Perbedaan Kadar Caffeic Acid Phenethyl Ester Pada Propolis Di Pasaran Wilayah Surakarta

  PERBEDAAN KADAR CAFFEIC ACID PHENETHYL ESTER PADA PROPOLIS DI PASARAN WILAYAH SURAKARTA SKRIPSI Untuk Memenuhi Persyaratan Memperoleh Gelar Sarjana Kedokteran Devina Noviani Pramono G.0009055 FAKULTAS KEDOKTERAN UNIVERSITAS SEBELAS MARET Surakarta 2012

  

ABSTRAK

Devina Noviani Pramono, G.0009055, 2012. Perbedaan Kadar Caffeic Acid

Phenethyl Ester pada Propolis di Pasaran Wilayah Surakarta. Skripsi Fakultas

Kedokteran Universitas Sebelas Maret, Surakarta.

  

Latar Belakang: Propolis memiliki banyak komponen biologis dan farmakologis

  yang memberikan berbagai manfaat seperti immunomodulator, antitumor, antiinflamasi dan antioksidan. Hal ini disebabkan karena propolis disusun oleh berbagai macam komposisi kimiawi dan salah satunya adalah Caffeic Acid

  

Phenethyl Ester (CAPE). Kandungan dan komposisi kimia penyusun propolis

  dipengaruhi oleh banyak faktor di antaranya jenis tumbuhan, letak geografis, pelarut, jenis lebah, musim, serta iklim. Hal ini berakibat tidak semua merek propolis yang dijual memiliki komposisi dan kandungan kimia yang sama, begitu pula dengan propolis yang beredar di pasaran wilayah Surakarta. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui ada tidaknya perbedaan kadar CAPE pada propolis di pasaran wilayah Surakarta.

  

Metode Penelitian: Penelitian ini merupakan penelitian observasional analitik .

  Pengambilan sampel dilakukan dengan cara purposive sampling menggunakan 6 merek propolis yang dibagi menjadi 6 kelompok yakni P1, P2, P3, P4, P5, dan P6. Masing-masing kelompok dilakukan pengukuran sebanyak lima kali. Pengukuran kadar senyawa CAPE dilakukan menggunakan UV Vis spektrofotometer panjang gelombang 700 nm dengan metode Prussian Blue. Analisis data yang diperoleh dilakukan dengan menggunakan uji statistik one way Anova melalui program SPSS 17.00 for Windows program.

  

Hasil Penelitian: Rata-rata kadar CAPE pada sampel propolis adalah P1 =

  11,53080±0,078203 µ g/ml; P2 = 5,43820±0,105739 µ g/ml; P3 = 12,54140±0,051500 µ g/ml; P4 = 9,03620±0,081429 µ g/ml; P5 = 10,59260±0,043149 µ g/ml; dan P6 = 10,36600±0,133285 µg/ml dengan p < 0,001.

  

Simpulan : Terdapat perbedaan kadar CAPE pada propolis di pasaran wilayah

Surakarta.

  Kata Kunci: Propolis, kadar CAPE, UV Vis spektrofotometer, Prussian Blue

  

PRAKATA

  Segala puji syukur bagi Tuhan Yesus Kristus atas berkat dan kasih yang diberikanNya kepada penulis. Karena pertolonganNya, penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul “Perbedaan Kadar Caffeic Acid Phenethyl

  

Ester pada Propolis di Pasaran Wilayah Surakarta”. Penelitian tugas karya

  akhir ini merupakan salah satu persyaratan dalam menyelesaikan Program Sarjana Pendidikan Dokter di Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret Surakarta. Pertolongan sejati adalah dari Tuhan, yang menjadikan langit dan bumi.

  Penulis menyadari bahwa penelitian tugas karya akhir ini tidak akan berhasil tanpa adanya bantuan dari berbagai pihak, oleh karena itu dengan penuh rasa hormat ucapan terima kasih yang dalam saya berikan kepada :

  1. Prof.Dr.Zainal Arifin Adnan,dr.,Sp.PD-KR-FINASIM selaku Dekan Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret Surakarta.

  2. Muthmainah, dr., M.Kes, selaku ketua tim skripsi beserta Enny N, SH., MH dan Mas Nardi selaku tim skripsi Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret Surakarta.

  3. Diding Heri Prasetyo, dr., M.Si selaku Pembimbing Utama yang telah menyediakan waktu untuk membimbing hingga terselesainya skripsi ini.

  4. Sri Hartati, Dra., Apt., SU selaku Pembimbing Pendamping yang telah menyediakan waktu untuk membimbing hingga terselesainya skripsi ini.

  5. R.P. Andri Putranto, dr., M.Si selaku Penguji Utama yang telah memberikan banyak kritik dan saran dalam penyusunan skripsi ini.

  6. Martini, Dra., M.Si selaku Penguji Pendamping yang telah memberikan banyak kritik dan saran dalam penyusunan skripsi ini.

  7. Bapak, Ibu, kakak serta semua pihak yang secara langsung maupun tidak langsung membantu proses penelitian tugas karya akhir ini yang tidak mungkin penulis sebutkan satu persatu.

  Meskipun tulisan ini masih belum sempurna, penulis berharap skripsi ini dapat bermanfaat bagi pembaca. Saran, koreksi, dan tanggapan dari semua pihak sangat diharapkan.

