Penetapan kadar guaifenesin yang tercampur dengan salbutamol sulfat dalam sediaan sirup merek ``x`` menggunakan kromatografi cair kinerja tinggi fase terbalik - USD Repository

PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI

PENETAPAN KAD
ADARGUAIFENESIN YANG TERCAMPU
PUR DENGAN
SALBUTAMOL
OL SULFAT DALAM SEDIAAN SIRUP ME
MEREK “X”
MENGGUNAK
AKAN KROMATOGRAFI CAIR KINERJA
JA TINGGI
FASE TERBALIK

SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat
Dia

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)
Me
Program Studi Farmasi

Oleh:
Priscilla Novelia Sari
NIM : 108114016

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
U
YOGYAKARTA
2014

i

PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK

TIDAKTERPUJI
TERPUJI

PENETAPAN KAD
ADAR GUAIFENESIN YANG TERCAMPU
PUR DENGAN
SALBUTAMOL
OL SULFAT DALAM SEDIAAN SIRUP ME
MEREK “X”
MENGGUNAK
AKAN KROMATOGRAFI CAIR KINERJA
JA TINGGI
FASE TERBALIK

SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat
Dia
Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)
Me
Program Studi Farmasi

Oleh:
Priscilla Novelia Sari
NIM : 108114016

FAKULTAS FARMASI
U
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2014

ii

PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI

iii

PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI

PENGESATIAN SKRIPSI BERJUDUL

PENETAPAN KADAR GUAIFENESIN YANG TERCAMPUR DENGAN

SALBUTAMOL SULFAT DALAM SEDIAAN SIRUP MEREK "X"
MENGGUNAKAN KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI
FASE TERBALIK
Oleh:
Priscilla Novelia Sari

NIM : 108114016

Dipertahankan di hadapan panitia penguji skripsi
Fakultas Farmast
Universitas Sanata Dharma
Pada tanggal: 4Agustus 2014

Mengetahui
akultas Famasi

4?E'ffi;k

{dh
(

anata Dharma

kan

t',g;*trs}

(Aris Wida

Panitia Penguji Skripsi

1.

Prof. Dr. Sudibyo Martono, M.S., Apt.

2.

Jeffry Julianus, M.Si.

3.

Florentinus Dika Octa Riswanto, M.Sc.

IV

.Si., Ph.D., Apt.)

PLAGIAT

PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI

PERSEMBAHAN

Bagi Dialah, yang dapat melakukan jauh lebih banyak dari pada
yang kita doakan atau pikirkan, seperti yang ternyata dari kuasa
yang bekerja didalam kita
Efesus 3 : 20

“The sooner you step away from your comfort zone,
The sooner You’ll realize that it really wasn’t all that comfortable.”
Eddie Harris Jr.

v

PLAGIAT

PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI

vi

PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI

vii

PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN

TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI

PRAKATA
Puji syukur penulis hanturkan kepada Tuhan atas segala kasih karunia
yang telah diberikan sehingga skripsi berjudul “Penetapan Kadar Guaifenesin
yang Tercampur dengan Salbutamol Sulfat dalam Sediaan sirup Merek “X”
Menggunakan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi Fase Terbalik” yang disusun
untuk kepentingan memenuhi persyaratan dalam memperoleh gelar Sarjana Strata
Satu Program Studi Farmasi (S. Farm.) dapat diselesaikan dengan baik.
Penulis menyadari bahwa dalam penulisan skripsi ini banyak berbagai pihakpihak yang telah memberikan kontribusi. Oleh karena itu, pada kesempatan ini
penulis mengucapkan terimakasih kepada:
1. Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma yang telah
mengijinkan penulis menjalankan pembelajaran selama masa studi.
2. Prof. Dr. Sudibyo Martono, M.S., Apt. selaku Dosen Pembimbing Skripsi
yang telah membimbing, selalu mendampingi, dan memberikan saran
selama penyusunan skripsi.
3. Jeffry Julianus, M.Si. selaku Dosen Penguji yang telah memberikan kritik
dan saran selama penyusunan skripsi.

