3
2. Uji antibakteri
a. Sterilisasi alat dan bahan
Alat-alat dan bahan yang akan digunakan harus disterikan terlebih dahulu. Alat-alat gelas seperti cawan petri, tabung reaksi, erlenmeyer, pipet volume dicuci dan dibungkus,
kemudian dimasukkan ke dalam oven pemanasan kering dan disterilkan pada suhu 175
o
C selama 2 jam. Alat dan bahan yang tidak tahan pemanasan kering seperti media, tips
dimasukkan dalam autoklaf pemanasan basah pada suhu 121
o
C selama 15 menit. b.
Pembuatan media MH Media padat MH 9,5 g dilarutkan dalam akuades steril 250 mL dan dipanaskan
hingga melarut, kemudian disterilisasi dalam autoklaf 121
o
C selama 15-20 menit. Media yang telah steril dimasukkan ke dalam cawan petri di LAF sebanyak 20 mL.
c. Pembuatan stok bakeri dan suspensi bakteri
Media yang telah mengeras diambil dan digoreskan bakteri secara streak plate, dan diinkubasi selama 24 jam. Suspensi bakteri dibuat dengan cara mengambil beberapa koloni
tunggal yang telah dikultur 24 jam dimasukkan ke dalam 2 mL BHI cair. Setelah itu kekeruhan disamakan dengan larutan standar Mc.Farland 1,5x10
8
CFUmL, dengan ditambah larutan NaCl 0,9 .
d. Uji antibakteri ekstrak
Ekstrak etanol buah asam gelugur dibuat 4 seri konsentrasi yaitu 1, 2, 4, dan 8. Media yang telah diinokulasi dengan bakteri S.aureus 200 µL dibuat 6 sumuran yang
masing-masing diberi 4 seri konsentrasi ekstrak 20 µL, kontrol negatif DMSO 20 µL, kontrol positif amoksisilin 1 20 µL. Petri diinkubasi pada suhu 37
o
C selama 18-24 jam dan diukur diameter zona hambatnya. Konsentrasi ekstrak etanol buah asam gelugur yang
memiliki zona hambat diformulasi dalam sediaan krim.
3. Pembuatan krim ekstrak etanol buah asam gelugur.
Berdasarkan uji antibakteri ekstrak, ekstrak etanol buah asam gelugur yang dapat menghambatkan bakteri S.aureus atau yang mempunyai zona hambat dipilih untuk
membuat formulasinya Tabel 1.
Tabel 1. Formula krim tipe AM
Bahan Formula Krim gram
K FI FII Ekstrak buah asam gelugur
Cera alba -
10 4
10 6
10 Cetaceum
5 5
5 Na tetraborat
0,5 0,5
0,5 Paraffin liq
56,5 56,5
56,5 Aquadest
Sampai 100 Sampai 100
Sampai 100 Keterangan : K = kontrol basis krim
FI = sediaan krim ektrak etanol buah asam gelugur 4 FII = sediaan krim ekstrak etanol buah asam gelugur 6
Rahmawati et al., 2010
4 Cara pembuatan krim tipe AM
Fase minyak terdiri dari cera alba, cetaceum, dan parafin cair. Fase air terdiri dari natrium tetraborat dan akuades, kedua fase dipanaskan di atas penangas air sampai suhu
65°C dan melebur sempurna, kemudian fase air dimasukkan dalam fase minyak sedikit demi sedikit dan diaduk sampai suhu 25°C dan terbentuk massa krim. Ekstrak etanol buah
asam gelugur dimasukkan ke dalam mortir dan diaduk sampai homogen. Krim dimasukkan dalam wadah yang cocok dan tertutup rapat Rahmawati et al, 2010.
4. Uji antibakteri krim
Kategori