Aktivitas Antibakteri Hasil Hidrolisis Enzimatik Minyak Kelapa Murni Dan Minyak Inti Sawit Terhadap Staphylococcus aureus Dan Salmonella thypi Serta Escherichia coli
Lampiran1. Bagan alur kerja penelitian
Minyak yang diuji:
1. VCO
2. PKO
Dihidrolisis dengan enzim lipase
Diekstraksi dengan n-heksan
Lapisan air
Lapisan n-heksan
Dicuci 2 kali
dengan-heksan
Lapisan air
Lapisan n-heksan
Lapisan n-heksan: asam lemak bebas,
monogliserida dan minyak
Penguapan n-heksan
Asam lemak bebas,
monogliserida dan minyak
Hasil hidrolisis
dengan bilangan
asam tertinggi
Dianalisis asam
lemak bebas
dengan penentuan
bilangan asam
Diujiaktivitas
antibakteri
Aktivitas
antibakteri
58
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 2. Gambar kemasan VCO yang digunakan
59
Universitas Sumatera Utara
Lampiran
L
3.
3 Gambar kemasan PKO
O yang digunnakan
Lampiran
L
4.
4 Gambar kemasan Buff
ffer Tris-HCll dan Lipozyyme TL IM
60
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 5. Perhitungan bilangan asam VCO
Masa
Inkubasi
(jam)
VCO
non
hidrolisis
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
n
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
Berat
Volume
Minyak BM
N
Titrasi
Bil.
(gr)
NaOH NaOH
(ml)
Asam
Rerata
5,0328
40
0,1096
0,35
0,3049
5,0082
40
0,1022
0,4
0,3264
0,32636
4,9741
40
0,1031
0,4
0,3315
4,9429
40
0,1096
6,75
5,9868
5,1682
40
0,1022
6,05
4,7834
4,78338
5,0841
40
0,1031
5,9
4,7845
4,9809
40
0,1096
16,0 14,0826
5,067
40
0,1022
15,9 12,8223 12,82226
5,0424
40
0,1031
12,1
9,8933
5,0062
40
0,1096
34,4 30,1246
5,0892
40
0,1022
37,4 30,0290 30,02897
5,0175
40
0,1031
32,05 26,3352
5,0764
40
0,1096
54,8 47,3255
5,6484
40
0,1022
66,7 48,2524 48,25239
5,1161
40
0,1031
53,6 43,1938
5,0106
40
0,1096 103,85 90,8631
5,0278
40
0,1022
110,7 89,9680 89,96799
5,0351
40
0,1031
113,4 92,8539
5,0197
40
0,1096 131,25 114,6284
4,9498
40
0,1022 139,95 115,5324 115,53236
4,9956
40
0,1031 137,65 113,6014
5,1101
40
0,1096
152,4 130,7453
4,9436
40
0,1022
159,3 131,6712 131,67122
5,087
40
0,1031 164,75 133,5239
5,0362
40
0,1096
160,5 139,7149
5,079
40
0,1022 176,45 141,9586 141,95865
5,0707
40
0,1031
174,5 141,8805
5,1048
40
0,1096
163,6 140,4996
5,2118
40
0,1022 181,85 142,5752 142,57519
5,1059
40
0,1031 176,75 142,7192
5,0814
40
0,1096
163,5 141,0603
5,063
40
0,1022
177,9 143,5775 143,57751
5,0315
40
0,1031
175,5 143,8053
61
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 6. Perhitungan bilangan asam PKO
Masa
Inkubasi
(jam)
PKO
non
hidrolisis
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
n
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
Berat
Volume
Minyak BM
N
Titrasi
Bil.
