53
g Paraffin dipotong sesuai dengan letak jaringan yang ada dengan
menggunakan skalpelpisau hangat. h
Lalu diletakkan pada balok kayu, diratakan pinggirnya, dan dibuat ujungnya sedikit meruncing.
i Memblok paraffin, siap dipotong dengan mikrotom.
7 Cutting
a Pemotongan dilakukan pada ruangan dingin.
b Sebelum memotong, blok didinginkan terlebih dahulu di lemari es.
c Dilakukan pemotongan kasar, lalu dilanjutkan dengan pemotongan halus
dengan ketebalan 4-5 mikron. Pemotongan dilakukan menggunakan rotary microtome dengan disposable knife.
d Dipilih lembaran potongan yang paling baik, diapungkan pada air, dan
dihilangkan kerutannya dengan cara menekan salah satu sisi lembaran jaringan tersebut dengan ujung jarum dan sisi yan lain ditarik
menggunakan kuas runcing. e
Lembaran jaringan dipindahkan ke dalam water bath suhu 60 C selama
beberapa detik sampai mengembang sempurna. f
Dengan gerakan menyendok, lembaran jaringan tersebut diambil dengan slide bersih dan ditempatkan di tengah atau pada sepertiga atas atau
bawah. g
Slide yang berisi jaringan ditempatkan pada inkubator suhu 37 C selama
24 jam sampai jaringan melekat sempurna.
54
8 Staining pewarnaan dengan Harris Hematoksilin-Eosin
Setelah jaringan melekat sempurna pada slide, dipilih slide yang terbaik, selanjutnya dilakukan deparafinisasi dalam larutan xylol I selama 5 menit
dan larutan xylol II selama 5 menit. Kemudian, dihidrasi dalam ethanol absolut selama 1 jam, alkohol 96 selama 2 menit, alkohol 70 selama 2
menit, dan air selama 10 menit. Lalu dilakukan pulasan inti dengan Harris Hematoksilin selama 15 menit, dibilas dengan air mengalir, lalu diwarnai
dengan eosin selama maksimal 1 menit. Selanjutnya, didehidrasi dengan alkohol 70 selama 2 menit, alkohol 96 selama 2 menit, dan alkohol
absolut selama 2 menit. Kemudian dilakukan penjernihan dengan xylol I selama 2 menit dan xylol II selama 2 menit.
9 Mounting dengan entelan dan tutup dengan deck glass
Setelah pewarnaan selesai, slide ditempatkan di atas kertas tisu pada tempat datar, ditetesi dengan bahan mounting, yaitu entelan, dan ditutup dengan
deck glass, cegah jangan sampai terbentuk gelembung udara. 10
Slide dibaca dengan mikroskop Slide diperiksa di bawah mikroskop cahaya dengan perbesaran 400x.
Preparat histopatologi dikirim ke laboratorium Patologi Anatomi untuk dikonsultasikan dengan ahli patologi anatomi. Pengamatan mikroskopis
dilakukan oleh peneliti sendiri.
55
Sel-sel bervakuola merupakan salah satu karakteristik kerusakan sel yang mengalami hepatotoksik. Sel-sel yang mengalami hepatotoksik memiliki
kandungan glikogen atau lemak yang meningkat pada vakuola sehingga dapat membesar dan tampak di bawah mikroskop cahaya.
56
Timbang berat badan tikus KI
KII KIII
KIV KV Tikus di adaptasikan selama 7 hari
Tikus diberi perlakuan selama 8 hari Cekok
Cekok Cekok
mahkota dewa mahkota dewa mahkota dewa ceplukan 7,56 mg ceplukan 15,12 mg ceplukan 30,24 mg
100gBB 100gBB 100gBB
Cekok Cekok
Cekok Cekok
Cekok Aquadest Rifampisin Rifampisin Rifampisin Rifampisin
1x sehari 1 gkgBB 1 gkgBB 1 gkgBB 1 gkgBB 1x sehari
1x sehari 1x sehari 1x sehari
Pada hari ke 9 dan 10 Cekok
Cekok Cekok Cekok
Cekok Aquades
Aquades mahkota dewa mahkota dewa mahkota dewa 1x sehari 1x sehari ceplukan 7,56 mg ceplukan 15,12 mg ceplukan 30,24 mg
100gBB 100gBB
100gBB 1x sehari
1x sehari 1x sehari
Lakukan pembiusan pada tikus Tikus dibedah dan diambil organ hepar
Dilakukan pemeriksaan mikroskopis Interpretasi hasil pengamatan
Gambar 12. Diagram alur penelitian
Setelah 2 jam
57
F. Identifikasi Variabel dan Definisi Operasional Variabel
1. Identifikasi Variabel
a. Variabel Independen adalah pemberian ekstrak buah mahkota dewa Phaleria
macrocarpa dan daun ceplukan Physalis angulata L.; b.
