3.7.2 Pengenceran Bahan Coba
Ekstrak kulit jeruk purut ditimbang menggunakan Electronic balance dan massanya disesuaikan dengan konsentrasi yang diinginkan dengan cara dilarutkan dengan
media Triptic Soy Broth TSB. Disediakan 6 buah tabung, pada tabung pertama diisi 2 ml ekstrak kulit jeruk purut sehingga diperoleh ekstrak dengan konsentrasi 100. Kemudian
lima tabung lainnya kemudian diisi masing-masing 1 ml TSB. Selanjutnya dilakukan pengenceran dengan cara mengambil setengah dari ekstrak kulit jeruk purut konsentrasi
100 menggunakan mikropipet dan diletakkan pada tabung ke-2 untuk mendapatkan ekstrak kulit jeruk purut 50 pengenceran ganda. Demikian seterusnya sampai
didapatkan konsentrasi 25, 12,5 dan 6,25. Tabung-tabung tersebut kemudian diberi
label sesuai konsentrasinya.
3.7.2 Pembuatan Media Bakteri
Sebelum spesimen dibiakkan, dibuat media Triptic Soy Agar TSA. Sebanyak 20 gram bubuk TSA dilarutkan ke dalam 500 ml aquades dan dimasukkan ke dalam wadah
kaca tertutup. Selanjutnya media disterilkan di dalam autoklaf selama 15 menit dengan tekanan udara 2 ATM, suhu 121
o
C. Setelah disterilkan, media disimpan dalam lemari pendingin. Ketika akan digunakan, media dipanaskan kembali hingga mendidih, lalu
dituangkan ke dalam masing-masing petri sebanyak 20 mlpetri dan dibiarkan hingga dingin.
Universitas Sumatera Utara
Gambar 14. Bubuk TSA Gambar 15. Sterilisasi dengan autoklaf
3.7.3 Pembiakan Spesimen
Kegiatan pembiakan spesimen dilakukan dalam suasana anaerob pada inkubator CO
2
. Porphyromonas gingivalis yang digunakan adalah spesimen Porphyromonas gingivalis yang telah dibiakkan secara murni pada media TSA yang telah dipersiapkan
pada prosedur sebelumnya dalam suasana anaerob. Sebanyak 1-2 ose dari biakan murni bakteri uji yang telah dikultur dan tumbuh dengan subur disuspensikan dengan
menggunakan larutan NaCl 0,9 sampai diperoleh kekeruhan sesuai standar Mac Farland atau sebanding dengan jumlah bakteri 1 x 10
8
CFUml.
Gambar 16. Porphyromonas Gambar 17. Kekeruhan standar
Gingivalis ATCC 3327 Mac Farland
Universitas Sumatera Utara
3.7.4 Penetuan KHM bahan coba
Kategori