3.2.10 Penetapan Kadar Abu Yang Tidak Larut Dalam Asam
Abu yang telah diperoleh dalam penetapan kadar abu total dididihkan dalam 25 ml asam klorida 2 N selama 5 menit, bagian yang tidak larut dalam
asam dikumpulkan, disaring melalui kertas saring bebas abu dan dicuci dengan air panas. Residu dan kertas saring dipijar pada suhu 600
o
C sampai bobot tetap, kemudian didinginkan dan ditimbang. Kadar abu yang tidak larut dalam asam
dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan WHO, 1992.
3.3 Pembuatan fraksi n-heksana, etilasetat dan etanol rumput laut coklat
Sargassum polycystum C, Agardh secara perkolasi
berkesinambungan
Pembuatan fraksi dilakukan secara perkolasi berkesinambungan
menggunakan tiga pelarut. Cara kerja: sebanyak 400 gram serbuk simplisia dimasukkan ke dalam bejana tertutup, dituangi cairan penyari n-heksana sampai
semua simplisia terendam sempurna dan dibiarkan sekurang-kurangnya selama 3 jam. Pindahkan massa sedikit demi sedikit ke dalam perkolator sambil tiap kali
ditekan hati-hati, dituangi cairan penyari secukupnya sampai cairan mulai menetes dan di atas simplisia masih terdapat selapis cairan penyari, tutup perkolator dan
biarkan selama 24 jam. Biarkan cairan menetes dengan kecepatan 1 ml per menit, ditambahkan berulang-ulang cairan penyari secukupnya hingga selalu terdapat
selapis cairan penyari di atas simplisia. Perkolasi dihentikan hingga bebepara tetes perkolat yang keluar terakhir diuapkan tidak meninggalkan sisa. Kemudian
ampasnya di perkolasi kembali dengan menggunakan cairan penyari etilasetat dengan prosedur perkolasi yang sama. Setelah perkolat etilasetat di peroleh,
ampasnya di perkolasi kembali dengan menggunakan cairan penyari etanol dengan menggunakan prosedur perkolasi yg sama. Masing-masing perkolat yang
diperoleh dipekatkan dengan alat penguap rotary evaporator dan dikeringbekukan dengan freeze dryer. Depkes RI, 1979.
3.4 Sterilisasi Alat
Alat-alat yang digunakan dalam uji aktivitas antibakteri ini, disterilkan terlebih dahulu sebelum dipakai. Alat-alat gelas disterilkan didalam oven pada
suhu 170°C selama 1 jam. Media disterilkan di autoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit. Jarum ose dan pinset dengan lampu bunsen Lay,1994.
3,5 Pembuatan Media 3.5.1
Media Nutrient Agar NA
Komposisi : Bacto – Beef extract
3 g Bacto peptone
5 g Bacto – Agar
15 g Cara Pembuatan :
Sebanyak 23 g sediaan NA ditimbang, disuspensikan kedalam air suling 1000 ml, lalu dipanaskan sampai larut sempurna. Kemudian media dimasukkan
kedalam erlenmeyer dan disterilkan di dalam autoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit Difco,1977.
3.5.2 Media Mueller Hinton Agar MHA
Komposisi: Beef infusion form
300 g Casein hydrolysate
17,5 g Starch
1,5 g Agar
17 g
Cara pembuatan: Sebanyak 38 gram sediaan MHA ditimbang kemudian disuspensikan
dalam erlenmeyer dengan air suling yang ditambahkan sedikit demi sedikit hingga 1000 ml, dipanaskan hingga mendidih sambil sekali-kali diaduk sampai terbentuk
larutan jernih. Tutup erlenmeyer dengan kapas yang dilapisi aluminium foil. Disterilkan di dalam autoklaf pada suhu 121
o
C tekanan 2 atm selama 15 menit.
3.5.3Larutan NaCl 0,9
Komposisi : Natrium Klorida 0,9 g
Air suling ad 100 ml
Cara Pembuatan : Natrium klorida ditimbang sebanyak 0,9 g lalu dilarutkan dalam air suling
steril sedikit demi sedikit dalam erlenmeyer 100 ml sampai larut sempurna, disterilkan di autoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit Sonnenwirth,1980.
3.5.4 Larutan Standar Mc Farland 0,5
Komposisi: BaCl
2
1,175 bv 0,5 ml
H
2
SO
4
1 vv 99,5 ml
Cara pembuatan: Campurkan kedua larutan dan diaduk hingga homogen Vandepitte et al,
1991.
3.6 Pembuatan Agar Miring
Kedalam tabung reaksi dimasukkan 10 ml media Nutrien agar yang sudah dicairkan, kemudian diletakkan dengan posisi miring dengan kemiringan lebih
kurang 45
o
C, ditutup mulut tabung reaksi dengan kapasdan dibiarkan memadat.
3.7 Pembuatan Stok Kultur Bakteri
Koloni bakteri diambil dengan menggunakan jarum ose steril, lalu ditanam pada media nutrient agar miring dengan cara menggores. Kemudian diinkubasi
dalam inkubator pada suhu 35-37
o
C selama 18-24 jam Ditjen POM, 1995.
3.8 Penyiapan Inokulum Bakteri
Koloni bakteri diambil dari stok kultur dengan jarum ose steril kemudian disuspensikan ke dalam 10 ml NaCl 0,9 steril, kemudian dihomogenkan hingga
diperoleh kekeruhan yang sama dengan standar Mc Farland konsentrasi 10
8
CFUml. Di pipet 0,1 ml inokulum dan ditambahkan larutan NaCl 0,9 steril sehingga diperoleh konsentrasi 10
6
CFUml kemudian didiamkan didalam inkubator selama 3 jam Ditjen POM, 1995.
3.9 Pembuatan larutan uji fraksi n-heksana, etilasetat dan etanol dengan berbagai konsentrasi.
Kategori