  Surakarta, 26 Juli 2012 Penulis

  DAFTAR ISI

  PRAKATA ..................................................................................................................... vi DAFTAR ISI .................................................................................................................. vii DAFTAR TABEL ......................................................................................................... x DAFTAR GAMBAR ..................................................................................................... xi DAFTAR LAMPIRAN ................................................................................................. xii BAB I. PENDAHULUAN ..........................................................................................

  1 A. Latar Belakang .........................................................................................

  1 B. Perumusan Masalah .................................................................................

  3 C. Tujuan Penelitian .....................................................................................

  4 D. Manfaat Penelitian ...................................................................................

  4 BAB II. LANDASAN TEORI .....................................................................................

  5 A. Tinjauan Pustaka........................................ ............................................

  5 1. Propolis .............................................................................................

  5 a. Pengertian Umum............................................ ............................

  5 b. Kegunaan........................... ...........................................................

  6 c. Kandungan Kimia ....................... .................................................

  7 d. Efek Samping ........................................... ...................................

  9 2. Caffeic Acid Phenethyl Ester ....................................................... ...

  10 3. UV Vis Spektrofotometrik Prussian Blue .......................................

  11

  B. Kerangka Pemikiran ...............................................................................

  19 BAB IV. HASIL PENELITIAN ...................................................................................

  29 A. Simpulan .................................................................................................

  26 BABVI. SIMPULAN DAN SARAN ..........................................................................

  25 BABV. PEMBAHASAN ...........................................................................................

  24 F. Uji Post Hoc ............................................................................................

  23 E. Analisis Data One-Way Anova ..............................................................

  23 D. Uji Varians Data ......................................................................................

  22 C. Uji Normalitas .........................................................................................

  20 B. Penentuan Konsentrasi CAPE pada Sampel Propolis ..........................

  20 A. Penentuan Konsentrasi Standar CAPE .................................................

  18 J. Teknik Analisis Data ..............................................................................

  12 C. Hipotesis .................................................................................................

  17 I. Cara Kerja ...............................................................................................

  16 H. Instrumen Penelitian ...............................................................................

  14 G. Rancangan Penelitian .............................................................................

  14 F. Definisi Operasional Variabel ...............................................................

  13 E. Identifikasi Variabel Penelitian .............................................................

  13 D. Teknik Sampling .....................................................................................

  13 C. Subjek Penelitian ....................................................................................

  13 B. Lokasi Penelitian ....................................................................................

  13 A. Jenis Penelitian .......................................................................................

  12 BAB III. METODE PENELITIAN ..............................................................................

  29

  B. Saran ........................................................................................................

  29 DAFTAR PUSTAKA ...................................................................................................

  30 LAMPIRAN

BAB I PENDAHULUAN A. Latar Belakang Masalah Seiring dengan perkembangan jaman, penggunaan obat herbal pun

  makin marak di kalangan masyarakat. Obat herbal telah diterima secara luas hampir diseluruh negara di dunia. Menurut WHO, negara- negara di Afrika, Asia dan Amerika Latin menggunakan obat herbal sebagai pelengkap pengobatan primer. Bahkan di Afrika, sebanyak 80% dari populasi telah menggunakan obat herbal sebagai pengobatan primer (WHO, 2003). Faktor pendorong terjadinya peningkatan penggunaan obat herbal di negara maju adalah usia harapan hidup yang lebih panjang pada saat prevalensi penyakit kronik meningkat dan adanya kegagalan penggunaan obat modern untuk penyakit tertentu di antaranya kanker serta semakin luasnya akses informasi mengenai obat herbal di seluruh dunia (Sukandar, 2006).

  Salah satu contoh obat herbal yang makin banyak dikonsumsi masyarakat adalah propolis. Propolis merupakan material yang digunakan oleh lebah untuk membangun dan melindungi sarangnya, propolis merupakan substansi seperti lem yang tersusun atas resin tanaman, minyak esensial, balsam, bee waxes dan pollen ( Fokt et al., 2010). Propolis banyak digunakan dan dijual di berbagai apotik sebagai obat untuk berbagai penyakit. Produk propolis dijual dalam berbagai macam bentuk seperti kapsul, bahan campuran dalam sirup obat batuk, shampo, kondisioner, salep, lotion, lipstik, kosmetik dan pasta gigi (Fokt et al., 2010).

  Propolis memiliki banyak komponen biologis dan farmakologis yang dapat memberikan banyak manfaat seperti immunomodulator, antitumor, antiinflamasi, antioksidan, antibakterial, antiviral dan antiparasit (Sforcin et al., 2000, 2001; Gekker et al., 2005; Orsi et al., 2005, 2006a,b). Sebagai imunomodulator kandungan Caffeic Acid Phenethyl Ester (CAPE) propolis terbukti dapat menstimulasi produksi antibodi (Fischer et al., 2007). Secara in vitro propolis bekerja secara langsung melawan mikroorganisme dan secara in vivo propolis dapat menstimulasi sistem imun, dan mengaktivasi mekanisme pertahanan tubuh terhadap mikroorganisme.

  Banyak penelitian dilakukan untuk menilai kandungan kimiawi dalam propolis dan dapat disimpulkan bahwa komposisi kimiawi propolis sangat beragam dan bergantung pada flora lokal dari daerah asal produksi propolis (Marcucci, 1995; Bankova et al., 2000). Bagaimanapun juga untuk dapat secara resmi digunakan sebagai salah satu bentuk pengobatan maka diperlukan standarisasi kandungan kimiawi dari propolis yang dapat menjamin kualitas, keamanaan dan kemanjuran dari propolis tersebut.

