Uji Kemurnian dan Penentuan Sifat Fisis Identifikasi dan Penentuan Struktur Molekul Uji Aktivitas Hipoglisemik

3.5.4 Uji Kemurnian dan Penentuan Sifat Fisis

Uji kemurnian fraksi D 3 dilakukan dengan kromatografi lapis tipis dengan menggunakan berbagai eluen. Penggunaan GC-MS atau HPLC dapat juga dilakukan untuk menguji kemurnian. Pengukuran sifat fisis yaitu titik leleh diukur dengan menggunakan alat Fisher-John Melting Point.

3.5.5 Identifikasi dan Penentuan Struktur Molekul

Penentuan struktur molekul fraksi D 3 dilakukan dengan menggunakan spektroskopi inframerah, spektroskopi NMR 1D yaitu NMR- 1 H, NMR- 13 C, DEPT Distortionless Enhancement by Polarization Transfer; spektroskopi NMR 2D yaitu COSY 1 H- 1 H Homonuclear Correlated Spectroscopy, HMQC 1 H- 13 C Heteronuclear Multiple Quantum Coherence, HMBC 1 H- 13 C Heteronuclear Multiple Bond Connectivity, dan spektroskopi massa yang dilakukan di Laboratorium Jurusan Kimia Fakultas Sains Universitas Malaya − Malaysia atas bantuan Dr. Nurdin Saidi dari Universitas Syiah Kuala – Banda Aceh.

3.5.6 Uji Aktivitas Hipoglisemik

3.5.6.1 Pembuatan Larutan Glukosa 50 bv Sebanyak 50 g glukosa dilarutkan dengan akuades dalam labu 100 ml. 3.5.6.2 Pembuatan Suspensi CMC carboxy methyl cellulose 0,5 bv Sebanyak 10 ml akuades panas ± 60°C dimasukkan ke dalam mortir, kemudian sebanyak 0,5 g CMC ditaburkan secara merata, ditutup dan dibiarkan selama ± 15 menit hingga diperoleh massa transparan, lalu digerus hingga homogen. Kemudian ditambahkan akuades, diaduk dengan cepat hingga terbentuk suspensi, lalu dimasukkan ke dalam labu ukur 100 ml dan dicukupkan dengan akuades hingga garis tanda. 3.5.6.3 Pembuatan Suspensi Glibenklamid 0,02 bv Sebanyak 0,5 g CMC ditaburkan ke dalam mortir yang berisi akuades panas ± 60 °C sebanyak 10 ml, ditutup dan dibiarkan ± 15 menit hingga diperoleh massa transparan, lalu digerus hingga homogen. Ke dalam 20 mg glibenklamid yang telah 61 Chairul Saleh: Isolasi dan Penentuan Struktur Senyawa Steroid Dari Akar Tumbuhan Cendana Santalum album Linn. USU e-Repository © 2008. digerus halus dalam mortir ditambahkan gel CMC sedikit demi sedikit. Kemudian ditambahkan akuades, diaduk dengan cepat hingga terbentuk suspensi, dimasukkan ke dalam labu ukur 100 ml, dicukupkan dengan akuades hingga garis tanda. 3.5.6.4 Pembuatan Suspensi Ekstrak Metanol Santalum album 1 bv Sebanyak 0,5 g CMC ditaburkan ke dalam mortir yang berisi akuades panas ± 60 °C sebanyak 10 ml, ditutup dan dibiarkan ± 15 menit hingga diperoleh massa transparan, lalu digerus hingga homogen. Ke dalam 250 mg ekstrak metanol akar S. album yang telah digerus halus dalam mortir ditambahkan gel CMC sedikit demi sedikit. Kemudian ditambahkan akuades, diaduk dengan cepat hingga terbentuk suspensi, dimasukkan ke dalam labu ukur 25 ml, dicukupkan dengan akuades hingga garis tanda. 3.5.6.5 Prosedur Kerja Pengujian Efek Farmakologi Setiap awal percobaan, mencit dipuasakan tidak makan tetapi tetap minum selama 16 jam, kemudian berat badan mencit ditimbang. Kadar gula darah ditentukan dengan cara mengambil darah melalu vena ekor yang ditusuk dengan menggunakan jarum suntik. Darah yang keluar dioleskan pada glikostrip yang terpasang pada glucotest. Dibiarkan selama 8 detik, alat akan bekerja secara otomatis. Angka yang tampil pada alat dicatat sebagai kadar gula darah mgdl. 3.5.6.6 Uji Aktivitas Hipoglisemik Mencit dipuasakan selama 16 jam. Kemudian berat badan ditimbang dan diukur kadar gula darah puasa. Mencit kemudian diberi larutan glukosa 50 dosis 4 gkg berat badan secara per oral. Kadar gula darah mencit diukur pada selang waktu 30, 60, 90, 120, 150, 180 menit. Cara penentuan kadar gula darah mencit sama seperti point 3.5.6.5. 3.5.6.7 Penentuan Efek Ekstrak Metanol Akar S.album Terhadap Penurunan Kadar Gula Darah Mencit dipuasakan selama 16 jam. Kemudian berat badan ditimbang dan diukur kadar gula darah puasa. Kemudian mencit diberi larutan glukosa 50 dosis 4 gkg berat 62 Chairul Saleh: Isolasi dan Penentuan Struktur Senyawa Steroid Dari Akar Tumbuhan Cendana Santalum album Linn. USU e-Repository © 2008. badan secara per oral. Setelah 30 menit diukur kadar gula darah mencit, kemudian masing-masing mencit diberi: a. Suspensi kosong CMC 0,5 dosis 1 berat badan per oral b. Suspensi ekstrak metanol akar S. album dosis 25 mgkg berat badan per oral c. Suspensi ekstrak metanol akar S. album dosis 50 mgkg berat badan per oral d. Suspensi ekstrak metanol akar S. album dosis 75 mgkg berat badan per oral e. Suspensi glibenklamid dosis 1 mgkg berat badan per oral Kadar gula darah diukur pada selang waktu 60, 90, 120, 150, dan 180 menit. Cara penentuan kadar gula darah sama seperti point 3.5.6.5.

3.5.7 Penggunaan Alat