(gr)
NaOH NaOH
(ml)
Asam
Rerata
5,0328
40
0,1096
0,35
0,3050
5,0769
40
0,1022
0,3
0,2415
0,2415
5,0769
40
0,1031
0,3
0,2436
4,9429
40
0,1096
6,25
5,5448
5,0532
40
0,1022
5,35
4,3262
4,3262
5,0532
40
0,1031
5,3
4,3242
4,9809
40
0,1096
17,9 15,7592
5,0522
40
0,1022
12,65 10,2312 10,2312
5,1103
40
0,1031
14,85 11,9805
5,1532
40
0,1096
26,3 22,3804
5,0837
40
0,1022
27,05 21,7423 21,7423
5,0043
40
0,1031
23,95 19,7314
5,0273
40
0,1096
43,25 37,7260
5,0239
40
0,1022
43,95 35,7467 35,7467
5,1097
40
0,1031
44,1 35,5827
5,0113
40
0,1096
96,55 84,4873
4,9992
40
0,1022
95,95 78,4265 78,4265
5,0164
40
0,1031
99,8 82,0226
5,0437
40
0,1096
122,1 106,1588
5,0267
40
0,1022
133,7 108,6843 108,6843
5,0869
40
0,1031 129,45 104,9166
5,049
40
0,1096 146,75 127,4565
5,0291
40
0,1022
153,9 125,0451 125,0451
5,1125
40
0,1031
155,3 125,2372
5,0782
40
0,1096
157,9 136,3521
5,0804
40
0,1022
169,2 136,0883 136,0883
5,0568
40
0,1031 164,68 134,2642
5,0947
40
0,1096 159,15 136,9864
5,077
40
0,1022
170,4 137,1453 137,1453
5,077
40
0,1031
166,9 135,5328
5,1006
40
0,1096 159,65 137,2578
5,0135
40
0,1022 168,55 137,3745 137,3745
5,0135
40
0,1031
165,6 136,1804
62
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 7. Hasil uji Anova bilangan asam hasil hidrolisis enzimatisVCO dan
PKO menurut masa inkubasi
F
F
JK
DB
KT
Sig.
hitung
tabel
VCO Perlakuan 107370,266
10 10737,027 4275,182 2,297 0,00
PKO
Galat
55,253
22
Total
107425.518
32
Perlakuan 100981,586
10
Galat
58,229
22
Total
101039,815
32
2,511
0
10098,159 3815,252
2,647
2,297
0,00
0
Lampiran 8. Hasil uji Post Hoc (metode Duncan) bilangan asam hasil hidrolisis
enzimatis VCO
63
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 9. Hasil uji Post Hoc (metode Duncan) bilangan asam hasil hidrolisis
enzimatis PKO
Lampiran 10. Hasil uji Anova bilangan asam hasil hidrolisis enzimatis antara
VCO dan PKO menurut kenaikan bilangan asam
JK
208788,723
DB
21
KT
9942,320
Galat
113,458
44
2,5979
Total
208902,180
65
Perlakuan
F hitung
3855,735
F tabel
Sig.
1,756 0,000
Lampiran 11. Hasil uji Anova zone hambat zat uji terhadap S. aureus
JK
1287,517
DB
11
KT
117,047
Galat
4,550
24
190
Total
1292,067
35
Perlakuan
F hitung
617,391
F tabel
Sig.
2,095 0,000
64
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 12. Hasil uji Post Hoc (metode Duncan) zone hambat zat uji terhadap
S. aureus
Duncan
a
Uji
Subset for alpha = 0.05
N
1
2
3
4
5
PKO
3
VCO
3 10.0167
P25
3
V25
3
13.5667
P50
3
13.7333
V50
3
14.5667
P75
3
15.0167
V75
3
15.9167
P100
3
16.3167
V100
3
Tetrasiklin
3
Kloramfenikol
3
Sig.
6
7
8
9.6000
12.7500
17.1667
26.4167
30.8000
.253
1.000
.643
.218
.272
1.000
1.000
1.000
Lampiran 13. Hasil uji Anova zone hambat zat uji terhadap S. thypi
JK
DB
KT
F hitung
F tabel
192,080
300,646
2,095
Perlakuan
2112,876
11
Sig.
0,000
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000.
Galat
15,333
24
Total
2128,210
35
0,639
65
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 14. Hasil uji Post Hoc (metode Duncan) zone hambat zat uji terhadap
S. thypi
Duncan
a
Uji
Subset for alpha = 0.05
N
1
2
3
4
5
6
7
PKO
3
8.4333
VCO
3
9.0667 9.0667
P25
3
9.2000 9.2000
P50
3
V25
3
10.5333 10.5333 10.5333
P75
3
11.3333 11.3333
V50
3
P100
3
12.8333 12.8333
V75
3
13.0000 13.0000
V100
3
13.7667
Tetrasiklin
3
Kloramfenikol
3
Sig.
