PENGARUH SUSPENSI JAMUR Metarhizium anisopliae TERHADAP MORTALITAS LARVA NYAMUK Anopheles aconitus
commit to user
PENGARUH SUSPENSI JAMUR Metarhizium anisopliae
TERHADAP MORTALITAS LARVA NYAMUK Anopheles aconitus
SKRIPSI
Untuk Memenuhi Persyaratan Memperoleh Gelar Sarjana Kedokteran
PRISKA WAHYU WINDARTI G0007016
FAKULTAS KEDOKTERAN UNIVERSITAS SEBELAS MARET
SURAKARTA 2010
(2)
commit to user
ii
PENGESAHAN SKRIPSI
Skripsi dengan judul : Pengaruh Suspensi Jamur Metarhizium anisopliae
Terhadap Mortalitas Larva Nyamuk Anopheles aconitus
Priska Wahyu Windarti, NIM/Semester : G.0007016/VII, Tahun : 2010 Telah diuji dan sudah disahkan di hadapan Dewan Penguji Skripsi
Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret Surakarta Pada Hari Rabu, Tanggal 29 Desember 2010
Pembimbing Utama
Nama : Cr. Siti Utari, Dra., M.Kes
NIP : 19540505 198503 2 001 (………...) Pembimbing Pendamping
Nama : Yulia Sari, S.Si, M.Si
NIP : 19800715 200812 2 001 (………...) Penguji Utama
Nama : Darukutni, dr., Sp.ParK
NIP : 19470809 197603 1 001 (………) Anggota Penguji
Nama : Vicky Eko N.H., dr., M.Sc., Sp.THT-KL
NIP : 19770914 200501 1 001 (………)
Surakarta, Ketua Tim Skripsi Dekan FK UNS
Muthmainah, dr., M.Kes. Prof. Dr. A.A. Subijanto, dr., MS
(3)
commit to user
vi PRAKATA
Puji dan syukur ke hadirat Tuhan Yang Maha Kuasa atas limpahan berkat dan kasih-Nya, sehingga peneliti dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul “Pengaruh Jamur Suspensi Metarhizium anisopliae terhadap Mortalitas Larva Nyamuk Anopheles aconitus” yang merupakan salah satu syarat memperoleh gelar kesarjanaan di Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret Surakarta.
Penyusunan skripsi ini tidak dapat terselesaikan tanpa bantuan dan dukungan yang diberikan berbagai pihak. Untuk itu peneliti mengucapkan terima kasih kepada:
1. Prof. Dr. AA. Subijanto, dr., MS. Selaku Dekan Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret Surakarta.
2. Tim Skripsi Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret Surakarta yang telah memberikan pengarahan dan bantuan.
3. CR. Siti utari, Dra., M. Kes. Selaku Pembimbing Utama yang telah memberikan bimbingan, nasehat, pengarahan, dan motivasi bagi peneliti. 4. Yulia Sari, S.Si., M.Si. Selaku Pembimbing Pendamping yang telah
memberikan bimbingan, nasehat, pengarahan, dan motivasi bagi peneliti. 5. Darukutni, dr., Sp. ParK.. Selaku Penguji Utama yang telah berkenan menguji
skripsi ini.
6. Vicky Eko N.H., dr., M.Sc., Sp.THT-KL. Selaku Anggota Penguji yang telah berkenan menguji skripsi ini.
7. Seluruh Staf B2P2VRP Salatiga, Ibu Widia, Ibu Blondyn, Ibu Yuni, dan Bapak Rendro yang telah membantu pelaksanaan penelitian skripsi ini.
8. Seluruh Staf Laboratorium Hama Penyakit Tanaman Fakultas Pertanian UNS, Bapak Supiyani dan Bapak Sawab yang telah membantu pelaksanaan penelitian skripsi ini.
9. Tim Skripsi, Ibu Enny dan Bapak Nardi yang telah membantu penyelesaian proses skripsi ini.
10.Anggota keluarga dan teman-teman yang telah membantu pelaksanaan skripsi ini.
Peneliti menyadari bahwa dalam penulisan skripsi ini masih banyak kekurangan, oleh karena itu, saran dan kritik yang membangun sangat diharapkan. Dan akhirnya peneliti berharap semoga skripsi ini dapat menjadi sumbangan pemikiran dan bermanfaat untuk semua pihak, bagi ilmu kedokteran pada umumnya dan bagi pembaca pada khususnya.
Surakarta, 20 Desember 2010
(4)
commit to user ii PERSETUJUAN
Laporan Penelitian dengan judul: Pengaruh Jamur Metarhizium anisopliae
Terhadap Mortalitas Larva Nyamuk Anopheles aconitus
Priska Wahyu Windarti, G.0007016, Tahun 2010
Telah disetujui untuk dipertahankan di hadapan Tim Validasi Laporan Penelitian Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret Surakarta
Pada Hari Rabu, Tanggal 29 Desember 2010 Pembimbing Utama Penguji Utama
CR. Siti Utari, Dra., M. Kes Darukutni, dr., Sp. ParK
NIP: 19540505 198503 2 001 NIP: 19470809 197603 1 001
Pembimbing Pendamping Anggota Penguji
Yulia Sari, S.Si, M.Si Vicky Eko N.H., dr., M.Sc, Sp.THT-KL NIP: 19800715 200812 2 001 NIP: 19770914 200501 1 001
Tim Skripsi
Nur Hafidha H., dr., M Clin Epid
(5)
commit to user iii PERNYATAAN
Dengan ini menyatakan bahwa dalam skripsi ini tidak terdapat karya yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar kesarjanaan di suatu perguruan tinggi, dan sepanjang pengetahuan penulis juga tidak terdapat karya atau pendapat yang pernah ditulis atau diterbitkan oleh orang lain, kecuali yang secara tertulis diacu dalam naskah dan disebutkan dalam daftar pustaka.
Surakarta, 29 Desember 2010
Priska Wahyu Windarti NIM. G0007016
(6)
commit to user iv ABSTRAK
PRISKA WAHYU WINDARTI, G0007016, 2010. Pengaruh Suspensi Jamur
Metarhizium anisopliae terhadap Mortalitas Larva Nyamuk Anopheles aconitus, Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret, Surakarta.
Tujuan penelitian: Penelitian bertujuan untuk mengetahui pengaruh suspensi jamur
Metarhizium anisopliae terhadap mortalitas larva nyamuk Anopheles aconitus dengan mengukur Lethal Concentration (LC) 50 dan 90.
Metode penelitian: Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental laboratorik.
Subjek penelitian adalah larva nyamuk Anopheles aconitus stadium III. Jumlah sampel adalah 640 larva. Teknik pengambilan sampel dilakukan secara purposive sampling. Teknik pengumpulan data dilakukan secara primer. Analisis data menggunakan uji regresi linier dan uji analisis probit.
Hasil penelitian: Suspensi jamur Metarhizium anisopliae dapat membunuh 50% (LC 50) larva nyamuk Anopheles aconitus stadium III pada konsentrasi jumlah rata-rata 1,87x108 spora/ml dalam 100 ml air dan 90% (LC 90) pada jumlah rata-rata 1,82x109 spora/ml dalam 100 ml air pada kondisi laboratorium.
Simpulan Penelitian: Suspensi jamur Metarhizium anisopliae mempunyai pengaruh terhadap mortalitas larva nyamuk Anopheles aconitus.
(7)
commit to user v ABSTRACT
PRISKA WAHYU WINDARTI, G0007016, 2010. The Effect of Metarhizium
anisopliae Fungus Suspension to Mortality of Anopheles aconitus Mosquito Larvae, Faculty of Medicine Sebelas Maret University, Surakarta.
Objective: This study aimed at finding out the toxicity of Metarhizium anisopliae
fungus suspension to Anopheles aconitus mosquito larvae by determining its Lethal Concentration (LC) at 50 and 90.
Methods: This study is laboratoric experimental type. Subject of this study is
Anopheles aconitus mosquito larvae instar III. The sample uses 640 larvaes which are taken by purposive sampling. Primary data is analized by regression linier and probit analysis.
