BHI Brain
Heart Infusion Broth dimasukkan kedalam 96 well plate. 2.
Dimasukkan ke microplate reader untuk mengukur OD dengan panjang gelombang 450 nm dengan standard Enterococcus faecalis 10
6
3. Lalu dicari nilai rata-rata OD agar dimasukkan kedalam MTT Assay
untuk mendapatkan biofilm. 0,550.
4. Lalu diambil 200µL dimasukkan ke 96 well plate untuk diinkubasi
selama 24 jam untuk mendapatkan biofilm. 5.
Diinkubasi dalam inkubator selama 24 jam 37 C
Gambar 3.29. 96 Well plate Gambar 3.30. 200µL bakteri Enterococcus faecalis
dan 200µL BHI Broth dimasukkan
kedalam 96 well plate.
Gambar 3.31. Inkubator
3.7.8 Perlakuan II
Pengambilan 96 well plate yang telah diinkubasi selama 24 jam. Lalu dibuang supernatannya dengan cara pengambilan 200µL kemudian dicuci dengan
menggunakan PBS Steril sebanyak 200µL dan diletakkan bahan coba dengan berbagai konsentrasi dan CaOH
2
1. Observasi dalam 4 Jam
sebanyak 200µL
Pada pukul 09.55 dimasukkan kedalam inkubator selama 4 jam lalu dikeluarkan pada pukul 13.55 dan dilakukan MTT Assay. Medium kultur bakteri dari
setiap well ditambahkan sebanyak 50µL larutan MTT 5mgml dan diinkubasi pada suhu 37
C selama 3 jam. Setelah 3 jam pukul 16.55 well dikeluarkan dari inkubator dan ditambahkan 150µL acidified isopropanol lalu diletakkan diatas orbital shaker
50 rpm selama 1 jam. Setelah 1 jam pukul 17.55 dilakukan perhitungan nilai obsorbansi OD pada kelompok perlakukan yang dipresentasikan terhadap OD
kelompok CaOH2 untuk menentukan viabilitas bakteri dengan panjang gelombang 650 nm.
2. Observasi pada 6 Jam Pada pukul 09.55 dimasukkan kedalam inkubator selama 4 jam lalu
dikeluarkan pada pukul 15.55 dan dilakukan MTT Assay. Medium kultur bakteri dari setiap well ditambahkan sebanyak 50µL larutan MTT 5mgml dan diinkubasi pada
suhu 37
3. Observasi pada 8 Jam C selama 3 jam. Setelah 3 jam pukul 18.55 well dikeluarkan dari inkubator
dan ditambahkan 150µL acidified isopropanol lalu diletakkan diatas orbital shaker 50 rpm selama 1 jam. Setelah 1 jam pukul 19.55 dilakukan perhitungan nilai
obsorbansi OD pada kelompok perlakukan yang dipresentasikan terhadap OD kelompok CaOH2 untuk menentukan viabilitas bakteri dengan panjang gelombang
650 nm.
Pada pukul 09.20 dimasukkan kedalam inkubator selama 4 jam lalu dikeluarkan pada pukul 17.20 dan dilakukan MTT Assay. Medium kultur bakteri dari
setiap well ditambahkan sebanyak 50µL larutan MTT 5mgml dan diinkubasi pada suhu 37
4. Observasi pada 24 Jam C selama 3 jam. Setelah 3 jam pukul 20.20 well dikeluarkan dari inkubator
dan ditambahkan 150µL acidified isopropanol lalu diletakkan diatas orbital shaker 50 rpm selama 1 jam. Setelah 1 jam pukul 21.20 dilakukan perhitungan nilai
obsorbansi OD pada kelompok perlakukan yang dipresentasikan terhadap OD kelompok CaOH2 untuk menentukan viabilitas bakteri dengan panjang gelombang
650 nm.
Pada pukul 09.00 dimasukkan kedalam inkubator selama 4 jam lalu dikeluarkan pada pukul 10.00 esokan harinya dan dilakukan MTT Assay. Medium
kultur bakteri dari setiap well ditambahkan sebanyak 50µL larutan MTT 5mgml dan diinkubasi pada suhu 37
C selama 3 jam. Setelah 3 jam pukul 13.00 well dikeluarkan dari inkubator dan ditambahkan 150µL acidified isopropanol lalu
diletakkan diatas orbital shaker 50 rpm selama 1 jam. Setelah 1 jam pukul 14.00 dilakukan perhitungan nilai obsorbansi OD pada kelompok perlakukan yang
dipresentasikan terhadap OD kelompok CaOH
2
untuk menentukan viabilitas bakteri dengan panjang gelombang 650 nm.
Gambar 3.32. Supernatan dan telah dicuci dengan PBS Steril sebanyak 200µL
Gambar 3.33. Supernatan kultur Enterococus faecalis dalam 96 well plate dibagi dalam waktu 4 jam,6 jam,8 jam dan 24 jam
Gambar 3.34. Orbital shaker gambar 3.34 dipakai tujuannya untuk mengaduk bahan MTT
yang kita masukkan ke dalam bahan coba akar tercampur secara merata. Pada penelitian ini memakai kecepatan 50 rpm dengan lama waktu 1 jam.
Orbital Shaker
3.8 Analisis Data
Kategori