supernatan
optimumnya. Hasil uji aktivitas kolagenase pada endapan dan supernatan larutan enzim kolagenase yang ditambah dengan NH
4
SO
4 2
dalam berbagai tingkat kejenuhannya disajikan pada Gambar 14.
0,000 0,100
0,200 0,300
0,400 0,500
0,600
30 40
50 60
70 80
Konsentrasi ammonium sulfat kejenuhan A
k ti
v it
as kol agenase U
n it
m
Gambar 14 Aktivitas kolagenase Unitml hasil pemisahan dengan pengendapan menggunakan NH
4
SO
4 2 .
endapan
Kim et al. 2002 mengendapkan ekstrak kasar kolagenase dari organ dalam ikan filefish Novodon modestrus menggunakan garam NH
4
SO
4 2
secara bertingkat dari 30 hingga 80 wv tingkat kejenuhan. Park et al. 2002
menggunakan aseton dingin untuk mengendapkan ekstrak kasar kolagenase dari organ dalam ikan makarel Scromber japanicus. Aktivitas spesifik pada
pengendapan ekstrak kolagenase dari ikan filefish yaitu 145,34 Unitmg, lebih besar dibandingkan aktivitas spesifik ekstrak kasar kolagense dari ikan makarel,
yaitu 42,3 Unitmg.
4.4 Dialisis
Dialisis dilakukan untuk mengurangi kadar garam desalting yang tersisa dari pengendapan menggunakan garam NH
4
SO
4 2.
Perbedaan tekanan osmosis dari larutan buffer yang mengandung konsentrasi garam rendah hipotonik
dengan larutan enzim dalam kantong dialisis yang mengandung garam tinggi hipertonik menyebabkan garam terdifusi keluar membran kantung dialisis,
biasanya bersifat semipermeabel. Dialisis mengeluarkan protein dengan ukuran yang lebih kecil dari ukuran pori-pori kantung dialisis. Dialisis yang dilakukan
dengan mengganti buffer beberapa kali akan meningkatkan kemurnian enzim Syukri 1999.
Lama waktu diffusi dan ukuran kantong dialisis serta konsentrasi buffer menentukan hasil dialisis Bollag Edelstein 1991. Aktivitas kolagenase pada
jenis ukuran kantong dan waktu dialisis disajikan pada Gambar 15.
0,05 0,1
0,15 0,2
0,25 0,3
0,35 0,4
0,45 0,5
8 mwco 12 mwco
Ukuran kantong dialisis A
k ti
v it
as kol
agenas e
U n
it m
Gambar 15 Aktivitas kolagenase pada jenis ukuran kantong dan waktu dialisis.
Aktivitas kolagenase hasil presipitasi adalah 0,496 Uml. Setelah didialisis, aktivitas kolagenase mengalami penurunan. Dialisis selama 6 jam
menggunakan kantong dialisis dengan ukuran 8 kDa MWCO, menghasilkan aktivitas tertinggi yaitu 0,451 Uml dibandingkan dengan proses dialisis
menggunakan kantong dialisis dengan ukuran 12kDa MWCO pada waktu yang sama yaitu 0,101 Uml sedangkan proses dialisis selama 12 jam menggunakan
kantong dialisis dengan ukuran 8 kDa MWCO, menghasilkan aktivitas kolagenase yaitu 0,289 Uml dibandingkan dengan proses dialisis menggunakan kantong
dialisis dengan ukuran 12 kDa MWCO pada waktu yang sama yaitu 0,079 Uml. Aktivitas kolagenase pada kantong yang sama yaitu 8 kDa dengan lama
waktu dialisis yang berbeda menyebabkan terjadinya penurunan aktivitas kolagenase. Perlakuan fisik dapat menyebabkan turunnya aktivitas kolagenase.
Pada ukuran kantong dialisis yang berbeda yaitu 12 kDa, aktivitas kolagenase mengalami penurunan yang cukup tinggi. Hal ini disebabkan karena
kemungkinan adanya molekul-molekul enzim yang keluar bersamaan dengan keluarnya ion dari garam NH
4
SO
4 2
.
6 jam 12 jam
4.5 Kromatografi Penukar ion