Results: The result of the study shows that entomophatogen suspension kills 50%
(LC 50) Anopheles aconitus mosquito larvae instar III at the 1.87x108 spora/ml dilution level in 100 ml of water and 90% (LC 90) at the 1.82x109 spora/ml dilution level in 100 ml of water in laboratory condition.
Conclusion: The entomophatogenic Metarhizium anisopliae fungus suspension has lethal power to Anopheles aconitus mosquito larvae.
(8)
commit to user
vii DAFTAR ISI
PRAKATA...vi
DAFTAR ISI ... .vii
DAFTAR TABEL ... viii
DAFTAR LAMPIRAN ... ..ix
BAB I PENDAHULUAN ... ....1
A. Latar Belakang Masalah ... ....1
B. Rumusan Masalah ... ....4
C. Tujuan Penelitian ... ....4
D. Manfaat Penelitian ... ....4
BAB II TINJAUAN PUSTAKA... ....6
A. Jamur Metarhizium anisopliae... ... ....6
B. Nyamuk Anopheles aconitus ... ..12
BAB III METODE PENELITIAN ... ..17
A. Jenis Penelitian ... ..17
B. Lokasi Penelitian ... ..17
C. Subjek Penelitian... ..17
D. Teknik Sampling ... ..17
E. Rancangan Penelitian...18
F. Identifikasi Variabel ... ..19
G. Definisi Operasional Variabel ... ..19
H. Alat dan Bahan Penelitian ... ..21
I. Cara Kerja ... ..22
J. Teknik Analisis Data ... ..26
BAB IV HASIL PENELITIAN ... ..27
BAB V PEMBAHASAN ... ..31
BAB VI SIMPULAN DAN SARAN... ..34
A. Simpulan ... ..34
B. Saran... ..34
DAFTAR PUSTAKA ... ..35 LAMPIRAN
(9)
commit to user
viii
DAFTAR TABEL
Tabel 1. Jumlah Larva Anopheles aconitus yang Mati Setelah Mendapat
Perlakuan Suspensi Jamur Metarhizium
anisopliae...26 Tabel 2. Ringkasan Uji Analisis Probit... ...27 Tabel 3. Jumlah Larva Anopheles aconitus yang Mati Setelah Mendapat
Perlakuan Suspensi Jamur Metarhizium
anisopliae...27 Tabel 4 Ringkasan Uji Regresi Linier...29 Tabel 5 Ringkasan Uji Analisis Probit...31
(10)
commit to user
ix
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Uji Regresi Linier Lampiran 2. Uji Analisis Probit
Lampiran 3. Surat Ijin Penelitian dan Pengambilan Sampel Penelitian.
Lampiran 4. Surat Keterangan Telah Menyelesaikan Penelitian di B2P2VRP Salatiga.
(11)
commit to user
1 BAB I PENDAHULUAN
A. Latar Belakang Masalah
Malaria masih merupakan persoalan kesehatan yang besar di dunia terutama di daerah tropis dan subtropis seperti Brasil, India, Amerika Selatan (kecuali Chili), Afghanistan, Sri Langka, Thailand, Indonesia, Vietnam, Kamboja, Cina, Filipina, Amerika Tengah, Meksiko, dan Afrika (Widoyono, 2008; Sembel, 2009). Pada negara yang beriklim dingin sudah tidak ditemukan lagi daerah endemik malaria (Widoyono, 2008). Penyakit ini adalah penyebab utama terjadinya kematian di banyak negara berkembang terutama pada anak-anak dan ibu-ibu hamil sebagai kelompok utama yang mudah terinfeksi. Organisasi Kesehatan Dunia (WHO) memperkirakan sekitar 41% populasi dunia terinfeksi malaria. Setiap tahun terdapat 300-500 juta penderita mengalami penyakit serius dan sekurang-kurangnya 1-2,7 juta di antaranya mati karena malaria (WHO, 2001; Sembel, 2009).
Malaria ditemukan hampir di semua wilayah Indonesia. Survei Kesehatan Rumah Tangga (SKRT) tahun 2001 memperkirakan angka kematian spesifik akibat malaria di Indonesia adalah 11 per 100.000 untuk laki-laki dan 8 per 100.000 untuk perempuan (SKRT, 2001). Pada tahun 1996 ditemukan kasus malaria di Jawa-Bali dengan jumlah penderita sebanyak 2.341.401 orang. Pada tahun 1998 dan 1999 di beberapa daerah,
(12)
commit to user
2
yakni Sumatera, Yogyakarta, Jawa Tengah, Lampung terjadi peristiwa penyebaran malaria secara besar-besaran. Sebanyak 21 orang meninggal dunia pada peristiwa tersebut dari 18.812 kasus yang telah dilaporkan. Selain itu sekitar 10.000 orang terjangkit malaria di Banyumas, Jawa Tengah (Arbani, 1999).
Vektor malaria adalah nyamuk Anopheles (Widoyono, 2008). Anopheles diduga dapat menyebarkan virus chikungunya dan virus Sindbis (Sembel, 2009). Unit Kerja Serangga Vektor Penyakit menemukan 46 jenis Anopheles di Indonesia. Berdasarkan penelitian, dari jumlah tersebut hanya 20 spesies yang merupakan vektor malaria (Sembel, 2009). Spesies vektor malaria utama yang sering dijumpai di Jawa Tengah adalah Anopheles aconitus dan Anopheles sundaicus (Sembel, 2009; Gandahusada dkk., 2000). Anopheles aconitus akan meningkat pesat jumlahnya pada musim hujan di sawah-sawah sebagai tempat perindukannya. Kejadian ini terjadi akibat kurangnya pengaturan air dan pengadaan saluran irigasi (Gandahusa dkk., 2000).
Pemerintah telah menetapkan kebijaksanaan program pemberantasan malaria pada tahun 2001, dengan sasaran morbiditas kurang dari satu orang pada setiap 1000 penduduk di Jawa dan Bali (Widoyono, 2008). Salah satu kebijaksanaan tersebut adalah pemberantasan vektor malaria, Anopheles (Ditjen PPM dan PL, 2001). Pengendalian nyamuk dengan menggunakan bahan kimia seperti permetrin dan DDT kurang efektif lagi karena banyaknya kasus resisten terhadap insektisida tersebut (Kikankie et al.,
(13)
commit to user
3
2010). Penggunaan insektisida kimia secara terus menerus dapat menimbulkan pencemaran lingkungan, kematian beberapa jenis makhluk hidup, dan resistensi dari serangga yang diberantas (Yunita dkk., 2009). Nyamuk Anopheles aconitus dilaporkan telah resisten terhadap DDT di Jawa Tengah dan sebagian Jawa Timur sehingga perlu segera dilakukan solusi alternatif mengingat Anopheles aconitus merupakan salah satu vektor malaria utama di daerah tersebut (Gandahusada dkk., 2000). Pengendalian secara hayati sudah diuji coba menggunakan Bacillus thuringiensis isolat lokal, tetapi belum memberikan hasil yang meyakinkan (Lacey, 2007; Sembel, 2009).
Jamur Metarhizium anisopliae adalah jamur yang bersifat entomopatogen. Jamur ini bermanfaat sebagai salah satu agen hayati atau pengendali serangga baik yang menyerang tanaman maupun organisme antagonis yang ada di dalam tanah (Scholte et al., 2003). Beberapa kelebihan pemanfaatan jamur entomopatogen dalam pengendalian adalah mempunyai kapasitas reproduksi yang tinggi, siklus hidupnya pendek, dapat membentuk spora yang tahan lama di alam walaupun dalam kondisi yang tidak menguntungkan, relatif aman, bersifat selektif, relatif mudah diproduksi, dan sangat kecil kemungkinan terjadi resistensi (Bidochka et al., 2000). Selama ini jamur Metarhizium anisopliae digunakan sebagai pengendali hayati hama tanaman perkebunan dan persawahan (Kaaya dan Hassan, 2000). Penelitian di Afrika menunjukkan bahwa jamur entomopatogen ini dapat digunakan sebagai pengendali vektor malaria
(14)
commit to user
4
(Scholte et al., 2005; Farenhorst et al., 2008). Penelitian Widiyanti dan Muyadihardja (2004) menyatakan bahwa Metarhizium anisopliae juga mempunyai daya bunuh terhadap Aedes aegypti dan Culex quinquefasciatus. Sejauh peneliti tahu, pengaruh jamur Metarhizium anisopliae terhadap Anopheles aconitus secara spesifik belum pernah diteliti. Oleh karena itu, perlu dilakukan upaya penelitian pengaruh jamur ini terhadap Anopheles aconitus sebagai alternatif pengganti insektisida kimia.