4. Florentinus Dika Octa Riswanto, M.Sc. selaku Dosen Penguji yang telah
memberikan kritik dan saran selama penyusunan skripsi.
5. Dr. Sri Yuliani, M.Si., Apt.selaku Kepala Penanggungjawab Laboratorium
Fakultas Farmasi yang telah memberikan ijin dalam penggunaan fasilitas
laboratorium untuk kepentingan penelitian ini.

viii

PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI

6. Phebe Hendra M.Si., Apt., Ph.D. selaku dosen pendamping akademik yang
telah membimbing penulis selama studi di Fakultas Farmasi Universitas
Sanata Dharma.
7. Seluruh Dosen Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma atas ilmu,
nasihat, dan bimbingan yang telah diberikan.

8. Laboran laboratorium Fakultas Farmasi yang telah membantu penulis
dalam proses pelaksanaan penelitian di laboratorium.
9. Mamaku tersayang yang selalu memberikan doa, perhatian dan motivasi
dalam studi dan penyusunan skripsi.
10. Teman-teman skripsi yang berjuang bersama penulis Agustinus Hendy
Larsen dan Aries Mulyawanatas doa, kerjasama, bantuan, kesabaran, dan
semangat dalam penyusunan skripsi.
11. Kenny Ricardo atas masukan ilmu, dan waktu yang telah diberikan saat
penelitian dalam penyusunan skripsi
12. Sahabat sekaligus keluarga Juliana, Olivia Christie, Daniel Pradipta,
Enggar Nugraheni P., Priscilla Diana Vivi Vionita, Angelia Rosari,
Christian Gunawan, Gabriela Indri, Brigitta Rosalia, dan Raisa Ruga atas
doa, kebersamaan dalam suka dan duka, motivasi, nasihat dan semangat
yang diberikan.
13. Teman-teman sekelas FST A 2010 dan seluruh angkatan Farmasi 2010 atas
setiap cerita kebersamaan yang telah terjadi.

ix

PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI

14. Semua pihak yang tidak dapat penulis sebutkan satu persatu atas
kontribusinya sehingga penulis dapat menyelesaikan studi dan skripsi
dengan baik.

x

PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI

DAFTAR ISI

HALAMAN SAMPUL ............................................................................................ i
HALAMAN JUDUL .............................................................................................. ii
HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ................................................... iii
HALAMAN PENGESAHAN................................................................................ iv
HALAMAN PERSEMBAHAN ..............................................................................v
HALAMAN PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ........................................... vi
LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH
UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS ............................................................. vii
PRAKATA........................................................................................................... viii
DAFTAR ISI ......................................................................................................... xi
DAFTAR TABEL..................................................................................................xv
DAFTAR GAMBAR .......................................................................................... xvi
DAFTAR LAMPIRAN...................................................................................... xviii
INTISARI...............................................................................................................xx
ABSTRACT........................................................................................................... xxi
BAB I PENDAHULUAN .......................................................................................1
A. Latar Belakang ..................................................................................................... 1
1. Perumusan Masalah ...................................................................................... 3
2. Keaslian Penelitian ....................................................................................... 3
3. Manfaat Penelitian ........................................................................... ............4
B. Tujuan Penelitian ................................................................................................ 4

xi

PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI

BAB II PENELAAHAN PUSTAKA......................................................................5
A. Batuk ..................................................................................................................... 5
B. Asma .................................................................................................................... 5
C. Sirup ..................................................................................................................... 6
D. Salbutamol Sulfat .........................................................................................7
E. Guaifenesin ..................................................................................................9
F. Spektrofotometer UV-Vis ..........................................................................10
G. Penyiapan Sampel ......................................................................................13
H. Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) ................................................. 14
1. Definisi dan Instrumentasi ......................................................................... 14
a. Wadah Fase Gerak dan Fase Gerak ................................................... 15
b. Pompa.............................................................................................16
c. Tempat Penyuntikan Sampel..........................................................16
d. Kolom.............................................................................................17
e. Fase Diam ......................................................................................19
f. Detektor .........................................................................................20
2. Analisis Kualitatif dan Kuantitatif............................................................ 21
I. Larutan Bufer ..................................................................................................... 22
J. Landasan Teori .................................................................................................. 22
K. Hipotesis.....................................................................................................23
BAB III METODOLOGI PENELITIAN...............................................................24
A. Jenis dan Rancangan Penelitian .................................................................24
B. Variabel Penelitian ....................................................................................24
C. Definisi Operasional ..................................................................................24
D. Bahan Penelitian.........................................................................................25
E. Alat Penelitian ...........................................................................................25
F. Tata Cara Penelitian ..................................................................................26
1. Pembuatan Asam Fosfat 0,1 M ................................................................. 26
2. Pembuatan Bufer Kalium Dihidrogen Fosfat 0,01 M ..........................26