  Dengan kepastian standardisasi akan memudahkan ilmuwan untuk menghubungkan kandungan kimiawi propolis tertentu dengan aktivitas biologis dari suatu penyakit sehingga membantu konsumen untuk dapat memperoleh manfaat propolis secara maksimal ( Bankova, 2005).

  Melihat adanya kaitan penting antara standardisasi kandungan kimiawi propolis dengan efektifitas kinerja propolis itu sendiri maka peneliti memandang pentingnya dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai perbedaan kadar kandungan CAPE pada propolis di pasaran Wilayah Surakarta. Selain itu alasan lain mengapa penelitian ini perlu dilakukan adalah karena belum adanya penelitian yang dilakukan untuk melihat seperti apakah perbedaan kadar kandungan CAPE pada propolis di pasaran Wilayah Surakarta.

  Diharapkan dengan adanya penelitian ini, dapat memberikan sumbangsih pada ilmu pengetahuan dan kesehatan pada khususnya karena melihat pada prospek propolis sebagai salah satu pilihan pengobatan herbal yang berkualitas, dengan meninjau berbagai manfaat propolis yang dapat diperoleh apabila kandungan kimiawi propolis sesuai dengan standarisasinya. Hal ini dapat membuat propolis menjadi salah satu alternatif pilihan pengobatan herbal yang berkualitas, aman dan efektif dalam mengobati berbagai macam penyakit. Semoga hasil penelitian ini dapat menjadi suatu dasar pertimbangan untuk memilih propolis sebagai suatu bentuk pengobatan herbal.

B. Perumusan Masalah

  Berdasarkan uraian dalam latar belakang masalah tersebut di atas, dapat dirumuskan masalah pada penelitian ini adalah sebagai berikut: Bagaimanakah perbedaan kadar Caffeic Acid Phenetyl Ester (CAPE) pada propolis di pasaran Wilayah Surakarta?

  C. Tujuan Penelitian

  Penelitian ini mempunyai tujuan sebagai berikut: Untuk mengetahui perbedaan kadar Caffeic Acid Phenetyl Ester (CAPE) pada propolis di pasaran Wilayah Surakarta.

  D. Manfaat Penelitian

  1. Manfaat Teoritis Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi ilmiah yang lebih mendalam mengenai perbedaan kadar Caffeic Acid Phenetyl Ester (CAPE) pada propolis di pasaran Wilayah Surakarta.

  2. Manfaat Aplikatif Penelitian ini diharapkan dapat menjadi awal dari pengembangan penelitian lebih lanjut mengenai perbedaan kadar Caffeic Acid Phenetyl

  Ester (CAPE) pada propolis di pasaran Wilayah Surakarta.

BAB II LANDASAN TEORI A. Tinjauan Pustaka 1. Propolis a. Pengertian Umum Kata propolis berasal dari bahasa Yunani, yaitu pro berarti

  sebelum dan polis berarti kota. Sehingga propolis dapat diartikan “sebelum masuk sarang lebah”, yang bermakna pelindung sarang lebah dari faktor-faktor berbahaya yang terdapat di luar sarang (Farre et al., 2004; Kolasec et al., 2004).

  Propolis merupakan substansi resin yang berbentuk lengket seperti lem sehingga disebut sebagai bee glue. Propolis dihasilkan lebah dengan cara mengumpulkan resin dari berbagai macam tumbuhan, kemudian resin ini dicampur dengan saliva yang mengandung berbagai enzim yang ada pada lebah dan lilin yang berada di dalam sarang lebah, sehingga menjadi resin yang berbeda dengan asalnya. Karena sumbernya bermacam-macam, maka warna, komposisi, dan khasiat propolis bisa bervariasi (Sabir, 2005; Bankova et al., 2000).

  Penggunaan propolis sebagai obat sebenarnya sudah dilakukan sejak lama. Bangsa Mesir menggunakan propolis untuk mengawetkan mayat. Propolis juga digunakan sebagai antiseptik dan

  cicatrizant oleh Bangsa Yunani dan Romawi. Bangsa Inca

  memanfaatkan propolis sebagai agen antipiretik. Bahkan pada abad ke-17 lembaga farmasi London mengesahkan propolis sebagai obat resmi (Castaldo dan Capasso, 2002; Bankova, 2005; Sforcin, 2007).

b. Kegunaan

  Kegunaan propolis bagi manusia antara lain adalah : 1) Membantu meningkatkan sistem kekebalan tubuh secara alami karena propolis kaya akan bioflavonoid yang dapat membantu meningkatkan produksi serta aktifitas sel-sel imun, antara lain makrofag (Orsi et al., 2000).

  2) Sebagai penetral racun karena berbagai kandungan dalam propolis dapat membersihkan polutan dan racun di dalam tubuh, sehingga metabolisme sel dapat berlangsung optimal. Beberapa penelitian telah membuktikan bahwa propolis juga dapat berfungsi sebagai antioksidan kuat, yang dapat mencegah timbulnya senyawa-senyawa radikal bebas (Kumazawa et al., 2004). Radikal bebas merupakan penyebab utama munculnya sel-sel kanker atau menimbulkan berbagai gejala penyakit akibat gangguan fisiologi sel tubuh. 3) Sebagai antivirus, antibakteri dan antifungal karena propolis sangat efektif melawan bakteri, virus dan jamur yang berbahaya bagi kesehatan tubuh seperti bakteri yang dapat menyebabkan radang tenggorokan, virus yang dapat menyebabkan flu, bakteri dan jamur yang dapat menyebabkan infeksi pada kulit, dan bahkan bakteri yang dapat menyebabkan diare (Stepanovic et al., 2003). 4) Sebagai anti peradangan karena propolis mengandung senyawa

Caffeic Acid Phenetyl Ester (CAPE) (Borrelli et al., 2002).