B. Rumusan Masalah
Apakah suspensi jamur Metarhizium anisopliae mempunyai pengaruh terhadap mortalitas larva nyamuk Anopheles aconitus?
C. Tujuan Penelitian
Tujuan penelitian untuk mengetahui adanya pengaruh suspensi jamur Metarhizium anisopliae terhadap mortalitas larva nyamuk Anopheles aconitus.
D. Manfaat Penelitian
1. Manfaat Teoritis
Penelitian ini dapat membuktikan pengaruh suspensi jamur Metarhizium anisopliae dalam berbagai konsentrasi terhadap mortalitas larva nyamuk Anopheles aconitus.
(15)
commit to user
5 2. Manfaat Aplikatif
Penelitian ini dapat memberikan informasi kepada peneliti selanjutnya untuk melakukan uji coba isolat Metarhizium anisopliae sebagai pengendali hayati terhadap Anopheles aconitus.
(16)
commit to user
6 BAB II
LANDASAN TEORI
A. Tinjauan Pustaka
1. Jamur Metarhizium anisopliae
a. Klasifikasi dan Morfologi Kingdom : Fungi Divisi : Eumycota Kelas : Deuteromycetes Ordo : Moniliales Famili : Moniliaceae Genus : Metarhizium
Spesies : Metarhizium anisopliae (Alexopoulus et al., 1996).
Morfologi dari Metarhiziumyang telah banyak diketahui yaitu konidiofor tumbuh tegak, spora berbentuk silinder atau lonjong dengan panjang 6-16 mm, bersel satu, masa spora berwarna hijau zaitun. Metarhizium mempunyai miselium yang bersepta dengan konidia yang berbentuk lonjong. Metarhizium anisopliae bersifat saprofit pada media buatan, awal mula pertumbuhannya adalah konidium membengkak lalu mengeluarkan tabung-tabung kecambah (appresorium). Tabung kecambah tersebut memanjang selama 30 jam. Beberapa cabang tersebut membesar ke atas
(17)
commit to user
7
membentuk konidiofor yang pendek, bercabang, berdekatan, dan saling melilit. Konidia terbentuk setelah satu minggu pertumbuhan, mula-mula berwarna putih kemudian berangsur menjadi hijau apabila telah masak. Pembentukan konidia terdiri dari kuncup dan tunas yang memanjang pada kedua sisi konidiofor tersebut. Umumnya sebuah rantai konidia bersatu membentuk sebuah kerak dalam media (Benjamin et al., 2002 ; Ladslaus et al., 2009).
b. Kandungan Metarhizium anisopliae
Metarizhium anisopliae mampu menghasilkan sejenis cairan khusus yang disebut dengan microsclerotia yang dapat merusak sistem sirkulasi tubuh serangga (Widiyanti dan Muyadihardja, 2004).
Metarhizium anisopliae memiliki aktifitas larvasida karena menghasilkan cyclopeptida, destruxin A, B, C, D, E dan desmethyldestruxin. Destruxin telah dipertimbangkan sebagai bahan insektisida generasi baru. Efek destruxin berpengaruh pada organela sel target (mitokondria, retikulum endoplasma dan membran nukleus), menyebabkan paralisis sel dan kelainan fungsi lambung tengah, tubulus malphigi, hemosit dan jaringan otot (Widiyanti dan Muyadihardja, 2004; Luz et al., 2008; Kurtt dan Keyhani, 2008).
(18)
commit to user
8
c. Mekanisme Kerja Metarhizium anisopliae pada Serangga
Metarhizium anisopliae dapat berpenetrasi pada jaringan atau kutikula serangga yang terserang (Brooks dan Wall, 2005). Mekanisme penetrasi Metarhizium anisopliae pada kutikula seranggamelalui beberapa tahap sebagai berikut,
1) Tahap pertama yaitu kontak antara konidia jamur dengan tubuh serangga.
2) Tahap kedua adalah proses penempelan dan perkecambahan konidia jamur pada integumen serangga.
3) Tahap ketiga yaitu penetrasi dan invasi. Jamur dapat membentuk tabung kecambah (appresorium) dalam proses penetrasi integumen. Titik penetrasi sangat dipengaruhi oleh konfigurasi morfologi integumen. Penembusan dilakukan secara kimiawi dengan toksin yang dikeluarkan jamur ini. 4) Tahap keempat yaitu destruksi pada titik penetrasi dan
terbentuknya blastospora yang kemudian beredar ke dalam hemolimfe dan membentuk hifa sekunder untuk menyerang jaringan lainnya.
(Garcia et al., 2005; Scholte et al., 2006; Thomas dan Read, 2007; Kurtt dan Keyhani, 2008).
(19)
commit to user
9
d. Faktor-faktor yang Mempengaruhi Pertumbuhan dan Perkembangan Metarhizium anisopliae
1) Suhu dan Kelembaban
Suhu dan kelembaban sangat mempengaruhi pertumbuhan jamur Metarhizium terutama untuk pertumbuhan dan perkecambahan konidia serta patogenesitasnya. Batasan suhu untuk pertumbuhan jamur antara 5-35oC, pertumbuhan optimal terjadi pada suhu 25-30oC (Ouedraogo et al., 2004). Konidia akan tumbuh dengan baik dan maksimum pada kelembaban 80-92 persen (Soundarapandian dan Chandra, 2007).
2) Sinar Matahari
Perkembangan konidia jamur Metarhizium anisopliae dapat terhambat apabila terkena sinar matahari secara langsung. Gelombang ultraviolet B merusak membran nukleus dan mendenaturasi protein pada Metarhizium anisopliae. Konidia tidak akan mampu berkecambah apabila terkena sinar matahari langsung selama satu minggu, sedangkan konidia yang terlindung dari sinar matahari mempunyai viabilitas yang tinggi meskipun disimpan lebih dari tiga minggu. Pada suhu 8oC konidia yang disimpan pada kondisi gelap selama 3-5 hari masih mampu berkecambah 90%, sedangkan pada keadaan terang hanya 50% (Farenhorst et al., 2008; Mustafa dan Kaur, 2009).
(20)
commit to user
10 3) pH
Dalam beberapa penelitian pH media berpengaruh tehadap pertumbuhan jamur Metarhizium. Tingkat pH yang sesuai berkisar antara 3,3-8,5. Pertumbuhan optimal terjadi pada pH 7 (Soundarapandian dan Chandra, 2007).
e. Kebutuhan Nutrisi Jamur Metarhizium anisopliae
Sumber nutrisi dapat berpengaruh pada pertumbuhan jamur entomopatogen. Media jamur harus mengandung cukup substansi organik sebagai sumber C, sumber N, dan ion anorganik bagi pertumbuhan jamur. Metarhizium anisopliae juga memerlukan karbohidrat sebagai sumber karbon dalam pertumbuhannya (Nugroho, 2007). Sejumlah penelitian menunjukkan bahwa penggunaan karbohidrat tinggi mendorong pertumbuhan vegetatif jamur (Ghanbary et al., 2009).
Pembentukan konidia jamur dipengaruhi oleh kandungan protein dalam media. Protein diperlukan untuk pembentukan organela yang berperan dalam pembentukan apikal hifa dan sintesis enzim. Enzim yang disintesis akan berperan dalam aktivitas perkecambahan (Nugroho, 2007).