xii

PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI

3. Pembuatan Fase Gerak.........................................................................26
4. Pembuatan Larutan Baku Salbutamol Sulfat dan Guaifenesin untuk
Penentuan Panjang Gelombang............................................................27
a. Pembuatan Larutan Baku Salbutamol Sulfat ............................. 27
b. Pembuatan Larutan BakuGuaifenesin......................................27
5. Penetapan λ Maksimum Salbutamol Sulfat dan Guaifenesin
Menggunakan Spektrofotometer UV-Vis ................................................ 27
6. Pembuatan Larutan Baku Salbutamol Sulfat .......................................28
a. Pembuatan Larutan Stok Salbutamol Sulfat .............................. 28
b. Pembuatan Larutan Intermediet Salbutamol Sulfat .................28
7. Pembuatan Larutan Baku Guaifenesin.................................................28
8. Pembuatan Seri Larutan Baku Campuran Salbutamol Sulfat dan
Guaifenesin ..........................................................................................28
9. Pengujian Stabilitas Baku Pembanding ...............................................29
10. Pembuatan Kurva Baku Salbutamol Sulfat dan Guaifenesin...............29
11. Pengambilan Sampel............................................................................30
12. Keseragaman Volume ..........................................................................30
13. Preparasi Sampel..................................................................................30
a. Pembuatan Larutan Stok Sampel .............................................30
b. Pembuatan Larutan Sampel......................................................31
14. Penetapan Kadar Sampel......................................................................31
G. Analisis Hasil .................................................................................................... 31
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN .................................................................... 33
A. Pembuatan Fase Gerak ..................................................................................... 33
B. Penentuan Panjang Gelombang (λ) Maksimum Salbutamol Sulfat dan
Guaifenesin ........................................................................................................ 34
C. Pengukuran Stabilitas Baku Pembanding ...................................................... 37
D. Pembuatan Kurva Baku Guaifenesin .............................................................. 39
E. Pengambilan Sampel......................................................................................... 40
F. Analisis Kualitatif ................................................................................................ 42

xiii

PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI

G. Analisis Kuantitatif .............................................................................................. 47
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ...................................................................... 49
A. Kesimpulan ........................................................................................................ 48
B. Saran .................................................................................................................... 48
DAFTAR PUSTAKA ...........................................................................................50
LAMPIRAN...........................................................................................................52
BIOGRAFI PENULIS .........................................................................................109

xiv

PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI

DAFTAR TABEL
Tabel 1Hasil Pengukuran Stabilitas Baku Pembanding Guaifenesin ...................... 38
Tabel 2. Hasil Pengukuran Stabilitas Baku PembandingSalbutamol Sulfat .......... 38
Tabel 3. Hasil Pengukuran Persamaan Kurva Baku Guaifenesin ............................ 39
Tabel 4. Data Keseragaman Volum Sampel Sirup merek “X” ................................ 41
Tabel 5. Data Waktu Retensi Baku Salbutamol Sulfat, Baku Guaifenesin
danSampel ........................................................................................................ 44
Tabel 6. Hasil Pengukuran Kadar Sampel Sirup Merek “X” ................................... 47