  5) Membantu melindungi jantung karena kemampuannya yang dapat membantu menurunkan Low Density Lipoprotein (LDL) dan trigliserida, serta meningkatkan High Density Liporotein (HDL) (Fuliang et al., 2005).

  6) Membantu mengatasi tukak lambung dengan cara mengurangi kerusakan yang terjadi pada dinding lambung, mengurangi derajat keasaman dan jumlah asam lambung yang diproduksi, serta kemampuan propolis sebagai antimikroba dapat membantu melawan aktifitas bakteri Helicobacter pylori, yaitu bakteri penyebab tukak lambung (Kosalec et al., 2004).

c. Kandungan Kimia

  Perlu diketahui bahwa komposisi kandungan senyawa yang terdapat di dalam propolis sangat bervariasi tergantung wilayahnya.

  Hali ini disebabkan lebah pekerja mengambil resin dari tumbuhan yang tersedia di sekitar sarangnya, dan tumbuhan yang ada pada tiap wilayah dapat sangat bervariasi tergantung pada kondisi geografis dan ekosistem yang ada (Kosalec et al., 2004; Bankova et al., 1999).

  Hal lain yang dapat mempengaruhi komposisi kandungan senyawa kimia pada propolis adalah waktu pengambilan propolis, iklim daerah tumbuh propolis, dan jenis lebah (Fokt et al., 2010).

  Bahan-bahan yang terkandung dalam propolis sangatlah kompleks dan lebih dari 200 komponen telah teridentifikasi.

  Penelitian yang ada mengenai komposisi kandungan yang terdapat dalam propolis juga sangat bervariasi. Namun secara garis besar hampir sama. Secara umum propolis mentah (raw propolis) terdiri dari 50% resin yang sebagian besar terdiri dari fraksi polifenol, 30% getah, 10% minyak esensial, 5% zat organik dan anorganik (Bankova, 2000).

  Jenis senyawa kimia yang terdapat pada propolis sangat kompleks. Berdasarkan analisis dengan menggunakan metode Gas

  

Chromatography-Mass Spectometry (GC-MS) terhadap propolis

  menunjukkan bahwa propolis mengandung berbagai macam senyawa yaitu asam amino, asam alifatik dan esternya, asam aromatik dan esternya, alkohol, aldehida, khalkon, dihidrokhalkon, flavanon, flavon, hidrokarbon, keton dan terpenoid (Greenaway et al., 1990). Hasil yang hampir sama juga diperoleh oleh Marcucci (1995) yang menemukan senyawa alkohol, aldehida, asam alifatik dan esternya, asam amino, asam aromatik dan esternya, flavanon, keton dan glukosa dalam propolis.

  Secara farmakologis, senyawa yang paling penting dalam propolis adalah flavonoid diikuti oleh beraneka macam phenolic dan

  aromatic . Flavonoid memiliki aktifitas biologis yang paling penting

  dalam propolis. Sekurangnya sudah ada 38 macan flavonoid sudah ditemukan di dalam proplis, antara lain galangin, kaempfrenol,

  quercetin, pinocembrin, pinostrobin dan pinobaksin. Senyawa phenolic terdiri atas cinnamyl alcohol, cinnamic acid, vanillin, benzyl alcohol, benzoic acid, caffeic acid dan ferulic acid. Secara

  keseluruhan, semua kelompok senyawa ini dilaporkan dapat memiliki aktivitas sebagai antibakteri, antifungal, antivirus, antiprotozoa, antioksidan, antiinflamasi, dan immunomodulator (Kosalec et al., 2004).

d. Efek Samping

  Menurut penelitian Kariim (2007), selama 2500 tahun penggunaan propolis oleh berbagai masyarakat dari berbagai kebudayaan tidak tercatat adanya efek negatif yang serius dari propolis. Bahkan dokter-dokter di Rusia biasa memberikan 9 gram propolis setiap harinya kepada pasien tanpa mengalami kendala. Adapun efek ringan yang sering dirasakan oleh pasien adalah mulut dan tenggorokan terasa kering setelah mengkonsumsi propolis dan kulit yang terasa hangat setelah dioleskan propolis.

  Menurut penelitian Burdock (1998), propolis terbukti tidak menimbulkan efek toksik. Pada sebagian orang mungkin muncul alergi terhadap propolis, tetapi jumlahnya jauh lebih sedikit daripada jumlah orang yang alergi terhadap madu. Propolis sebaiknya tidak digunakan kepada orang yang mempunyai riwayat alergi terhadap pollen (serbuk sari) (Menniti-Ippolito et al., 2008).