Jamur entomopatogen membutuhkan oksigen, air, dan sumber organik karbon. Jamur ini juga memerlukan sumber nitrogen organik maupun anorganik dan mineral sebagai pemacu pertumbuhan. Sumber karbon yang biasa digunakan sebagai media
(21)
commit to user
11
adalah dekstrosa namun dapat diganti dengan polisakarida seperti tajin atau lipid. Nitrogen dapat disediakan dalam bentuk nitrat, amonia atau bahan organik seperti asam amino atau protein. Makronutrisi penting yang lain adalah fosfor (dalam bentuk fosfat), potasium, magnesium, dan sulfur. Mikronutrisi penting yang dibutuhkan oleh kebanyakan jamur entomopatogen adalah kalsium, besi, tembaga, mangan, molibdenum, seng, dan vitamin B komplek, khususnya biotin dan tiamin. Semua mikronutrisi ini biasanya terdapat dalam bahan mentah, akan tetapi dapat dipenuhi dalam bentuk protein hidrolisat (Nugroho, 2007).
Metarhizium anisopliae dapat tumbuh pada berbagai media antara lain Sabouraud Dextrosa Agar (SDA), media gandum, media beras, media jagung dan media Potato Dextrosa Agar (PDA) (Costa et al., 2002; Liu et al., 2003). Media yang paling baik dalam pembiakan jamur Metarhizium anisopliae adalah media Potato Dextrosa Agar (PDA) karena menghasilkan konidiospora paling banyak, tidak merusak virulensi, patogenitas serta toksisitasnya (Munif, 1997; Widiyanti dan Muyadihardja, 2004).
(22)
commit to user
12
2. Nyamuk Anopheles aconitus
a. Klasifikasi (Gandahusada et al., 2000) Filum : Arthropoda
Kelas : Insecta Ordo : Diptera Famili : Culicidae Tribus : Anophelini Genus : Anopheles
Spesies : Anopheles aconitus
b. Siklus Hidup Nyamuk Anopheles aconitus
Nyamuk termasuk dalam kelompok serangga yang mengalami metamorfosis sempurna dalam bentuk siklus hidup berupa telur, larva (beberapa instar/stadium), pupa, dan dewasa (Sembel, 2009). Siklus hidup nyamuk mempunyai empat stadium dengan tiga stadium berkembang di dalam air dan satu stadium hidup di alam bebas (Nurmaini, 2003).
Perkembangan telur nyamuk bergantung pada temperatur dan kelembapan (Nurmaini, 2003). Nyamuk Anopheles aconitus akan meletakkan telurnya di permukaan air satu per satu atau bergerombol tetapi saling lepas (Nurmaini, 2003; Sembel, 2009). Telur dapat bertahan hidup dalam waktu yang cukup lama dalam bentuk dorman. Apabila air cukup tersedia, telur-telur itu menetas 2-3 hari sesudah diletakkan (Sembel, 2009).
(23)
commit to user
13
Telur menetas menjadi larva atau sering juga disebut jentik. Larva nyamuk memiliki kepala yang cukup besar serta toraks dan abdomen yang cukup jelas. Larva Anopheles menggantungkan tubuhnya secara horizontal atau sejajar dngan permukaan air (Sembel, 2009). Pertumbuhan larva dipengaruhi oleh temperatur, nutrien, dan ada tidaknya predator (Nurmaini, 2003). Larva biasanya melakukan pergantian kulit empat kali dan berpupasi sesudah sekitar 7 hari (Sembel, 2009).
Sesudah melewati pergantian kulit keempat, maka terjadi pembentukan pupa. Pupa berbentuk agak pendek, tidak makan, tetapi tetap aktif bergerak dalam air terutama bila diganggu. Mereka berenang naik turun dari bagian dasar ke permukaan air. Bila perkembangan pupa sudah sempurna, yaitu sesudah dua atau tiga hari, maka kulit pupa pecah dan nyamuk dewasa keluar serta terbang (Nurmaini, 2003; Sembel, 2009).
Nyamuk dewasa yang baru keluar dari pupa berhenti sejenak di atas air untuk mengeringkan tubuhnya terutama sayap-sayapnya. Sesudah mampu mengembangkan sayapnya, nyamuk dewasa mencari makan. Dalam keadaan istirahat, nyamuk Anopheles hinggap agak tegak lurus dengan permukaan (Sembel, 2009). c. Tempat Perindukan
Pada umumnya, nyamuk memerlukan tiga macam tempat dalam proses perkembangan, yaitu tempat berkembang biak
(24)
commit to user
14
(breeding places), tempat mendapat umpan (feeding places), dan tempat istirahat (resting places). Tempat perindukan nyamuk Anopheles aconitus adalah tempat yang tertutup oleh tanaman air. Densitas Anopheles aconitus rendah pada permukaan air yang bersih (Nurmaini, 2003). Anopheles aconitus menyukai air tenang atau sedikit mengalir seperti sawah untuk berkembang biak (Nurmaini, 2003). Nyamuk Anopheles juga dapat berkembang biak dalam kolam-kolam air tawar yang bersih, air payau, maupun air-air yang tergenang di pinggiran laut (Sembel, 2009).
d. Perilaku Nyamuk Anopheles aconitus
Nyamuk Anopheles ada yang senang hidup di dalam rumah dan ada yang aktif di luar rumah. Nyamuk ini ada yang aktif terbang pada waktu pagi, siang, sore, maupun malam (Sembel, 2009). Nyamuk Anopheles aconitus aktif mengigit pada malam hari (Nurmaini, 2003). Nyamuk akan beristirahat selama 2-3 hari setelah mengigit manusia atau binatang (Nurmaini, 2003).
(25)
commit to user
15
B. Kerangka Pemikiran
Gambar 1. Skema Kerangka Pemikiran Larva Nyamuk Anopheles aconitus
Berpengaruh pada mitokondria, retikulum endoplasma, dan membran nukleus sel
Paralisis sel dan kelainan fungsi lambung tengah, tubulus malphigi, hemosit, dan jaringan otot
Mortalitas Larva Nyamuk Anopheles aconitus
Variabel luar terkendali 1. Umur larva 2. Kepadatan
larva 3. Makanan
Variabel luar tidak terkendali 1. Suhu ruangan 2. Kelembaban
ruangan 3. Kualitas air Suspensi Jamur
Metarhizium anisopliae
Microsclerotia Destruxin A Destruxin B Destruxin C Destruxin D Destruxin E Desmethyldestruxin Merusak sistem sirkulasi tubuh
(26)
commit to user
16
C. Hipotesis
Suspensi jamur Metarhizium anisopliae mempunyai pengaruh untuk meningkatkan mortalitas larva nyamuk Anopheles aconitus.
(27)
commit to user
17 BAB III
METODE PENELITIAN
A. Jenis Penelitian
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental laboratorik.
B. Lokasi Penelitian
Penelitian ini dilakukan di Balai Besar Pusat Penelitian Vektor dan Reservoir Penyakit (B2P2VRP) Salatiga.
C. Subjek Penelitian
Subjek penelitian ini adalah larva nyamuk Anopheles aconitus stadium III (Komisi Pestisida, 1995). Alasan pemilihan larva nyamuk stadium III adalah terkait dengan faktor usia yang lebih muda, maka organ yang dimiliki belum selengkap dan sekuat organ larva nyamuk stadium IV. Hal ini menyebabkan larva nyamuk stadium III lebih peka jika digunakan sebagai subjek penelitian. Sedangkan larva nyamuk stadium I dan II terlalu kecil untuk diamati (Wulandari dkk., 2002).
D. Teknik Sampling
Pengambilan sampel dilakukan secara purposive sampling, yaitu pemilihan subjek berdasarkan atas ciri-ciri atau sifat tertentu yang berkaitan dengan karakteristik populasi (Arief, 2008).
