Gambar 4 Tahapan isolasi dan identifikasi bakteri
3.7.5. Uji Kemampuan Degradasi Diazinon
Mikroorganisme dapat mendegradasi pestisida apabila mikroorganisme tersebut diadaptasikan terlebih dahulu dengan lingkungan yang mengandung
pestisida. Karena dalam proses adaptasi tersebut terjadi sintesis enzim yang dibutuhkan unuk mendegradasi senyawa-senyawa rekalsitran Gumbira-Said dan
Fauzi 1995.
Persiapan Sampel Pembuatan Media
PDA NA Pembiakan inokulasi mikroba
Pembiakan Bakteri dalam
media NA Pembiakan
KapangKhamir dalam media PDA
Isolasi Bakteri Isolasi
KapangKhamir
Determinasiidentifikasi bakter
i
Pewarnaan bakteri
Uji sifat Biokimia Koloni tunggal
Koloni tunggal
GenusSpesies
Bakteri yang diperoleh dari hasil identifikasi lalu diujikan pertumbuhannya. Media pertumbuhan dan adaptasi yang digunakan adalah Nutrient Agar NA
padat yang mengandung 100 dan 500 ppm diazinon. Bakteri yang tumbuh kemudian dilakukan uji pembentukan zona jernih
untuk menguji kemampuannya dalam mendegradasi diazinon. Media yang digunakan adalah media MSPY Mineral Salt Pepton Yeast yang mengandung
diazinon 1000 ppm, 1500 ppm, dan 1700 ppm. Bakteri tersebut diinokulasi selama empat hari untuk melihat aktivitasnya dalam mendegradasi diazinon.
3.7.5.1. Pembuatan Media NA adaptasi. Cara pembuatan media ini yakni dengan menimbang NA sebanyak 2.3 g
dan agar powder 0.5 g ke dalam 100 ml air destilata kemudian dipanaskan sambil diaduk. Setelah mendidih dan homogen media disterilisasi dalam autoklaf pada
suhu 121
o
C selama 15 menit. Kemudian media didinginkan hangat kuku lalu ditambahkan diazinon 100 dan 500 ppm lalu dituang ke dalam petri steril. Setelah
padat petri ditutup dan dibalik agar uap air tidak jatuh ke atas permukaan agar. Kemudian bakteri diinokulasikan dan diinkubasi pada suhu 30
o
C selama 3 hari. 3.7.5.2. Pembuatan Media MSPY.
Pembuatan media MSPY dilakukan dengan cara melarutkan KH
2
PO
4
0.2 g, K
2
HPO
4
0.5 g, MgSO
4
.7H
2
O 0.2 g, NaCl 0.2 g, CaCl
2
.2H
2
O 0.05 g, FeSO
4
.7H
2
O 0.025 g, Na
2
MoO
4,
0.005 g, MnSO
4
0.0005 g, NaWo
2
0.0005 g, Bakto peptone 1.0 g, dan Yeast extract 2.0 g, ke dalam gelas piala yang berisi 1 liter air destilata
kemudian diaduk sambil mengatur pH pada kisaran 7.0 pH netral. Lalu larutan media dipindahkan ke dalam erlenmeyer yang berukuran 1 liter dan diisi bacto
agar sebanyak 15 g, kemudian disterilkan dalam autoklaf Oshiro 1996. Media steril tersebut kemudian ditambahkan diazinon dengan konsentrasi masing-
masing, 1000 ppm, 1500 ppm, dan 1700 pm. Menurut Margot dan Stammbach 1964, bahwa diazinon menguap pada
suhu 83-84
o
C, sensitif terhadap oksidasi pada suhu di atas 100
o
C dan terdegradasi pada di atas 120
o
C sehingga diazinon tidak dapat disterilkan dengan
autoklaf. Oleh karena itu diazinon harus disterilkan melalui proses sterilisasi penyaringan yakni dengan menggunakan filter ukuran 0.45
μm millipore.
3.8. Analisis Aktivitas Mikroba dengan Fluorescein Diacetate FDA Assay
Kategori