  2. Caffeic Acid Phenethyl Ester Gambar 2.1. Struktur Kimia CAPE (Hui et al., 2004).

  Caffeic Acid Phenethyl Ester (CAPE) adalah salah satu komponen

  aktif dalam ekstrak propolis yang berasal dari sarang lebah dan telah diketahui memiliki beberapa manfaat seperti antimitogenik, antikarsinogenik, antiinflamasi dan immunomodulator (Natarajan et al., 1996). CAPE adalah struktur cenderung mirip flavonoid yang merupakan senyawa utama dalam propolis, sebuah produk yang memiliki spektrum luas yang telah digunakan sebagai obat rakyat. Grunberger et al (1998) mendeskripsikan CAPE sebagai senyawa yang bertanggung jawab terhadap sifat-sifat sitostatik propolis.

  Caffeic Acid Phenethyl Ester telah menunjukkan beberapa

  aktivitas biologi dan farmakologi seperti antiinflamasi (Borreli et al., 2002; Hu et al., 2005) antikarsinogenik, imunomudulator dan antioksidan (Cicala et al., 2003). CAPE diketahui dapat menjadi inhibitor kuat bagi lipooksigenase serta bagi xantine oksidase dan dari pembentukan hidrogen peroksida (Mou-Tuan et al.,1996). CAPE juga berfungsi sebagai antitumor karena CAPE dapat menginduksi apoptosis dan secara selektif menghambat pertumbuhan sel-sel abnormal (Mou-tuan et al., 1996).

3. UV Vis Spektrofotometri Prussian Blue

  Spektrofotometri merupakan metode analisis kuantitatif yang cukup kuat dibandingkan metode lainnya. Metode spektrofotometri digunakan untuk menentukan kandungan kimiawi berdasarkan absorbsi panjang gelombang dari warna yang dihasilkan zat yang diukur berdasarkan reaksinya setelah penambahan zat lain.

  Terdapat beberapa cara untuk menganalisis komposisi fenol dalam propolis dengan metode spektrofotometrik di antaranya metode

  Folin-Ciocalteau , metode Prussian Blue dan metode o-Phenanthroline.

  Metode Folin-Ciocalteau merupakan metode yang paling stabil dari ketiga metode tersebut dan direkomendasikan untuk menganalisis propolis dengan konsentrasi fenol yang tinggi. Metode Prussian Blue merupakan metode yang cepat dan paling sensitif untuk total fenol namun metode ini tidak stabil. Sementara metode o-Phenanthroline merupakan metode yang cukup sensitif dan stabil (Gonzales, 2003).

  Pengukuran dengan metode Prussian blue dilakukan dengan cara mengunakan ekstrak air maupun ekstrak etanol propolis sebanyak 5-400 ηm ditambah dengan reagen prussian blue yaitu 400 ηm 0,0008M K

  4 (Fe)CN

  6 3 dalam larutan 0.1M HCl. Larutan

  dan 400 ηm 0.1M FeCl yang sudah jadi kemudian ditambahkan dengan aquades hingga volume akhirnya menjadi 10 ml. setelah tujuh menit absorbansi dilakukan pada 700 nm, pegukuran dinyatakan selesai apabila test strip FeCl

  3 berubah warna menjadi hijau kebiruan.

  B. Kerangka Pemikiran

  Propolis Variasi kandungan senyawa kimia propolis

  Letak geografis, jenis tumbuhan, waktu pengambilan, iklim, jenis lebah

  Variasi kadar kandungan senyawa kimia propolis Variasi kadar CAPE

  Perbedaan kadar CAPE

Gambar 2.2. Skema Kerangka Pemikiran.

  C. Hipotesis

  Hipotesis penelitian ini adalah: Ada perbedaan antara kadar Caffeic Acid Phenethyl Ester (CAPE) pada propolis di pasaran Wilayah Surakarta.

BAB III METODE PENELITIAN A. Jenis Penelitian Penelitian ini merupakan penelitian observasional analitik. B. Lokasi Penelitian Penelitian dilaksanakan di Laboratorium Biokimia Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret Surakarta. C. Subjek Penelitian Subjek yang digunakan dalam penelitian ini adalah propolis yang beredar di pasaran Wilayah Surakarta. D. Teknik Sampling Teknik sampling yang digunakan adalah purposive sampling. Sampel

  dipilih berdasarkan ciri-ciri atas sifat tertentu yang berkaitan dengan karakteristik populasi (Mochammad, 2008).

  E. Identifikasi Variabel Penelitian

  1. Variabel bebas : Propolis di pasaran Wilayah Surakarta

  2. Variabel terikat : Kadar Caffeic Acid Phenethyl Ester (CAPE).

  3. Variabel luar : Letak geografis, jenis tumbuhan, waktu pengambilan, iklim dan jenis lebah.

  F. Definisi Operasional Variabel

  1. Variabel Bebas Propolis di pasaran Wilayah Surakarta adalah Propolis yang berada di pasaran Wilayah Surakarta. Skala pengukuran variabel ini adalah nominal.

  2. Variabel Terikat Kadar Caffeic Acid Phenethyl Ester (CAPE) adalah banyaknya CAPE yang terdapat dalam propolis kemasan di pasaran Wilayah Surakarta.

  Cara mengukurnya adalah dengan menggunakan metode UV Vis Spektrofotometri Prussian Blue. Skala pengukuran variabel ini adalah rasio.