xv

PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI

DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Struktur Salbutamol Sulfat .......................................................................... 7
Gambar 2. Struktur Guaifenesin ..................................................................................... 9
Gambar 3. Diagram Skematik Alat Spektrofotometer ............................................. 10
Gambar 4 . Monokromator............................................................................................ 11
Gambar 5 . Spektrum Elektromagnetik ....................................................................... 13
Gambar 6. Diagram Skematik Alat KCKT ................................................................ 15
Gambar 7. Diagram Kolom KCKT .............................................................................. 17
Gambar 8. Pemisahan Sampel ...................................................................................... 18
Gambar 9. Interaksi Silika dengan Fase Diam ........................................................... 19
Gambar 10. Gugus Kromofor dan Auksokrom Salbutamol Sulfat .......................... 34
Gambar 11. Gugus Kromofor dan Auksokrom Guaifenesin .................................... 35
Gambar 12. Spektra Salbutamol Sulfat pada 3 Seri Konsentrasi dalam Pelarut
Metanol................................................................................................35
Gambar 13. Spektra Guaifenesin pada 3 Seri Konsentrasi dalam Pelarut
Metanol...............................................................................................36
Gambar 14. Spektra Overlapping Salbutamol Sulfat dan Guaifenesin dalam
Pelarut Metanol ...................................................................................36
Gambar 15. Kurva Baku Guaifenesin .......................................................................... 40
Gambar 16. Kromatogram Baku Salbutamol Sulfat Konsentrasi 1,2 µg/mL ........ 42
Gambar 17. Kromatogram Baku Guaifenesin Konsentrasi 54,0 µg/mL................. 43
Gambar 18. Kromatogram Sampel .............................................................................. 44

xvi

PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI

Gambar 19. Interaksi Salbutamol Sulfat dengan Fase Diam .................................... 44
Gambar 20. Interaksi Guaifenesin dengan Fase Diam .............................................. 45
Gambar 21. Interaksi Salbutamol Sulfat dengan Fase Gerak ................................... 45
Gambar 22. Interaksi Guaifenesin dengan Fase Gerak ............................................. 46

xvii

PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI

DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Certificate of Analysis (CoA) Baku Salbutamol Sulfat ...................... 53
Lampiran 2. Certificate of Analysis (CoA) Guaifenesin ........................................... 55
Lampiran 3. Spektra Panjang Gelombang Pengamatan ............................................ 58
Lampiran 4. Kromatogram Stabilitas Baku Pembanding Salbutamol Sulfat
5 Maret 2014 ...................................................................................................... 61
Lampiran 5. Kromatogram Stabilitas Baku Pembannding Salbutamol Sulfat
6 Maret 2014 ...................................................................................................... 64
Lampiran 6. Kromatogram Stabilitas Baku Pembanding Salbutamol Sulfat
7 Maret 2014 ...................................................................................................... 67
Lampiran 7. Kromatogram Stabilitas Baku Pembanding Guaifenesin
6 Maret 2014 ...................................................................................................... 70
Lampiran 8. Kromatogram Stabilitas Baku Pembanding Guaifenesin
7 Maret 2014 ..................................................................................................... 73
Lampiran 9. Kromatogram Stabilitas Baku Pembanding Guaifenesin
8 Maret 2014 ...................................................................................................... 76
Lampiran 10. Data Penimbangan Baku Guaifenesin ................................................. 78
Lampiran 11. Kromatogram Seri Larutan Baku Guaifnesin Replikasi 1................ 79
Lampiran 12. Kromatogram Seri Larutan Baku Guaifenesin Replikasi 2 .............. 84
Lampiran 13. Kromatogram Seri Larutan Baku Guaifnesin Replikasi 3 ................ 89
Lampiran 14. Perhitungan Kadar Teoritis Larutan Baku Guaifenesin .................... 94

