dengan menggunakan pelarut kloroform. Selanjutnya masing-masing fraksi dipekatkan dan diuji steroid. Bagan kerja tahap ekstraksi dan fraksinasi tersebut ditunjukkan pada
Gambar 52, ternyata fraksi ekstrak CHCl
3
positif steroid sedangkan fraksi air negatif steroid.
Serbuk akar S. album
2,0 kg
- dievaporasi pada suhu 40
o
C Ekstrak MeOH kental
48,3 g; 2,415
- disuspensi dgn akuades - diekstraksi dgn CHCl
3
Ekstrak CHCl
3
4,2309 g; 10,577 Ekstrak H
2
O - dimaserasi dgn MeOH 80 3 x 4 L
- disaring
- diuji aktivitas hipoglisemik 40,0 g
Ekstrak MeOH kental
aktivitas hipoglisemik +
- diuji L-B steroid
+ 250,0 mg
Ekstrak MeOH kental
- diuji L-B steroid
-
Gambar 52. Bagan kerja tahap ekstraksi dan fraksinasi
3.5.3 Pemisahan dan Pemurnian
Ekstrak kloroform yang menunjukkan positif steroid dipisahkan dengan cara kromatografi kolom menggunakan fase diam silika gel 60 dan dielusi secara isokratik
dengan menggunakan pelarut n-heksana–etil asetat 82:18 dengan penampungan 5 ml
59
Chairul Saleh: Isolasi dan Penentuan Struktur Senyawa Steroid Dari Akar Tumbuhan Cendana Santalum album Linn. USU e-Repository © 2008.
setiap fraksi. Semua fraksi hasil pemisahan kromatografi kolom selanjutnya dilakukan analisis dengan menggunakan kromatografi lapis tipis untuk melihat noda dengan R
f
yang sama. Fraksi-fraksi dengan noda yang sama pada kromatografi lapis tipis digabungkan dan
diuapkan pelarutnya. Kemudian fraksi yang diperoleh diuji steroid ternyata fraksi A, B, C, E, dan F negatif terhadap steroid sedangkan fraksi D positif terhadap steorid sehingga fraksi
D dimurnikan kembali dengan menggunakan kromatografi kolom. Bagan kerja dari proses pemisahan dan pemurnian ditunjukkan pada Gambar 53.
- hasilnya di KLT noda dgn R
f
sama digabung pengembang : CHCl
3
-EtOAc 9:1
Fraksi A 8-15
278,1 mg
Ekstrak CHCl
3
2,0 g
Fraksi B 19-26
99,7 mg Fraksi C
36-40 81,9 mg
Fraksi D 52-59
51,9 mg Fraksi E
79-104 24,5 mg
- di KK dgn silika gel 60 70-230 mesh dielusi secara isokratik dengan
eluen : n-heksana-EtOAc 82:18 - ditampung tiap 5 ml
Fraksi F 128-170
50,0 mg
- hasilnya di KLT noda dgn R
f
sama digabung pengembang : petroleum eter-eter 1:1
- di KK dgn silika gel 60 200 mesh dielusi secara isokratik dengan
eluen petroleum eter-eter 40:60 - ditampung tiap 1 ml
Fraksi D
1
12-15 13,2 mg
Fraksi D
2
22-24 9,4 mg
Fraksi D
3
33-34 11,4 mg
Fraksi D
4
39-43 14,3 mg
steroid + steroid +
steroid + steroid +
steroid - steroid -
steroid - steroid -
steroid - steroid +
Gambar 53. Bagan kerja tahap pemisahan dan pemurnian
Fraksi D
1
, D
2
, dan D
3
telah dikirim ke Malaysia ternyata fraksi D
3
yang telah lengkap data spektroskopinya, fraksi D
4
setelah dikromatografi lapis tipis memberikan 2 noda sehingga tidak dikirim.
60
Chairul Saleh: Isolasi dan Penentuan Struktur Senyawa Steroid Dari Akar Tumbuhan Cendana Santalum album Linn. USU e-Repository © 2008.
3.5.4 Uji Kemurnian dan Penentuan Sifat Fisis