(28)
commit to user
18
E. Rancangan Penelitian
Keterangan:
L : Sejumlah larva nyamuk (20 ekor) Anopheles aconitus K-1: Kelompok kontrol negatif
P-1: Suspensi jamur Metarhizium anisopliae jumlah spora 4,26x107/ml P-2 : Suspensi jamur Metarhizium anisopliae jumlah spora 7,1x107/ml P-3 : Suspensi jamur Metarhizium anisopliae jumlah spora 9,94x107/ml P-4 : Suspensi jamur Metarhizium anisopliae jumlah spora 1,42x108/ml P-5 : Suspensi jamur Metarhizium anisopliae jumlah spora 2,13x108/ml P-6: Suspensi jamur Metarhizium anisopliae jumlah spora 4,26x108/ml P-7: Suspensi jamur Metarhizium anisopliae jumlah spora 8,8x108/ml B : Makanan larva nyamuk Anopheles aconitus
J : Perlakuan diamati selama 7 hari
M : Jumlah larva nyamuk Anopheles aconitus yang mati S : Uji statistik
L P-7
M
L P-1
J
M
S
L K-1
M
B
L P-2
L P-3
L P-4
L P-5
L P-6
M
M
M
M
(29)
commit to user
19
F. Identifikasi Variabel Penelitian
1. Variabel bebas
Yang menjadi variabel bebas adalah suspensi jamur Metarhizium anisopliae.
2. Variabel terikat
Yang menjadi variabel terikat adalah mortalitas larva nyamuk Anopheles aconitus.
3. Variabel luar terkendali: a. Umur larva
b. Kepadatan larva c. Makanan
4. Variabel luar tidak terkendali: a. Suhu ruangan
b. Kelembaban ruangan c. Kualitas air
G. Definisi Operasional Variabel Penelitian
1. Variabel Bebas: Suspensi Jamur Metarhizium anisopliae
Suspensi jamur Metarhizium anisopliae adalah spora jamur Metarhizium anisopliae yang telah dipanen dari media, kemudian dilarutkan dalam akuades steril dengan pengenceran 10-1 (Scholte et al., 2003). Suspensi Metarhizium anisopliae dibuat perlakuan pada 7 kelompok dengan 20 larva pada 100 ml air tiap perlakuan. Jumlah spora yang digunakan
(30)
commit to user
20
adalah 4,26x107 spora/ml; 7,1x107 spora/ml; 9,94x107 spora/ml; 1,42x108 spora/ml; 2,13x108 spora/ml; 4,26x108 spora/ml; dan 8,8x108 spora/ml.
2. Variabel Terikat: Mortalitas Larva Anopheles aconitus
Mortalitas larva nyamuk Anopheles aconitus adalah jumlah kematian larva nyamuk Anopheles aconitus yang dihitung dalam setiap kelompok uji dengan memberi rangsangan gerakan air atau saat disentuh dengan lidi. Larva dianggap sudah mati saat sudah tidak aktif bergerak saat diberi rangsangan gerakan air atau disentuh dengan lidi.
3. Variabel Luar Terkendali
a. Umur Larva
Umur larva nyamuk merupakan faktor yang sangat berpengaruh pada daya tahan nyamuk terhadap pajanan insektisida nabati. Larva nyamuk yang digunakan pada penelitian ini adalah stadium III (Wakhyulianto, 2005).
b. Kepadatan Larva
Kepadatan larva adalah jumlah larva dalam satuan volume air tiap kelompok uji, sebesar 20 larva tiap 100 ml air (Komisi Pestisida, 1995).
c. Makanan Larva
(31)
commit to user
21
4. Variabel Luar Tidak Terkendali
a. Suhu Ruangan
Suhu ruangan adalah suhu pada ruangan yang dipakai sebagai tempat penelitian.
b. Kelembaban Ruangan
Kelembaban ruangan adalah kelembaban pada ruangan yang dipakai sebagai tempat penelitian.
c. Kualitas Air
Kualitas air adalah air yang digunakan sebagai media larva dengan tempat pengambilan yang sama, suhu dan pH yang sama.
H. Alat dan Bahan Penelitian
1. Alat Penelitian
a. Mangkok plastik untuk tempat media percobaan. b. Pipet larva untuk mengambil larva.
c. Pipet volume untuk mengambil bahan cair dengan volume yang diinginkan.
d. Petridish untuk pembuatan Potato Dextrose Agar. e. Oshe jarum untuk pembiakan jamur.
f. Incase/laminar flow untuk pembiakan jamur.
g. Otoklaf sebagai alat untuk mensterilkan media pertumbuhan jamur. h. Inkubator untuk menginkubasi suspensi jamur Metarhizium
(32)
commit to user
22
i. Haemacytometer untuk menghitung jumlah spora. j. Letter L untuk memanen spora dalam petridish.
2. Bahan Penelitian
a. Larva nyamuk Anopheles aconitus stadium III b. Makanan larva nyamuk Anopheles aconitus c. Air sebagai tempat perindukan larva. d. Isolat murni Metarhizium anisopliae. e. Akuades steril
f. Kentang 200 gram untuk pembuatan Potato Dextrose Agar. g. Dekstrosa 10 gram untuk pembuatan Potato Dextrose Agar. h. Agar-agar 20 gram untuk pembuatan Potato Dextrose Agar.
I. Cara Kerja
1. Tahap Persiapan
a. Pembuatan media Potato Dextrose Agar (Munif, 1997)
1) Kentang dikupas, dicuci, dan dipotong kecil-kecil kemudian direbus selama satu jam sampai mendidih (dengan menjaga volume tetap pada 1000 ml).
2) Hasil rebusan disaring sehingga memperoleh filtrat.
3) Dekstrosa dimasukkan ke dalam filtrat dan diaduk sampai homogen.
4) Hasil campuran dekstrosa dan filtrat dimasukkan ke dalam tabung reaksi steril dengan volume 10 ml.
(33)
commit to user
23
5) Disterilisasikan dengan otoklaf selama 20 menit pada temperatur 120ºC atau tekanan 1 kg/cm2.
b. Pembiakan Metarhizium anisopliae pada Potato Dextrose Agar 1) Media Potato Dextrose Agar miring dalam tabung reaksi
dituangkan pada petridish, kemudian ditunggu sampai membeku. 2) Oshe jarum dipijarkan pada lampu spirtus, kemudian secara
aseptik diambil cuplikan koloni jamur dari isolat murni.
3) Inokulasi pada Potato Dextrose Agar dilakukan dengan cara meletakkan cuplikan koloni jamur pada permukaan media.
4) Inkubasi selama 4 minggu pada suhu laboratorium. 2. Tahap Pengecekan Metarhizium anisopliae
a. Untuk memastikan bahwa jamur Metarhizium anisopliae tidak terkontaminasi dengan jamur lain, maka dilakukan pengecekan. b. Pengecekan dilakukan dengan pembuatan preparat Metarhizium
anispoliae pada object glass kemudian diamati di bawah mikroskop. c. Gambar spora yang tampak dicocokkan dengan sumber referensi. 3. Tahap Pemanenan Jamur Metarhizium anisopliae (Widiyanti dan
Muyadihardja, 2004)
a. Sepuluh ml akuades dimasukkan ke dalam petridish yang berisi koloni jamur, kemudian dipanen dengan cara menggores permukaan media dengan letter L sampai seluruh spora diambil.
b. Suspensi jamur Metarhizium anisopliae dari petridish dituang ke dalam tabung reaksi, kemudian digojok sampai homogen.
(34)
commit to user
24
c. Dari 10 ml suspensi tersebut, diambil 1 ml untuk membuat suspensi dengan tingkat pengenceran 10-1. Pada suspensi tingkat pengenceran 10-1 ini dilakukan penghitungan jumlah spora dengan menggunakan haemacytometer.
4. Tahap Uji Pendahuluan
a. Suspensi jamur Metarhizium anisopliae dibuat dalam berbagai kelompok. Berdasarkan penelitian Widiyanti (2004), maka dibuat 8 perlakuan dengan jumlah spora masing-masing 4,26x107 spora/ml; 7,1x107 spora/ml; 9,94x107 spora/ml; 1,3x108 spora/ml; 1,5x108 spora/ml; 2x108 spora/ml; 2,3x108 spora/ml; dan 2,7x108 spora/ml. b. Larva nyamuk Anopheles aconitus sebanyak 20 ekor pada setiap
kelompok dan kontrol.
c. Pengamatan dilakukan dengan menghitung jumlah larva yang mati dalam 7 hari.
d. Konsentrasi suspensi jamur Metarhizium anisopliae yang dapat mematikan larva digunakan sebagai acuan penelitian.