xviii

PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI

Lampiran 15. Kurva Baku Guaifenesin ....................................................................... 96
Lampiran 16. Data Persamaan Kurva Baku Guaifenesin.......................................... 96
Lampiran 17. Data Pengukuran Berat Jenis Sampel ................................................. 98
Lampiran 18. Data Hasil Keseragaman Volume........................................................ 99
Lampiran 19. Data Perhitungan Keseragaman Volume ............................................ 99
Lampiran 20. Kromatogram Sampel Replikasi 1 ..................................................... 100
Lampiran 21. Kromatogram Sampel Replikasi 2 ..................................................... 101
Lampiran 22. Kromatogram Sampel Replikasi 3 ..................................................... 102
Lampiran 23. Kromatogram Sampel Replikasi 4 ..................................................... 103
Lampiran 24. Kromatogram Sampel Replikasi 5 ..................................................... 104
Lampiran 25. Kromatogram Sampel Replikasi 6 ..................................................... 105
Lampiran 26. Perhitungan Kadar Sampel dengan Persamaan Kurva Baku ......... 106
Lampiran 27. Data Perhitungan Penetapan Kadar ................................................... 106
Lampiran 28. Perhitungan RSD Guaifenesin dalam Sampel ................................. 107
Lampiran 29. Perhitungan Rentang Guaifenesin ..................................................... 108

xix

PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI

INTISARI
Batuk kronik merupakan jenis batuk yang terjadi dengan disertai asma.
Angka kejadiantimbulnya asma pada batuk kronik sekitar 24 – 29%. Sediaan sirup
merek “X” adalah salah satu obat untuk terapi batukdisertai asma yang
mengandung kombinasi salbutamol sulfat dan guaifenesin. Tujuan penelitian ini
adalah untuk mengetahui kesesuaian kadar salbutaol sulfat dan guaifenesin yang
terukur dengan kadar yang tertera pada etiket dalam rangka penjaminan mutu
suatu produk obat.
Penelitian bersifat non eksperimental deskriptif karena tidak dilakukan
manipulasi dan perlakuan terhadap subjek uji. Penetapan kadar guaifenesin yang
tercampur dengan salbutamol sulfat dalam sediaan sirup merek “X”dilakukan
menggunakan metode Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) fase terbalik.
Fase diam yang digunakan adalah C18dimensi 250 x 4,6 mm, 5µm Shimadzu
column Shimpack dan fase gerak yang digunakan adalah campuran metanol : 0,01
M bufer kalium dihidrogen fosfat pH 3,0 (40:60) dengan kecepatan alir 1,0
mL/menit.
Hasil pengujian stabilitas baku pembanding salbutamol sulfat memiliki %
perbedaan ≥ 2% (tidak stabil) dan pengujian stabilitas baku pembanding
guaifenesin memiliki % perbedaan ≤2% (stabil), sehingga penetapan kadar hanya
dilakukan untuk guaifenesin. Kadarguaifenesin yang tertera pada etiket adalah50
mg/5mL (1 %b/v) dengan rentang keberterimaan 90-110% (45-55mg/5mL) dan
kadar terukur yang diperoleh adalah 48,44 mg/5mL dengan RSD 0,70%. Kadar
Guaifenesin yang terukur sesuai dengan kadar guaifensin yang tertera pada label.

Kata Kunci : salbutamol sulfat, guaifenesin, sirup ekpektoran merek “X”,
KCKT, penetapan kadar

xx

PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI

ABSTRACT
Chronic cough is one kind of cough occuring accompanied with asthma.
The number of the occurance of asthma in chronic cough is about 24 – 29%. The
preparation of syrup brand “X” is one kind of medicine for cough with asthma
therapy which contains a combination of salbutamol sulfate and guaiphenesin.
The objective of this research is to find out the suitability of the content of
salbutamol sulfate and guaifenesinmeasuredwiththe contentindicated onthe labelin
order toguaranteethe quality of adrugproduct.
The research is non-experimental descriptive because it does not do the
manipulation and treatment toward the test subjects. The assay of guaifenesin
mixed with salbutamol sulphate in the solution dosage form merk “X” is done
using a method of reversed phase High PerformanceLiquid Chromatography
(HPLC). Stationary phase used is C18dimension 250 x 4.6 mm, 5µm Shimadzu
column Shimpack and mobile phase used is a mixed methanol: 0.01 M
potassiumdihydrogenphosphatebufferpH3.0(40:60)with

the

flow

speed

1.0

mL/minute.
The result of stability test for working standard of salbutamo sulfate have
% of difference ≥ 2 % (unstable) and stability test for working standard of
guaiphenesin have % of difference ≤2 % (stable), with the result that the assay
do for guaiphenesin only. The content of guaifenesin printed on the label is 50
mg/5mL (1 %b/v)with the range of acceptance is 90-110 % (45-55 mg/5mL) and
the content measuredis 48.44 mg/5mL

with RSD 0.70%. The content of

guaifenesin measured is appropriate with the content of guaifenesin printed on the
label.