  3. Variabel luar

  a. Letak geografis Letak geografis mempengaruhi perbedaan bahan-bahan dasar dalam pembuatan propolis seperti jenis tumbuhan, iklim dan jenis lebah. b. Jenis tumbuhan Jenis tumbuhan yang berbeda dapat mempengaruhi komposisi penyusun propolis.

  c. Waktu pengambilan Waktu pengambilan propolis yang berbeda juga dapat mempengaruhi hasil akhir produk propolis.

  d. Iklim Iklim mempengaruhi perbedaan jenis tumbuhan yang merupakan bahan dasar propolis. Iklim yang beragam berarti jenis tumbuhan juga beragam sehingga menghasilkan komposisi penyusun propolis yang beragam pula.

  e. Jenis lebah Jenis lebah mempengaruhi komposisi saliva dan enzim penyusun propolis, sehingga secara tidak langsung juga mempengaruhi komposisi penyusun propolis.

G. Rancangan Penelitian Rancangan penelitian yang digunakan adalah observasional analitik.

  P1 C1 R1 P2 C2 R2 P3 C3 Dibandinngkan

  R3 N dengan uji statistik

  P4 C4 R4 P5 C5 R5 P6 C6 R6 Gambar 3.1. Skema Rancangan Penelitian.

  Keterangan: N :Propolis di pasaran Wilayah Surakarta

  P1 : Propolis 1 P2 : Propolis 2 P3 : Propolis 3 P4 : Propolis 4 P5 : Propolis 5 P6 : Propolis 6 C1 : Kadar CAPE propolis 1 C2 : Kadar CAPE propolis 2 C3 : Kadar CAPE propolis 3 C4 : Kadar CAPE propolis 4

  C5 : Kadar CAPE propolis 5 C6 : Kadar CAPE propolis 6 R1 : Rata-rata kadar CAPE propolis 1 R2 : Rata-rata kadar CAPE propolis 2 R3 : Rata-rata kadar CAPE propolis 3 R4 : Rata-rata kadar CAPE propolis 4 R5 : Rata-rata kadar CAPE propolis 5 R6 : Rata-rata kadar CAPE propolis 6 H.

   Instrumen Penelitian

  1. Alat

  a) labu takar 10 mL, 100 mL, 250 mL; b) erlenmeyer tutup 100 mL, 250 mL; c) gelas beaker 250 mL; d) pipet tetes; e) pipet mikro 0-10, 10-100, 100-1000 µ L; f) botol timbang; g) satu set spektrofotometer; h) kertas saring; i) kain lap; j) sabun cuci; k) sikat tabung.

  2. Bahan

• 3
• 3

  a) CAPE (1.10

  s.d 2,98.10

  M); b) asam asetat; c) etanol 80%; d)

  aquabidest ; e) HCl 0,1 M; f) K

  3 Fe(CN) 6 0,0008M/0,1M HCl; g) FeCl

  3

  0,1M/0,1M HCl; h) sampel propolis (propolis 1, propolis 2, propolis 3, propolis 4, propolis 5 dan propolis 6).

I. Cara Kerja 1. Menentukan standar CAPE (284,31).

  2. Membagi sampel propolis menjadi enam kelompok yaitu: propolis 1 (P1), propolis 2 (P2), propolis 3 (P3), propolis 4 (P6), propolis 5 (P5) dan propolis 6 (P6).

  3. Masing-masing propolis diambil 10 µL lalu diencerkan dengan etanol 80% menjadi 10 mL. Selanjutnya larutan diambil 100 µL dan ditambahkan 400 µL K

  3 Fe(CN) 6 0,0008M/0,1M HCl dan 400 µ L FeCl

  3

  0,1M/0,1M HCl setelah itu dikocok dan tunggu selama 7 menit kemudian diamati absorbansi warna pada UV Vis spektrofotometer dengan panjang gelombang 700 nm.

  4. Ulangi langkah ke 3 sebanyak lima kali untuk tiap sampel propolis.

  5. Nilai rata-rata kadar CAPE tiap sampel propolis kemudian dihitung dengan menggunakan persamaan regresi linear yang diperoleh dari kurva kalibrasi CAPE standar.

  6. Kadar CAPE antara propolis 1 (P1), propolis 2 (P2), propolis 3 (P3), propolis 4 (P6), propolis 5 (P5) dan propolis 6 (P6) kemudian dibandingkan dengan menggunakan uji statistik.

  J. Teknik Analisis Data

  Data yang diperoleh akan diuji menggunakan uji statistik One-Way

  Analysis of Variance (ANOVA). Jika terdapat perbedaan yang bermakna,

  maka dilanjutkan dengan uji Post Hoc Multiple Comparisons. Derajat kemaknaan yang digunakan adalah p < 0,001. Jika ternyata data yang diperoleh tidak memenuhi syarat uji statistik parametrik One-Way ANOVA, maka akan digunakan uji statistik non parametrik yaitu Kruskal Wallis (Dahlan, 2007). Untuk memudahkan analisis data tersebut digunakan program komputer Statistical Product and Service Solution (SPSS) 17.0 for

  windows .

BAB IV HASIL PENELITIAN A. Penentuan Konsentrasi Standar CAPE Penelitian mengenai perbedaan kadar CAPE pada propolis di pasaran Wilayah Surakarta ini dilakukan pada bulan Mei 2012. Penelitian ini

  dilakukan dengan menggunakan 6 sampel propolis yang beredar di berbagai Wilayah di Surakarta. Untuk dapat menentukan kadar CAPE pada sampel propolis, maka dilakukan penentuan kadar konsentrasi CAPE standar terlebih dahulu.