5. Tahap Penelitian
a. Suspensi jamur Metarhizium anisopliae dibuat perlakuan pada 7 kelompok dengan 20 larva pada 100 ml air tiap perlakuan. Jumlah spora/ml pada tiap suspensi disesuaikan dengan hasil uji pendahuluan. Jumlah spora yang digunakan adalah 4,26x107 spora/ml; 7,1x107 spora/ml; 9,94x107 spora/ml; 1,42x108 spora/ml; 2,13x108 spora/ml; 4,26x108 spora/ml; dan 8,8x108 spora/ml.
(35)
commit to user
25 (n-1) (t-1) > 15
b. Perlakuan dibandingkan dengan kontrol negatif.
c. Percobaan dilakukan sebanyak 4 kali ulangan (Munif, 1997). Penentuan jumlah ulangan berdasarkan rumus
Keterangan: n : jumlah ulangan
t : jumlah kelompok perlakuan
Karena pada kelompok ini menggunakan 7 kelompok perlakuan, maka:
(n-1) (t-1) > 15 (n-1) (7-1) > 15 6n > 15
n > 3,5
jadi untuk setiap kelompok, jumlah ulangan harus lebih dari 3,5. Dalam penelitian ini digunakan 4 kali ulangan dalam setiap kelompok (Cavalcanti et al., 2004).
d. Pengamatan dilakukan dengan menghitung jumlah larva yang mati dalam 7 hari (Cavalcanti et al., 2004).
(36)
commit to user
26
J. Teknik Analisis Data
Data yang diperoleh dianalisis dengan menggunakan beberapa uji yaitu uji regresi linier dan analisis Probit (Cavalcanti et al., 2004).
1. Uji Regresi Linier
Uji regresi linier untuk mengetahui perbedaan jumlah kematian rata-rata larva nyamuk Anopheles aconitus pada berbagai tingkat konsentrasi suspensi jamur Metarhizium anisopliae.
2. Analisis Probit
Untuk mengukur toksisitas jamur Metarhizium anisopliae terhadap larva nyamuk Anopheles aconitus pada kelompok perlakuan, maka dihitung nilai LC 50 dan LC 90 dengan analisis probit.
(37)
commit to user
27 BAB IV
HASIL PENELITIAN
A. Uji Pendahuluan
1. Hasil Penelitian
Uji pendahuluan yang dilakukan sebelum penelitian diperoleh hasil penghitungan jumlah rata-rata spora suspensi jamur Metarhizium anisopliae pada tingkat pengenceran 10-1 sebanyak 1,42x107 spora/ml. Tabel 1. Jumlah Larva Anopheles aconitus yang Mati Setelah Mendapat
Perlakuan Suspensi Jamur Metarhizium anisopliae
Sumber data: Primer, November 2010
Keterangan: pemberian volume suspensi jamur Metarhizium anisopliae didasarkan pada penelitian Widiyanti dan Muyadihardja (2004).
Volume suspensi jamur yang diberikan Jumlah rata-rata spora/ml Total Jumlah larva Jumlah larva yang mati Prosentase kematian larva (%)
3 ml 4,26x107 20 7 35
5 ml 7,1x107 20 5 25
7 ml 9,94x107 20 6 30
9,2 ml 1,3x108 20 12 60
10,6 ml 1,5x108 20 12 60
14,1 ml 2x108 20 10 50
16,2 ml 2,3x108 20 16 80
19 ml 2,7x108 20 10 50
(38)
commit to user
28
2. Analisis Data
Data uji pendahuluan yang didapat diolah menggunakan uji analisis probit untuk mengetahui LC 50 dan 90. Penentuan LC 50 dan 90 ini digunakan sebagai acuan dalam penghitungan volume konsentrasi suspensi jamur Metarhizium anisopliae pada uji sesungguhnya.
Tabel 2. Ringkasan Uji Analisis Probit
Hasil uji analisis probit menunjukkan bahwa pada uji pendahuluan volume suspensi yang mencapai LC 50 adalah 6,72 ml dengan ambang antara 1,57 ml - 10,04 ml, sedangkan LC 90 akan dicapai pada pemberian volume 62,11 ml dengan ambang volume 27,18 ml - 120 ml. Setiap 1 ml mengandung rata-rata jumlah spora sebanyak 1,42x107/ml. Hal ini menunjukkan bahwa LC 50 dicapai dengan jumlah spora rata-rata 6,72 x 1,42x107 = 9,54x107 spora/ml, sedangkan jumlah spora rata-rata pada LC 90 adalah 62,11 x 1,42x107 spora/ml.
Probabilitas Tingkat kepercayaan 95% pada konsentrasi
Estimasi Batas bawah Batas atas
PROBIT 0,5 6,72 1,57 10,04
0,9 62,11 27,18 120,00
0,99 138,33 60,14 216,50
(39)
commit to user
29
B. Uji Sesungguhnya
1. Hasil Penelitian
Pada uji yang sesungguhnya, hasil penghitungan jumlah rata-rata spora pada suspensi jamur dengan tingkat pengenceran 10-1 adalah 1,42x107 spora/ml. Adapun hasil penelitian eksperimental laboratorik pengaruh suspensi jamur Metarhizium anisopliae terhadap mortalitas larva nyamuk Anopheles aconitus adalah sebagai berikut:
Tabel 3. Jumlah Larva Nyamuk Anopheles aconitus yang Mati Setelah Mendapat Perlakuan Suspensi Jamur Metarhizium anisopliae
Sumber data: Primer, November 2010
Data hasil penelitian yang berupa mortalitas larva dianalisis dengan uji regresi linier. Untuk mengetahui LC 50 dan LC 90 maka dilakukan analisis probit. Data diolah dengan program Stastical Product and Service Solution (SPSS) 17,0 for Windows.
Volume suspensi jamur yang diberikan Jumlah rata-rata spora/ml Total Jumlah larva Jumlah larva yang mati Prosentase kematian larva (%) 3 ml 4,26x107 80 37 46,25 5 ml 7,1x107 80 37 46,25 7 ml 9,94x107 80 42 52,5 10 ml 1,42x108 80 36 45 15 ml 2,13x108 80 33 41,25 30 ml 4,26x108 80 54 67,5
62 ml 8,8x108 80 54 67,5 0 ml (kontrol) - - 0 0
(40)
commit to user
30
Tabel 4. Ringkasan Hasil Uji Regresi Linier
Model
Sum of
Squares df Mean Square F Sig. 1Regression 155,79 1 155,79 4,90 ,09a
Residual 127,04 4 31,76
Total 282,83 5
a. Predictors: (Constant), konsentrasi b. Dependent Variable: mortalitas
Pada tabel 3 ringkasan uji linier regresi didapat p = 0,09, karena p > 0,05 maka H0 diterima dan H1 ditolak sehingga dapat disimpulkan bahwa ketujuh kelompok perlakuan tersebut memiliki perbedaan yang tidak signifikan.
Tabel 5. Ringkasan Hasil Analisis Probit
Pada tabel 4 ringkasan analisis probit didapatkan LC 50 pada jumlah rata-rata 1,87x108 spora/ml dan LC 90 pada jumlah rata-rata 1,87x109 spora/ml. sedangkan untuk mencapai 99% kematian larva dibutuhkan jumlah spora rata-rata 3,24x109 spora/ml.
Probabilitas
Tingkat kepercayaan 95% pada konsentrasi
Estimasi Batas bawah Batas atas PROBIT
0,5 18,70 -,60 32,90
0,9 187,1 131,60 355,62
(41)
commit to user
31 BAB V PEMBAHASAN
Penghitungan jumlah volume suspensi jamur pada penelitian pendahuluan diberikan sesuai dengan penelitian Widiyanti dan Muyadihardja yang memberikan perlakuan suspensi jamur Metarhizium anisopliae pada Aedes aegypti. Waktu pengamatan dilakukan selama 7 hari yang merupakan waktu bagi spora Metarhizium anisopliae untuk tumbuh dalam tubuh larva Anopheles aconitus. Menurut penelitian yang sering dilakukan di Laboratorium Mikrobiologi B2P2VRP, Anopheles aconitus mempunyai ketahanan 5 kali dibanding Aedes aegypti, maka sesuai dengan penelitian Widiyanti dan Muyadihardja, Anopheles aconitus kira-kira membutuhkan jumlah rata-rata 2x108 spora/ml (5 x 4x107 spora/ml). Pada penelitian didapati bahwa untuk membunuh 50% dari jumlah total larva Anopheles aconitus dibutuhkan jumlah rata-rata 1,87x108 spora/ml.