Variabel dependen adalah gambaran mikroskopis hepar.
2. Definisi Operasional Variabel
Tabel 3. Definisi operasional variabel
Variabel Definisi
Skala Dosis ekstrak
buah mahkota dewa dan
ekstrak daun ceplukan
Gambar histopatologi
hepar tikus Dosis efektif mahkota dewa dan ceplukan adalah 7,65 mg100gBB
Kelompok I kontrol negatif = pemberian aquadest Kelompok II kontrol positif = pemberian rifampisin 1 gkgBB
Kelompok III perlakuan coba = pemberian mahkota dewaceplukan dosis 7,56 mg100gBB + rifampisin 1 gkgBB
Kelompok IV perlakuan coba = pemberian mahkota dewaceplukan dosis 15,12 mg100gBB + rifampisin 1 gkgBB
Kelompok V perlakuan coba = pemberian mahkota dewaceplukan dosis 30,24 mg100gBB + rifampisin 1 gkgBB
Gambaran kerusakan hepatosit tikus dilihat dengan melakukan pengamatan sediaan histopatologi menggunakan mikroskop dengan
perbesaran 400x pada 5 lapangan pandang dimana setiap lapangan pandang diamati berupa degenerasi bengkak keruh yang terjadi pada
hepatosit. Skala degenerasi bengkak keruh kemudian dihitung secara semikuantitatif dalam 5 lapang pandang berbeda. Skala penilaian
Kawasaki 2009 dengan modifikasi:
0 = tidak ada hepatosit yang mengalami degenerasi bengkak keruh;
1 = 10 hepatosit yang mengalami degenerasi bengkak keruh; 2 = 10 – 33 hepatosit yang mengalami degenerasi bengkak
keruh; 3 = 34 – 66 hepatosit yang mengalami degenerasi bengkak
keruh; 4 = 66 – 100 hepatosit yang mengalami degenerasi bengkak
keruh. Numerik
Numerik
58
G. Analisis Data
Analisis data penelitian diproses dengan program SPSS versi 17.0 for windows dengan
tingkat signifikansi p=0,05, langkah-langkahnya sebagai berikut: 1.
Uji normalitas Data p0,05 Pengujian normalitas data menggunakan Shapiro Wilk test untuk mengetahui data
berdistribusi normal atau tidak normal. Hasil uji normalitas ini untuk menentukan analisis berikutnya, yaitu analisis parametrik bila data berdistribusi normal atau
non parametrik bila data tidak berdistribusi normal. 2.
Uji Homogenitas data p0,05 Pengujian hom
ogenitas data menggunakan uji Levene’s untuk mengetahui data homogen atau tidak homogen. Hasil uji homogenitas ini untuk menentukan
analisis berikutnya, yaitu analisis parametrik bila data homogen atau non parametrik bila data tidak homogen.
3. Uji parametrik One-Way ANOVA
Untuk menguji perbedaan pengaruh kelompok I, kelompok II, kelompok III, kelompok IV, kelompok V.
4. Uji non-parametrik Kruskal Wallis
Untuk menguji perbedaan pengaruh kelompok I, kelompok II, kelompok III, kelompok IV, kelompok V dan merupakan uji alternatif dari One-Way ANOVA.
5. Analisis post hoc
Bila pada uji One-Way ANOVA menghasilkan nilai p0,05.