  Analisis kandungan CAPE pada masing-masing sampel propolis yang digunakan dalam penelitian ini dilakukan dengan menggunakan larutan standar CAPE dengan konsentrasi 0.0, 2.5, 5.0, 7.5, 10.0, 12.5 µL/ml. Untuk melakukan analisis CAPE, terlebih dahulu dilakukan pengukuran nilai absorbansi pada larutan standar yang akan digunakan sebagai pembanding dalam penelitian. Pengukuran absorbansi dilakukan dengan menggunakan UV Vis spektrofotometer dengan panjang gelombang 700 nm (Tabel 1). Warna yang dihasilkan dari larutan standar CAPE adalah hijau kebiruan. Dari hasil pengukuran nilai absorbansi CAPE standar maka didapatkan nilai konsentrasi CAPE standar sebagai berikut:

Tabel 4.1. Pengukuran Absorbansi Larutan Standar CAPE pada UV Vis Spektrofotometer Panjang Gelombang 700 nm.

  Konsentrasi (µ g/ml) Absorbansi 0,000

  2,5 0,038 5,0 0,083 7,5 0,133

  10,0 0,192 12,5 0,236

  0.25 y = 0.0193x - 0.0072 R² = 0.996

0.2 A

  B S

0.15 O

  R B A

0.1 N

  S

  I

  0.05

  2

  4

  6

  8

  10

  12

  14

• 0.05

  KONSENTRASI (µg/ml)

Gambar 4.1. Kurva Kalibrasi CAPE Standar dalam Reagen Prussian Blue pada UV Vis Spektrofotometer Panjang Gelombang 700 nm.

  Berdasarkan Gambar 5 dapat dilihat bahwa kurva kalibrasi dengan persamaan regresi untuk absorbansi CAPE sebesar y = 0,019x – 0,0073.

  Larutan standar senyawa CAPE diperoleh hubungan yang linier antara nilai absorbansi dengan nilai konsentrasi pada pengukuran yang ditunjukkan dengan niai koefisien korelasi sebesar 0,996. Nilai (R) yang mendekati 1 menunjukkan bahwa persamaan regresi tersebut adalah linier.

B. Penentuan Konsentrasi CAPE Pada Sampel Propolis

  Persamaan kurva kalibrasi CAPE standar dapat digunakan sebagai pembanding untuk menentukan kadar senyawa CAPE pada ekstrak sampel.

  Pada penelitian ini kadar kandungan CAPE total ditentukan berdasarkan metode UV Vis spektrofotometri prussian blue, dimana setelah ekstrak sampel direaksikan dengan K

3 Fe(CN) 6 dan FeCl 3 kemudian diencerkan dengan etanol 80% didapatkan larutan ekstrak sampel bewarna kuning.

  Setelah didiamkan selama 7 menit kemudian diukur absorbansi larutan pada spektrofotometer UV dengan panjang gelombang 700 nm. Dari hasil pengukuran maka didapatkan rata-rata konsentrasi senyawa CAPE pada sampel propolis di pasaran Wilayah Surakarta sebagai berikut:

Tabel 4.2. Rata-Rata Konsentrasi CAPE pada Sampel Propolis.

  Propolis Rata-rata konsentrasi CAPE (µg/ml) 1 11,53080 ± 0,078203 2 5,43820 ± 0,105739 3 12,54140 ± 0,051500 4 9,03620 ± 0,081429 5 10,59260 ± 0,043149 6 10,36600 ± 0,133285

  C. Uji Normalitas

  Setelah diketahui konsentrasi CAPE pada sampel propolis, maka dilakukan uji normalitas untuk mengetahui distribusi sampel yang digunakan.

  Dari hasil uji normalitas maka didapatkan hasil sebagai berikut: Tabel 4.3. Hasil Uji Normalitas Sampel Propolis.

  Produk Propolis

  Kolmogorov-Smirnov Shapiro-Wilk Statistic df Sig. Statistic df Sig. Kadar CAPE 1 0.255

  5 0.200 0.913 5 0.487 2 0.262 5 0.200 0.862 5 0.235 3 0.242 5 0.200 0.821 5 0.118 4 0.138 5 0.200 0.987 5 0.967 5 0.231 5 0.200 0.881 5 0.315 6 0.221 5 0.200 0.916 5 0.503

  Uji normalitas yang digunakan adalah uji Shapiro-Wilk dimana didapatkan nilai p > 0,05. Dari uji normalitas ini, maka disimpulkan bahwa distribusi sampel propolis yang digunakan dalam penelitian ini adalah normal.

  D. Uji Varians Data

  Setelah dilakukan uji normalitas, maka juga perlu dilakukan uji varians data untuk menilai varian data pada penelitian ini apakah sudah sama ataukah belum. Dari hasil uji varian data maka didapatkan hasil sebagai berikut:

Tabel 4.4. Hasil Uji Varians Data Sampel Propolis.

  Levene Statistic df1 df2 Sig.

  2.023

  5 24 0.112 Hasil uji varians data menunjukkan bahwa nilai p > 0,05 sehingga dapat disimpulkan bahwa varian data dalam penelitian adalah sama.

E. Analisis Data One-Way Anova

  Setelah diketahui bahwa distribusi sampel propolis dalam penelitian ini normal dan varians datanya sama, maka dapat dilanjutkan analisis data dengan menggunakan One-Way Anova. Analisis data One-Way Anova maka didapatkan hasil:

Tabel 4.5. Hasil Analisis One-Way Anova Sampel Propolis.