Keywords : salbutamolsulfate, guaifenesin, an expectorantsyrupbrand “X”,
HPLC, assay

xxi

PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI

BAB I
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Batuk adalah salah satu respon tubuh yang terjadi apabila terdapat iritan
yang masuk dalam tenggorokan dan saluran pernafasan (Djunarko dan
Hendrawati, 2011). Pada batuk kronik sering disertai timbulnya asma, angka
kejadian timbulnya asma pada batuk kronik sekitar 24 – 29% (Dicpinigaitis, Peter
V., 2014).Asma adalah gangguan inflamasi kronik pada saluran pernafasan. Asma
termasuk lima besar penyakit penyebab kematian di dunia yang bervariasi antara
5-30% (Oemiati dkk., 2010).Batuk yang disertai asma terjadi karena pengentalan
lendir pada lapisan epitel di saluran pernafasan, sehingga jalannya udara
terhambat (Dicpinigaitis, Peter V., 2014). Penggunaan ekspektoran dan antiasma
merupakan penanganan pilihan untuk terapi batuk disertai asma, karena
pemberian ekspektoran membantu mengencerkan dahak sehingga mudah
dikeluarkan dan penggunaan antiasma dapat meningkatkan bronkoselektivitas.
Sediaan sirup merek “X” adalah salah satu obat untuk terapi batukdisertai asma
yang mengandung kombinasi salbutamol sulfat dan guaifenesin. Salbutamol sulfat
adalah agonis β2 yang merupakan bronkodilator. Mekanisme kerja agonis β2
adalah menstimulasi reseptor β2-adregenik untuk mengaktifkan adenil siklase,
sehingga AMP (asam 3,5 adenilat) siklik intrasel meningkat dan menyebabkan
relaksasi otot polos pada saluran pernafasan (Jyothi dkk., 2012). Guaifenesin
adalah ekspektoran yang bekerja dengan merangsang batuk sehingga dahak dapat

1

PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI

2

dikeluarkan (Djunarko dan Hendrawati, 2011). Untuk menjamin keamanan dan
efektivitas sediaan sirup sebagai obat batuk ekspektoran yang frekuensi
penggunaannya dalam terapi cukup sering, perlu dilakukan penetapan kadar
salbutamol sulfat dan guaifenesin yang merupakan zat aktif dari sediaan sirup
tersebut dengan metode analisis yang valid.
Penelitian mengenai salbutamol sulfat dan guaifenesin sudah pernah
dilakukan oleh Walode dkk. (2013) dalam pengembangan dan validasi metode
kromatografi cair kinerja tinggi(KCKT) untuk salbutamol sulfat dan guaifenesin
dalam sediaan sirup. Metode yang digunakan adalah kromatografi cair kinerja
tinggi (KCKT) sistem fase terbalik dengan fase diam C18 dan fase gerak asetonitril
: 0,05M bufer fosfat pH 3,0 dengan triethylamine 0,1 % (36:64) pada kecepatan
alir 0,8 mL/menit dan panjang gelombang 225 nm dengan kondisi suhu konstan
18oC. Pada penelitian tersebut dihasilkan pemisahan yang baik antara salbutamol
sulfat dan guaifenesin.
Penelitian yang akan dilakukan adalah menetapkan kadar guaifenesin yang
tercanpur dengan salbutamol sulfat dalam sediaan sirup merek “X” menggunakan
metode kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) fase terbalik. Metode tersebut
dipilih untuk analisisguaifenesin dan salbutamol sulfat, karena metode ini
merupakan metode yang selektif dan memberikan hasil yang baik dalam
memisahkan

senyawa-senyawa

multikomponen.