8
9
9.2000
10.1000 10.1000 10.1000
11.8000 11.8000
27.2667
34.2333
.278
.147
.064
.085
.078
.094
.189
1.000
1.000
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000.
Lampiran 15. Hasil uji Anova zone hambat zat uji terhadap E. coli
JK
DB
KT
F hitung F tabel
198,780
700,034
2,095
Perlakuan
2186,585
11
Galat
6,815
24
Total
2193,400
35
Sig.
0,000
0,284
66
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 16. Hasil uji Post Hoc (metode Duncan) zone hambat zat uji terhadap
E. coli
Duncan
a
ZatUji
Subset for alpha = 0.05
N
1
2
3
4
5
6
PKO
3 7.8333
VCO
3 8.1667
P25
3
9.0667
V25
3
9.1333
V50
3
10.0500
P50
3
10.4667
P75
3
11.4000
V75
3
11.9333 11.9333
P100
3
12.6333 12.6333
V100
3
13.1333
Tetrasiklin
3
Kloramfenikol
3
Sig.
7
8
29.4333
32.1500
.451
.880
.348
.232
.121
.262
1.000
1.000
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000.
67
Universitas Sumatera Utara
Lampiran
L
17.
1 Gambar tabung
t
penyyimpanan beads dari massing-masing strain
bakteri
Lampiran
L
18.
1 Gambar Mc.
M Farlandd Turbidity Standar
S
0,5
68
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 19.Gambar kemasan Mueller-Hinton Agar
Lampiran 20. Gambar kemasan Nutrient Agar dan Nutrient Broth
69
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 21. Gambar zone hambat dengan menggunakan etanol sebagai pelarut
zat uji
Lampiran 22. Gambar zone hambat E. coli dilihat dari jarak dekat
70
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 23. Letter of Acceptance dari International Journal of PharmTech
Research
71
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 24. Signed Undertaking untuk International Journal of PharmTech
Research
72
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 25. Bukti pengiriman biaya publikasi melalui Western Union
73
Universitas Sumatera Utara
Minyak yang diuji:
1. VCO
2. PKO
Dihidrolisis dengan enzim lipase
Diekstraksi dengan n-heksan
Lapisan air
Lapisan n-heksan
Dicuci 2 kali
dengan-heksan
Lapisan air
Lapisan n-heksan
Lapisan n-heksan: asam lemak bebas,
monogliserida dan minyak
Penguapan n-heksan
Asam lemak bebas,
monogliserida dan minyak
Hasil hidrolisis
dengan bilangan
asam tertinggi
Dianalisis asam
lemak bebas
dengan penentuan
bilangan asam
Diujiaktivitas
antibakteri
Aktivitas
antibakteri
58
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 2. Gambar kemasan VCO yang digunakan
59
Universitas Sumatera Utara
Lampiran
L
3.
3 Gambar kemasan PKO
O yang digunnakan
Lampiran
L
4.
4 Gambar kemasan Buff
ffer Tris-HCll dan Lipozyyme TL IM
60
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 5. Perhitungan bilangan asam VCO
Masa
Inkubasi
(jam)
VCO
non
hidrolisis
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
n
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
Berat
Volume
Minyak BM
N
Titrasi
Bil.