  Sum of Squares df Mean Square F Sig. Between 154.927 5 30.985 4023.527 0.000

  Groups Within 0.185 24 0.008

  Groups Total 155.111

  29 Analisis data One-Way Anova menunjukkan bahwa nilai p < 0,001 yang menandakan bahwa terdapat perbedaan bermakna pada paling tidak dua kelompok data dalam pengukuran kadar CAPE sampel propolis.

F. Uji Post Hoc

  Dari analisis data menggunakan One-Way Anova, maka diketahui terdapat perbedaan bermakna pada kelompok data dalam pengukuran kadar CAPE sampel propolis. Untuk mengetahui pada kelompok mana sajakah terdapat perbedaan yang bermakna tersebut maka perlu dilakukan uji Post

  Hoc (Lampiran 8). Setelah dilakukan uji Post Hoc didapatkan nilai p < 0,05

  dan interval kepercayaan 95% tidak tercakup angka 0. Hasil uji Post Hoc ini menunjukkan bahwa terdapat perbedaan kadar CAPE yang bermakna di semua kelompok sampel propolis yang digunakan dalam penelitian.

BAB V PEMBAHASAN Penelitian mengenai perbedaan kadar CAPE pada propolis di pasaran Wilayah Surakarta ini, dilakukan dengan menggunakan 6 sampel propolis yang

  beredar di berbagai Wilayah Surakarta. Hasil dari penelitian ini adalah bahwa didapatkan perbedaan kadar CAPE yang bermakna pada semua kelompok sampel propolis yang digunakan. Berdasarkan penelitian ini dapat disimpulkan bahwa terdapat perbedaan kadar CAPE pada propolis di pasaran Wilayah Surakarta.

  Perbedaan kadar CAPE pada propolis di pasaran Wilayah Surakarta ini disebabkan karena adanya perbedaan dalam hal letak geografis, jenis tumbuhan, waktu pengambilan, iklim dan jenis lebah yang terlibat dalam proses produksi propolis. Perbedaan letak geografis pada sampel propolis yang digunakan, ditunjukkan dari asal sampel propolis itu sendiri. Dalam penelitian ini, sampel propolis yang digunakan berasal dari Indonesia, Inggris, New Zealand, Australia dan Brazil. Letak Geografis dapat mempengaruhi komposisi bahan-bahan dasar penyusun propolis seperti jenis tumbuhan dan jenis lebah. Bahan-bahan penyusun propolis terdiri dari resin berbagai tumbuhan sehingga jenis tumbuhan yang berbeda juga dapat mempengaruhi komposisi propolis. Jenis lebah mempengaruhi komposisi saliva dan enzim penyusun propolis, sehingga secara tidak langsung juga mempengaruhi komposisi penyusun propolis. Letak Geografis yang berbeda juga mempengaruhi iklim daerah produksi propolis. Iklim yang beragam berarti jenis tumbuhan juga berbeda sehingga menghasilkan komposisi penyusun propolis yang beragam pula. Waktu pengambilan propolis yang berbeda juga dapat mempengaruhi hasil akhir produk propolis.

  Penelitian ini sesuai dengan penelitian Bankova (2005) yang menyatakan bahwa propolis tersusun atas berbagai macam senyawa kimiawi yang beragam dan bergantung pada flora lokal tempat dimana propolis diproduksi. Sehingga, secara tidak langsung letak geografis juga mempengaruhi komposisi penyusun propolis. Juga dalam penelitian ini dipaparkan bahwa diperlukan adanya standarisasi senyawa penyusun propolis sehingga dapat dilakukan kontrol kualitas produksi propolis.

  Dengan adanya penelitian mengenai perbedaan kadar CAPE pada propolis di pasaran Wilayah Surakarta ini, dapat memberikan gambaran pada masyarakat mengenai begitu kompleksnya propolis ditinjau dari segi bahan penyusun dan komponen kimiawinya. Selain itu masyarakat juga dapat mengetahui bahwa keberagaman bahan penyusun propolis dapat mempengaruhi komposisi kimia penyusun propolis dimana dengan adanya perbedaan komposisi senyawa kimia pada propolis, maka akan memberikan hasil akhir produk propolis yang beragam pula. Oleh karena itu, penelitian ini dapat dijadikan sebagai bahan pertimbangan bagi masyarakat dalam memilih produk propolis sehingga dapat diperoleh manfaat yang maksimal dari propolis.

  Penelitian ini masih memiliki berbagai kekurangan antara lain populasi penelitian yang sempit. Selain itu kurang banyaknya sampel penelitian yang digunakan juga menjadi salah satu kelemahan dalam penelitian ini. Mengingat begitu banyaknya zat aktif penyusun propolis maka kekurangan lain dari penelitian ini adalah kurang beragamnya variabel penelitian yang diteliti.

BAB VI SIMPULAN DAN SARAN A. Simpulan Terdapat perbedaan yang bermakna dari kadar CAPE pada propolis di Pasaran Wilayah Surakarta. B. Saran

  1. Bagi penelitian selanjutnya diharapkan dapat dilakukan dalam populasi yang lebih luas dan jumlah sampel yang lebih banyak.

  2. Diharapkan dilakukan pengukuran perbedaan dari kadar senyawa penyusun propolis yang lainnya.