Hasil penelitian Widiyanti dan Muyadihardja (2004) pada larva nyamuk instar III Aedes aegypti hanya membutuhkan 8,73x107 spora/ml untuk membunuh 90% larva uji. Anopheles aconitus membutuhkan rata-rata 1,87x109 spora/ml. Jumlah spora yang dibutuhkan untuk membunuh larva nyamuk instar III Anopheles aconitus jauh lebih banyak dibandingkan larva instar III Aedes aegypti, dengan perbandingan 4,5%. Hal ini menunjukkan bahwa larva nyamuk instar III Anopheles aconitus kurang rentan terhadap konidiospora Metarhizium anisopliae dibanding dengan Aedes aegypti. Hasil penghitungan spora dibandingkan dengan jumlah spora pada penelitian Widiyanti didapatkan jumlah spora yang berbeda.
(42)
commit to user
32
Pada tingkat pengenceran 10-1 penelitian Widiyanti mengandung 5,2x108 spora/ml. Sedangkan dari penelitian ini mendapatkan rata-rata jumlah spora yaitu 1,42 x 107/ml pada tingkat pengenceran 10-1. Hal ini tergantung dari jumlah spora yang didapatkan pada waktu memanen spora atau spora induk. Perbedaan jumlah spora dalam setiap pembiakan sangat dipengaruhi oleh isolat murni. Pembiakan murni atau turunan pertama (F1) dari isolat Metarhizium anisopliae yang diambil langsung dari larva yang sakit seperti Orictes rhinoceros (kumbang kelapa) akan mempunyai virulensi yang lebih tinggi daripada pembiakan dari isolat yang merupakan duplikat dari pembiakan murni (Lolong, 2010; Costa et al., 2002). Jamur ini mempunyai dua varitas yaitu mayor dan minor. Varitas mayor mempunyai spora yang lebih panjang daripada minor. Varitas mayor akan menghasilkan destruxin yang lebih banyak daripada yang minor (Lolong, 2010).
Penentuan LC 50 dan LC 90 dilakukan untuk menentukan kematian larva nyamuk uji 50% dan 90% setelah pendedahan 7 hari. Upaya untuk membunuh 50% larva nyamuk Anopheles aconitus dibutuhkan jumlah spora rata-rata 1,87x108 spora/ml, sedangkan untuk membunuh 90% larva Anopheles aconitus dibutuhkan jumlah spora rata-rata 1,82x109 spora/ml.
Hasil uji analisis regresi untuk jumlah konidia menunjukkan bahwa terdapat perbedaan yang kurang spesifik pada angka kematian larva instar III Anopheles aconitus oleh pengaruh jumlah konidiospora pada masing-masing kelompok dalam kondisi laboratorium. Penelitian ini memiliki perbedaan teknik dengan penelitian yang dilakukan oleh Widiyanti dan Muyadihardja (2004). Penelitian Widiyanti dan Muyadihardja memanen spora dari media menggunakan
(43)
commit to user
33
larutan Tween 80 untuk melepas hifa konidiospora dan membuat suspensi menjadi homogen. Penelitian ini tidak menggunakan larutan tersebut karena ternyata larutan Tween 80 mempunyai pengaruh terhadap mortalitas larva Anopheles aconitus. Saat dilakukan penelitian di laboratorium, dalam waktu 24 jam, larutan dengan konsentrasi 2% sudah membunuh beberapa larva dibandingkan dengan kontrol. Oleh sebab itu, dalam penelitian ini tidak menggunakan larutan Tween 80, melainkan melakukan penggojokan yang cukup lama (± 10 menit) untuk melepas hifa konidiospora dan membuat suspensi menjadi homogen.
Upaya guna aplikasi di lapangan dan sifat biologi larva nyamuk Anopheles aconitus dan suspensi jamur Metarhizium anisopliae perlu dipelajari. Munif (1997) menyatakan bahwa jamur parasit pada larva nyamuk dapat berkembang biak secara alami dengan larva sebagai inang infinitif. Keberhasilan pemanfaatan jamur entomopatogenik sebagai pengendali vektor di lapangan sangat dipengaruhi oleh faktor lingkungan (suhu, kelembaban dan pH), jumlah konidia dan viabilitasnya. Teknik dalam aplikasi Metarhizium anisopliae terhadap larva juga mempengaruhi hasil. Kurtt dan Keyhani (2008) melakukan isolasi langsung destruxin dari konidiospora Metarhizium anisopliae. Hal ini juga dilakukan oleh Garcia et al. (2005) saat melakukan pengujian Metarhizium anisopliae pada Rhipicephalus sanguineus. Proses isolasi destruxin ini menggunakan beberapa larutan seperti DOWEX 50, DOWEX 1, asam asetat, dan benzena. Penelitian ini mengalami kendala untuk memperoleh bahan tersebut di Laboratorium B2P2VRP, sehingga dalam penelitian ini tidak dilakukan isolasi destruxin.
(44)
commit to user
34 BAB VI
SIMPULAN DAN SARAN
A. Simpulan
Suspensi jamur Metarhizium anisopliae mempunyai pengaruh untuk meningkatkan mortalitas larva nyamuk Anopheles aconitus. Upaya untuk membunuh 50% larva nyamuk dibutuhkan jumlah spora rata-rata 1,87x108 spora/ml, sedangkan untuk membunuh 90% larva nyamuk Anopheles aconitus dibutuhkan jumlah spora rata-rata 1,82x109 spora/ml.
B. Saran
1. Dalam usaha pengendalian terhadap larva nyamuk Anopheles aconitus menggunakan entomopatogen konidiospora Metarhizium anisopliae di tempat perindukannya sebaiknya dilakukan penelitian lagi dengan teknik yang berbeda seperti teknik isolasi destruxin pada konidiospora. 2. Dalam aplikasi suspensi jamur Metarhizium anisopliae sebaiknya
menggunakan turunan pertama (F1) karena memiliki virulensi yang lebih tinggi daripada turunan berikutnya.
(1)
commit to user
29
B. Uji Sesungguhnya
1. Hasil Penelitian
Pada uji yang sesungguhnya, hasil penghitungan jumlah rata-rata spora pada suspensi jamur dengan tingkat pengenceran 10-1 adalah 1,42x107 spora/ml. Adapun hasil penelitian eksperimental laboratorik pengaruh suspensi jamur Metarhizium anisopliae terhadap mortalitas larva nyamuk Anopheles aconitus adalah sebagai berikut:
Tabel 3. Jumlah Larva Nyamuk Anopheles aconitus yang Mati Setelah
Mendapat Perlakuan Suspensi Jamur Metarhizium anisopliae
Sumber data: Primer, November 2010
Data hasil penelitian yang berupa mortalitas larva dianalisis dengan uji regresi linier. Untuk mengetahui LC 50 dan LC 90 maka dilakukan analisis probit. Data diolah dengan program Stastical Product and Service
Solution (SPSS) 17,0 for Windows.
Volume suspensi jamur yang diberikan
Jumlah rata-rata spora/ml
Total Jumlah
larva
Jumlah larva yang
mati
Prosentase kematian larva (%) 3 ml 4,26x107 80 37 46,25 5 ml 7,1x107 80 37 46,25 7 ml 9,94x107 80 42 52,5 10 ml 1,42x108 80 36 45 15 ml 2,13x108 80 33 41,25 30 ml 4,26x108 80 54 67,5
62 ml 8,8x108 80 54 67,5 0 ml (kontrol) - - 0 0
(2)
commit to user
30
Tabel 4. Ringkasan Hasil Uji Regresi Linier
Model
Sum of
Squares df Mean Square F Sig.