(gr)
NaOH NaOH
(ml)
Asam
Rerata
5,0328
40
0,1096
0,35
0,3049
5,0082
40
0,1022
0,4
0,3264
0,32636
4,9741
40
0,1031
0,4
0,3315
4,9429
40
0,1096
6,75
5,9868
5,1682
40
0,1022
6,05
4,7834
4,78338
5,0841
40
0,1031
5,9
4,7845
4,9809
40
0,1096
16,0 14,0826
5,067
40
0,1022
15,9 12,8223 12,82226
5,0424
40
0,1031
12,1
9,8933
5,0062
40
0,1096
34,4 30,1246
5,0892
40
0,1022
37,4 30,0290 30,02897
5,0175
40
0,1031
32,05 26,3352
5,0764
40
0,1096
54,8 47,3255
5,6484
40
0,1022
66,7 48,2524 48,25239
5,1161
40
0,1031
53,6 43,1938
5,0106
40
0,1096 103,85 90,8631
5,0278
40
0,1022
110,7 89,9680 89,96799
5,0351
40
0,1031
113,4 92,8539
5,0197
40
0,1096 131,25 114,6284
4,9498
40
0,1022 139,95 115,5324 115,53236
4,9956
40
0,1031 137,65 113,6014
5,1101
40
0,1096
152,4 130,7453
4,9436
40
0,1022
159,3 131,6712 131,67122
5,087
40
0,1031 164,75 133,5239
5,0362
40
0,1096
160,5 139,7149
5,079
40
0,1022 176,45 141,9586 141,95865
5,0707
40
0,1031
174,5 141,8805
5,1048
40
0,1096
163,6 140,4996
5,2118
40
0,1022 181,85 142,5752 142,57519
5,1059
40
0,1031 176,75 142,7192
5,0814
40
0,1096
163,5 141,0603
5,063
40
0,1022
177,9 143,5775 143,57751
5,0315
40
0,1031
175,5 143,8053
61
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 6. Perhitungan bilangan asam PKO
Masa
Inkubasi
(jam)
PKO
non
hidrolisis
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
n
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
Berat
Volume
Minyak BM
N
Titrasi
Bil.
(gr)
NaOH NaOH
(ml)
Asam
Rerata
5,0328
40
0,1096
0,35
0,3050
5,0769
40
0,1022
0,3
0,2415
0,2415
5,0769
40
0,1031
0,3
0,2436
4,9429
40
0,1096
6,25
5,5448
5,0532
40
0,1022
5,35
4,3262
4,3262
5,0532
40
0,1031
5,3
4,3242
4,9809
40
0,1096
17,9 15,7592
5,0522
40
0,1022
12,65 10,2312 10,2312
5,1103
40
0,1031
14,85 11,9805
5,1532
40
0,1096
26,3 22,3804
5,0837
40
0,1022
27,05 21,7423 21,7423
5,0043
40
0,1031
23,95 19,7314
5,0273
40
0,1096
43,25 37,7260
5,0239
40
0,1022
43,95 35,7467 35,7467
5,1097
40
0,1031
44,1 35,5827
5,0113
40
0,1096
96,55 84,4873
4,9992
40
0,1022
95,95 78,4265 78,4265
5,0164
40
0,1031
99,8 82,0226
5,0437
40
0,1096
122,1 106,1588
5,0267
40
0,1022
133,7 108,6843 108,6843
5,0869
40
0,1031 129,45 104,9166
5,049
40
0,1096 146,75 127,4565
5,0291
40
0,1022
153,9 125,0451 125,0451
5,1125
40
0,1031
155,3 125,2372
5,0782
40
0,1096
157,9 136,3521
5,0804
40
0,1022
169,2 136,0883 136,0883
5,0568
40
0,1031 164,68 134,2642
5,0947
40
0,1096 159,15 136,9864
5,077
40
0,1022
170,4 137,1453 137,1453
5,077
40
0,1031
166,9 135,5328
5,1006
40
0,1096 159,65 137,2578
5,0135
40
0,1022 168,55 137,3745 137,3745
5,0135
40
0,1031
165,6 136,1804
62
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 7. Hasil uji Anova bilangan asam hasil hidrolisis enzimatisVCO dan
PKO menurut masa inkubasi
F
F
JK
DB
KT
Sig.
hitung
tabel
VCO Perlakuan 107370,266
10 10737,027 4275,182 2,297 0,00
PKO
Galat
55,253
22
Total
107425.518
32
Perlakuan 100981,586
10
Galat
58,229
22
Total
101039,815
32
2,511
0
10098,159 3815,252
2,647
2,297
0,00
0
Lampiran 8. Hasil uji Post Hoc (metode Duncan) bilangan asam hasil hidrolisis
enzimatis VCO
63
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 9. Hasil uji Post Hoc (metode Duncan) bilangan asam hasil hidrolisis
enzimatis PKO
Lampiran 10. Hasil uji Anova bilangan asam hasil hidrolisis enzimatis antara
VCO dan PKO menurut kenaikan bilangan asam
JK
208788,723
DB
21
KT
9942,320
Galat
113,458
44
2,5979
Total
208902,180
65
Perlakuan
F hitung
3855,735
F tabel
Sig.