59
6. Uji Mann-Whitney Test
Bila pada uji Kruskal Wallis menghasilkan nilai p0,05 atau sebagai uji non- parametrik uji T tidak berpasangan.
7. Uji T tidak berpasangan
Untuk menguji perbedaan pengaruh antara kelompok tikus yang diberikan ekstrak daun ceplukan dengan kelompok tikus yang diberikan ekstrak buah mahkota dewa.
92
DAFTAR PUSTAKA
93
DAFTAR PUSTAKA
Aprilia, L. 2010. Efek Protektif Ekstrak Etanol Mahkota Dewa [Phaleria macrocarpa
Scheff. Boerl] Terhadap Gambaran Histopatologi Hati Mencit Mus musculus L. Jantan Galur BALBC yang Diinduksi oleh Etanol. Skripsi. Universitas
Lampung.
Amirudin, R., Nella, S. 2004. Peran Radikal Bebas Pada Penyakit Hati Kronis.
Diagnosticum. Prodia Diagnosticum Educational Service. Bandung. Backer, C., Brink, R. 1965. Flora of Java Spermatophytes Only. Noordhoff:
Groningen, The Netherlands, Volume II.
Buhler, D.R., Miranda, C. 2000. Antioxidant Activities of Flavonoids. Oregon State
University. USA.
Chandrasoma, P., Taylor, C.R. 2006. Ringkasan Patologi Anatomi Edisi 2. EGC.
Jakarta. Dahlan, S. 2009. Metodologi Penelitian Kesehatan. Rineka Cipta. Jakarta
Dhuley, J.N., Naik, S.R. 1998. Modulation of Rifampicin Toxicity by 6 MFA, an
Interferon Inducer Obtained from Fungus Aspergillus Ochraceus. Department of Pharmacology and Toxicology, Research Centre, Hindustan Antibiotics Limited,
Pimpri, Pune-411 018, India.
94
Djajanegara. 2012. Uji Sitotoksisitas Ekstrak Ethanol 70 Herba Ceplukan Physalis angulata Linn. Terhadap Sel WiDr Secara In Vitro. P3T Bioindustri. Badan
Pengkajian dan Penerapan Teknologi BPPT Serpong. Eminzade, S., Uras, F., Izzettin, F.V. 2008. Silymarin protects liver against toxic
effects of anti-tuberculosis drugs in experimental animals. Department of Pharmacology, Marmara University, Faculty of Pharmacy. Turkey.
Eroschenko, V.P. 2010. Atlas Histologi diFiore dengan Korelasi Fungsional Edisi
11. EGC. Jakarta. 552 hlm.
Fauzi, I.A., Amalia, F., Sabila, N., Hermawan, A., Ikawati, M., Meiyanto, E. 2011.
Aktivitas Antiproliferasi Ekstrak Etanolik Herba Ciplukan Physalis angulata L. Terhadap Sel Hepar Tikus Betina Galur Sprague Dawley Terinduksi 7,12-
Dimetilbenz[a]antrasena. Majalah Kesehatan PharmaMedika 2011 Vol.3 No.1.
Gaotama, I.B.I., Sugiarto, S., Praoti, I.J. 1999. Inventaris Tanaman Obat Indonesia.
Jilid V. Jakarta: Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan, Departemen Kesehatan.
Gartner, L.P., Hiatt, J.L. Color Textbook of Histology Third Edition. Elsevier
Saunder. 526 hlm.
Guyton, A.C., Hall, J.E. 2008. Buku Ajar Fisiologi Kedokteran Edisi 11. EGC.
Jakarta.
Gordon, M.H. 1993. The Mechanism of Antioxidants Action in Vitro. Applied
Science. New York.
Hendra, R., Ahmad, S., Sukari, A., Syukor, M.Y., Oskoueian, E. 2011. Flavonoid
Analyses and Antimicrobial Activity of Various Parts of Phaleria macrocarpa Scheff. Boerl. Fruit. International Journal of Molecular Science 2011 Vol.12
No.3422-3431.
95
Harmanto, N. 2003. Sehat dengan Ramuan Tradisional Mahkota Dewa. PT.
Agromedia Pustaka. Jakarta.
Hartati, M.S., Mubarika, S., Gandjar, I.G, Hamann, M.T., Rao, K.V., Wahyuono, S.