1Regression 155,79 1 155,79 4,90 ,09a
Residual 127,04 4 31,76
Total 282,83 5
a. Predictors: (Constant), konsentrasi
b. Dependent Variable: mortalitas
Pada tabel 3 ringkasan uji linier regresi didapat p = 0,09, karena p > 0,05 maka H0 diterima dan H1 ditolak sehingga dapat disimpulkan bahwa ketujuh kelompok perlakuan tersebut memiliki perbedaan yang tidak signifikan.
Tabel 5. Ringkasan Hasil Analisis Probit
Pada tabel 4 ringkasan analisis probit didapatkan LC 50 pada jumlah rata-rata 1,87x108 spora/ml dan LC 90 pada jumlah rata-rata 1,87x109 spora/ml. sedangkan untuk mencapai 99% kematian larva dibutuhkan jumlah spora rata-rata 3,24x109 spora/ml.
Probabilitas
Tingkat kepercayaan 95% pada konsentrasi
Estimasi Batas bawah Batas atas PROBIT
0,5 18,70 -,60 32,90
0,9 187,1 131,60 355,62
(3)
commit to user
31 BAB V PEMBAHASAN
Penghitungan jumlah volume suspensi jamur pada penelitian pendahuluan diberikan sesuai dengan penelitian Widiyanti dan Muyadihardja yang memberikan perlakuan suspensi jamur Metarhizium anisopliae pada Aedes aegypti. Waktu pengamatan dilakukan selama 7 hari yang merupakan waktu bagi spora
Metarhizium anisopliae untuk tumbuh dalam tubuh larva Anopheles aconitus.
Menurut penelitian yang sering dilakukan di Laboratorium Mikrobiologi B2P2VRP, Anopheles aconitus mempunyai ketahanan 5 kali dibanding Aedes
aegypti, maka sesuai dengan penelitian Widiyanti dan Muyadihardja, Anopheles
aconitus kira-kira membutuhkan jumlah rata-rata 2x108 spora/ml (5 x 4x107
spora/ml). Pada penelitian didapati bahwa untuk membunuh 50% dari jumlah total larva Anopheles aconitus dibutuhkan jumlah rata-rata 1,87x108 spora/ml.
Hasil penelitian Widiyanti dan Muyadihardja (2004) pada larva nyamuk instar III Aedes aegypti hanya membutuhkan 8,73x107 spora/ml untuk membunuh 90% larva uji. Anopheles aconitus membutuhkan rata-rata 1,87x109 spora/ml. Jumlah spora yang dibutuhkan untuk membunuh larva nyamuk instar III
Anopheles aconitus jauh lebih banyak dibandingkan larva instar III Aedes aegypti,
dengan perbandingan 4,5%. Hal ini menunjukkan bahwa larva nyamuk instar III
Anopheles aconitus kurang rentan terhadap konidiospora Metarhizium anisopliae
dibanding dengan Aedes aegypti. Hasil penghitungan spora dibandingkan dengan jumlah spora pada penelitian Widiyanti didapatkan jumlah spora yang berbeda.
(4)
commit to user
32
Pada tingkat pengenceran 10-1 penelitian Widiyanti mengandung 5,2x108 spora/ml. Sedangkan dari penelitian ini mendapatkan rata-rata jumlah spora yaitu 1,42 x 107/ml pada tingkat pengenceran 10-1. Hal ini tergantung dari jumlah spora yang didapatkan pada waktu memanen spora atau spora induk. Perbedaan jumlah spora dalam setiap pembiakan sangat dipengaruhi oleh isolat murni. Pembiakan murni atau turunan pertama (F1) dari isolat Metarhizium anisopliae yang diambil langsung dari larva yang sakit seperti Orictes rhinoceros (kumbang kelapa) akan mempunyai virulensi yang lebih tinggi daripada pembiakan dari isolat yang merupakan duplikat dari pembiakan murni (Lolong, 2010; Costa et al., 2002). Jamur ini mempunyai dua varitas yaitu mayor dan minor. Varitas mayor mempunyai spora yang lebih panjang daripada minor. Varitas mayor akan menghasilkan destruxin yang lebih banyak daripada yang minor (Lolong, 2010).
Penentuan LC 50 dan LC 90 dilakukan untuk menentukan kematian larva nyamuk uji 50% dan 90% setelah pendedahan 7 hari. Upaya untuk membunuh 50% larva nyamuk Anopheles aconitus dibutuhkan jumlah spora rata-rata 1,87x108 spora/ml, sedangkan untuk membunuh 90% larva Anopheles aconitus dibutuhkan jumlah spora rata-rata 1,82x109 spora/ml.
Hasil uji analisis regresi untuk jumlah konidia menunjukkan bahwa terdapat perbedaan yang kurang spesifik pada angka kematian larva instar III
Anopheles aconitus oleh pengaruh jumlah konidiospora pada masing-masing
kelompok dalam kondisi laboratorium. Penelitian ini memiliki perbedaan teknik dengan penelitian yang dilakukan oleh Widiyanti dan Muyadihardja (2004). Penelitian Widiyanti dan Muyadihardja memanen spora dari media menggunakan
(5)
commit to user
33
larutan Tween 80 untuk melepas hifa konidiospora dan membuat suspensi menjadi homogen. Penelitian ini tidak menggunakan larutan tersebut karena ternyata larutan Tween 80 mempunyai pengaruh terhadap mortalitas larva
Anopheles aconitus. Saat dilakukan penelitian di laboratorium, dalam waktu 24
jam, larutan dengan konsentrasi 2% sudah membunuh beberapa larva dibandingkan dengan kontrol. Oleh sebab itu, dalam penelitian ini tidak menggunakan larutan Tween 80, melainkan melakukan penggojokan yang cukup lama (± 10 menit) untuk melepas hifa konidiospora dan membuat suspensi menjadi homogen.
Upaya guna aplikasi di lapangan dan sifat biologi larva nyamuk Anopheles
aconitus dan suspensi jamur Metarhizium anisopliae perlu dipelajari. Munif
(1997) menyatakan bahwa jamur parasit pada larva nyamuk dapat berkembang biak secara alami dengan larva sebagai inang infinitif. Keberhasilan pemanfaatan jamur entomopatogenik sebagai pengendali vektor di lapangan sangat dipengaruhi oleh faktor lingkungan (suhu, kelembaban dan pH), jumlah konidia dan viabilitasnya. Teknik dalam aplikasi Metarhizium anisopliae terhadap larva juga mempengaruhi hasil. Kurtt dan Keyhani (2008) melakukan isolasi langsung
destruxin dari konidiospora Metarhizium anisopliae. Hal ini juga dilakukan oleh
Garcia et al. (2005) saat melakukan pengujian Metarhizium anisopliae pada
Rhipicephalus sanguineus. Proses isolasi destruxin ini menggunakan beberapa
larutan seperti DOWEX 50, DOWEX 1, asam asetat, dan benzena. Penelitian ini mengalami kendala untuk memperoleh bahan tersebut di Laboratorium B2P2VRP, sehingga dalam penelitian ini tidak dilakukan isolasi destruxin.
(6)
commit to user
34 BAB VI
SIMPULAN DAN SARAN
A. Simpulan
Suspensi jamur Metarhizium anisopliae mempunyai pengaruh untuk meningkatkan mortalitas larva nyamuk Anopheles aconitus. Upaya untuk membunuh 50% larva nyamuk dibutuhkan jumlah spora rata-rata 1,87x108 spora/ml, sedangkan untuk membunuh 90% larva nyamuk
Anopheles aconitus dibutuhkan jumlah spora rata-rata 1,82x109 spora/ml.
B. Saran
1. Dalam usaha pengendalian terhadap larva nyamuk Anopheles aconitus
menggunakan entomopatogen konidiospora Metarhizium anisopliae di tempat perindukannya sebaiknya dilakukan penelitian lagi dengan teknik yang berbeda seperti teknik isolasi destruxin pada konidiospora. 2. Dalam aplikasi suspensi jamur Metarhizium anisopliae sebaiknya
menggunakan turunan pertama (F1) karena memiliki virulensi yang lebih tinggi daripada turunan berikutnya.