Gambar 3.1. Sea Cucumber Gambar 3.2. Ekstrak Sea Cucumber Stichopus variegatus Stichopus variegatus
Gambar 3.3. Ekstrak Sea Cucumber Gambar 3.4. Alat stal rotari Stichopus variegatus pasta
3.7.2 Pembuatan media bakteri
Sebelum spesimen dibiakkan, dibuat media Mueller Hinton Agar, sebanyak 12 gram dilarutkan ke dalam 240 ml aquadest untuk 40 petri 20 mlPetri, lalu dipanaskan di
atas tungku pemanas magnetik sampai mendidih. Kemudian media yang telah masak, disterilkan di dalam autoklaf selama 15 menit dengan tekanan udara 2 ATM suhu
121°C. Setelah disterilkan, media disimpan dalam lemari pendingin. Jika akan digunakan kembali, media dipanaskan kembali hingga mendidih lalu dituangkan ke
dalam masing-masing petri dan dibiarkan hingga dingin.
3.7.3 Pembiakan spesimen
Kegiatan pembiakan spesimen dilakukan dalam suasana anaerob pada inkubator CO2. Enterococcus faecalis yang digunakan adalah spesimen stem-cell
Enterococcus faecalis ATCC 29212 yang telah dibiakkan secara murni pada media MHA yang telah disiapkan pada prosedur sebelumnya dalam suasana anaerob.
Sebanyak 1-2 ose dari biakkan murni bakteri uji yang telah dikultur dan tumbuh dengan subur disuspensikan dengan menggunakan larutan NaCl 0,9 sampai
diperoleh kekeruhan sesuai standard 0,6 Mc Farland atau sebanding dengan jumlah bakteri 1 x 10
6
CFUml. BHI Brain Heart Infusion Broth steril diambil di dalam kulkas dan dikeluarkan dan dibiarkan di dalam ruangan. Hidupkan bunsen lalu
panaskan ose agar ose dapat steril, panaskan ose sampai membara agar ose steril. Setelah itu Enterococcus faecalis diambil dari BHI Brain Heart Infusion Broth dan
pada saat dibuka harus didekat dengan bunsen agar bakteri Enterococcus faecalis tidak terkontaminasi. Setelah itu diinkubator dalam suhu 37
o
C selama 24 jam . Lalu diukur pada microplate reader dengan panjang gelombang 450 nm didapat hasil
Enterococcus faecalis yang dikultur: 0,532 dan 0,548.
Gambar 3.5 Nilai OD normal Enterococcus faecalis dengan panjang gelombang 450 nm
Pada gambar 3.5 didapat nilai normal Enterococcus faecalis dengan panjang gelombang yaitu dalam menentukan standard kekeruhan dari bakteri Enterococcus
faecalis yang ingin didapat. Pada nilai normal Enterococccus faecalis pada 1 x 10
6
Gambar 3.6. BHI Brain Gambar 3.7. BHI Brain Heart Infusion Agar, CFU ml adalah 0,550.
Heart Infusion Broth bunsen, tabung reaksi, kultur Enterococcus faecalis ATCC 29212
Gambar 3.8 Enterococcus faecalis 3.9. Enterococcus faecalis yang yang dikultur: 0,532 dikultur: 0,548
3.7.4 Mensterilkan Bahan Coba Sea Cucumber Stichopus variegatus