1,756 0,000
Lampiran 11. Hasil uji Anova zone hambat zat uji terhadap S. aureus
JK
1287,517
DB
11
KT
117,047
Galat
4,550
24
190
Total
1292,067
35
Perlakuan
F hitung
617,391
F tabel
Sig.
2,095 0,000
64
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 12. Hasil uji Post Hoc (metode Duncan) zone hambat zat uji terhadap
S. aureus
Duncan
a
Uji
Subset for alpha = 0.05
N
1
2
3
4
5
PKO
3
VCO
3 10.0167
P25
3
V25
3
13.5667
P50
3
13.7333
V50
3
14.5667
P75
3
15.0167
V75
3
15.9167
P100
3
16.3167
V100
3
Tetrasiklin
3
Kloramfenikol
3
Sig.
6
7
8
9.6000
12.7500
17.1667
26.4167
30.8000
.253
1.000
.643
.218
.272
1.000
1.000
1.000
Lampiran 13. Hasil uji Anova zone hambat zat uji terhadap S. thypi
JK
DB
KT
F hitung
F tabel
192,080
300,646
2,095
Perlakuan
2112,876
11
Sig.
0,000
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000.
Galat
15,333
24
Total
2128,210
35
0,639
65
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 14. Hasil uji Post Hoc (metode Duncan) zone hambat zat uji terhadap
S. thypi
Duncan
a
Uji
Subset for alpha = 0.05
N
1
2
3
4
5
6
7
PKO
3
8.4333
VCO
3
9.0667 9.0667
P25
3
9.2000 9.2000
P50
3
V25
3
10.5333 10.5333 10.5333
P75
3
11.3333 11.3333
V50
3
P100
3
12.8333 12.8333
V75
3
13.0000 13.0000
V100
3
13.7667
Tetrasiklin
3
Kloramfenikol
3
Sig.
8
9
9.2000
10.1000 10.1000 10.1000
11.8000 11.8000
27.2667
34.2333
.278
.147
.064
.085
.078
.094
.189
1.000
1.000
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000.
Lampiran 15. Hasil uji Anova zone hambat zat uji terhadap E. coli
JK
DB
KT
F hitung F tabel
198,780
700,034
2,095
Perlakuan
2186,585
11
Galat
6,815
24
Total
2193,400
35
Sig.
0,000
0,284
66
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 16. Hasil uji Post Hoc (metode Duncan) zone hambat zat uji terhadap
E. coli
Duncan
a
ZatUji
Subset for alpha = 0.05
N
1
2
3
4
5
6
PKO
3 7.8333
VCO
3 8.1667
P25
3
9.0667
V25
3
9.1333
V50
3
10.0500
P50
3
10.4667
P75
3
11.4000
V75
3
11.9333 11.9333
P100
3
12.6333 12.6333
V100
3
13.1333
Tetrasiklin
3
Kloramfenikol
3
Sig.
7
8
29.4333
32.1500
.451
.880
.348
.232
.121
.262
1.000
1.000
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000.
67
Universitas Sumatera Utara
Lampiran
L
17.
1 Gambar tabung
t
penyyimpanan beads dari massing-masing strain
bakteri
Lampiran
L
18.
1 Gambar Mc.
M Farlandd Turbidity Standar
S
0,5
68
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 19.Gambar kemasan Mueller-Hinton Agar
Lampiran 20. Gambar kemasan Nutrient Agar dan Nutrient Broth
69
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 21. Gambar zone hambat dengan menggunakan etanol sebagai pelarut
zat uji
Lampiran 22. Gambar zone hambat E. coli dilihat dari jarak dekat
70
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 23. Letter of Acceptance dari International Journal of PharmTech
Research
71
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 24. Signed Undertaking untuk International Journal of PharmTech
Research
72
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 25. Bukti pengiriman biaya publikasi melalui Western Union
73
Universitas Sumatera Utara