2005. Phalerin, a New Benzophenoic Glucoside Isolated from The Methanol Extract of Mahkota Dewa [Phaleria macrocarpa Scheff. Boerl.] Leaves.
Majalah farmasi Indonesia. 16 1: 51-57.
Ismail, N., Alam, M., 2001. A Novel Cytotoxic Flavonoid Glycoside from Physalis
angulata, Fitoterapi, vol. 72. 676
–679.
Isroi. 2010. Biologi Rat Rattus norvegicus. Http:isroi.wordpress.com. Diakses
pada tanggal 1 Oktober 2012.
Januario, A.H., Filho, E.R., Pietro, R.C., Kashima, S., Sato, D.N., Franca, S.C. 2002.
Antimycobacterial Physalins from Physalis angulata L. Solanaceae. Phytotherapy Research 16, 445
–448.
Jovanovic, S.V., Simic, M.G. 2000. Reactive Oxygen Species: From Radiation To
Molecular Biology. Annals of The New York Academy of Sciences. 326-334.
Junqueira, L.C., Carneiro, J. 2007. Histologi Dasar Teks dan Atlas Edisi 10. EGC.
Jakarta. 501 hlm. Katzung. 2008. Basic Clinical Pharmacology Edisi 9. Mc. Garw Hill. 635-640.
Kawasaki, T., Igarashi, K., Koeda, T., Sugimoto, K., Nakagawa, K., Hayashi, S.,
Yamaji, R., Inui, H., Fukusato T., Yamanouchi, T. 2009. Rats Fed Fructose- enriched Diets Have Characteristics of Nonalcoholic Hepatic Steatosis. J. Nutr.
139: 2067-2071.
Larasati, N.D. 2011. Efek Protektif Madu Terhadap Kerusakan Hepar Tikus Putih
Rattus norvegicus Jantan Dewasa Galur Sprague Dawley yang Diinduksi oleh Etanol. Skripsi. Unversitas Lampung.
96
Lin, Y.S., Chiang, H.C., Kan, W.S., Hone, E., Shih, S.J., Won, M.H., 1992. Immunomodulatory Activity of Various Fractions Derived from Physalis
angulata L. Extract. American Journal Clinical Medicine 20, 233
–243.
Lorenzi, H. 1982. Plantas daninhas do Brasil . Nova Odessa. S˜ao Paulo. Brasil. pp.
372.
Manggau, M., Alam, G., Mufidah., Bahar, A., Wahyudin, E. 2007. Selektivitas
Penghambatan COX1-2 dan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Herba Ceplukan Physalis angulata L.. Fakultas Farmasi Universitas Hasanuddin. 8 hlm.
Markham, K.R. 1988. Techniques of Flavonoids Identification, diterjemahkan oleh
Kosasih Padmawinata. Penerbit ITB. Bandung.
Moore, K.L., Agur, A.M.R. 2002. Anatomi Klinis Dasar. Hipokrates. Jakarta. 505
hlm.
Mycek, J.M., Harvey, A.R., Champe, C.P. 2001. Farmakologi Ulasan Bergambar.
Widya Medika. Jakarta. 337-338.
Natawidjaya, P., Suparman. 1983. Mengenal Beberapa Binatang Di Alam Sekitarnya.
Pustaka Dian. Jakarta.
Ngatidjan, P.S. 2006. Metode Laboratorium dalam Toksikologi. Bagian Farmakologi
dan Toksikologi. Fakultas Kedokteran Universitas Gajah Mada. Yogyakarta.
Price, S., Wilson, L. 2005. Patofisiologi Konsep Klinis Proses-Proses Penyakit.
Edisi: Ke-5. Diterjemahkan oleh Anugerah,P. EGC. Jakarta.
Putut, B. Hepatotoksisitas imbas obat. In: Sudoyo AW, SetiyohadiB, Alwi I,
Simadibrata KM, Setiati S. 2006. Buku Ajar Ilmu Penyakit Dalam Jilid I 4th ed. Pusat Penerbitan Departemen ilmu Penyakit dalam FK UI. Jakarta. 471-2.