KCKT

yang

digunakan

merupakan sistem fase terbalik karena fase diam C18 yang digunakan bersifat non
polar dan fase gerak campuran metanol : 0,01 M bufer kalium dihidrogen fosfat
pH 3,0 (40:60)yang digunakan bersifat polar dengan kecepatan alir 1,0 mL/menit

PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI

3

hasil optimasi dan telah divalidasi. Analisis guaifenesin dan salbutamol sulfat
dilakukan untuk menjamin keamanan dan efektivitas dari sediaan sirup merek“X”
dengan melihat kesesuaian kadar yang terukur dengan kadar yang tertera pada
etiket.
1. Perumusan Masalah
Berdasarkan latar belakang di atas, maka dapat disusun permasalahan
sebagai berikut:
a. Berapakah kadarguaifenesin yang tercampur dengan salbutamol sulfat
dalam sediaan sirup merek “X” ?
b. Apakah kadarguaifenesin yang terukur dengan metode kromatografi
cair kinerja tinggi fase terbalik sesuai dengan guaifenesin yang tertera
pada kemasan sediaan sirup merek “X” ?
2. Keaslian Penelitian
Berdasarkan penelusuran literatur yang telah dilakukan, telah
diperoleh jurnal berjudul “Stability Indicating RP-HPLC Method For
Simultaneous Estimation Of Salbutamol Sulphate and Guaifenesin” oleh
Walode dkk. (2013). Metode kuantifikasi salbutamol sulfat dan guaifenesin
ini menggunakan metode KCKT. Pada penelitian tersebut digunakan fase
gerak campuran asetonitril : 0,05M bufer fosfat pH 3,0 dengan 0,1 %
triethylamine (36:64 v/v) dan laju alir fase gerak 0,8 mL/menit dengan
panjang gelombang 225 nm dalam kondisi suhu konstan 180C.

PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI

4

3. Manfaat Penelitian
a. Manfaat Metodologis
Hasil penelitian ini diharapkan dapat memberikan sumbangan
ilmiah berupa metode analisis guaifenesin dan salbutamol sulfatpada
sediaan sirup menggunakan kromatografi cair kinerja tinggi fase
terbalik.
b. Manfaat Praktis
Hasil penelitan diharapkan dapat menambah informasi mengenai
kadar guaifenesin yang tercampur dengan salbutamol sulfat dalam
sediaan sirup menggunakan metode kromatografi cair kinerja tinggi
fase terbalik.

B. Tujuan Penelitian
Tujuan penelitian ini adalah untuk:
a. Mengetahui kadar guaifenesin yang tercampur dengan salbutamol sulfat
dalam sediaan sirupmerek “X” menggunakan metode kromatografi cair
kinerja tinggi fase terbalik.
b. Mengetahui kesesuaian antara kadar terukur guaifenesin dengan kadar
guaifenesin yang tertera pada kemasan sediaan sirup merek “X”.

PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI

BAB II
PENELAAH PUSTAKA
A. Batuk
Batuk adalah mekanisme tubuh dalam mengeluarkan benda asing yang ada
dalam saluran pernafasan bagian atas. Batuk yang biasanya disebabkan oleh
adanya alergi dan pengeluran lendir disebut batuk berdahak, sementara batuk yang
disebabkan oleh adanya benda asing yang mengiritasi tenggorokan disebut batuk
kering (Puspitasari, 2010).
Pengobatan untuk setiap jenis batuk berbeda. Obat untuk batuk berdahak
adalah ekspektoran yang merupakan pengencer dahak sehingga dahak dapat
dengan mudah dikeluarkan. Obat untuk batuk kering adalah antitusif yang
menekan rangsang batuk sehingga frekuensi batuk berkurang (Puspitasari, 2010).

B. Asma
Asma merupakan gangguan inflamasi pada saluran jalannya udara yang
melibatkan banyak sel dan komponennya. Serangan asma bersifat mendadak dan
disebabkan oleh faktor yang tidak diketahui atau yang diketahui seperti paparan
alergen, virus, atau polutan. Keparahan penyakit asma ditentukan oleh fungsi
paru. Pada individu yang rentan terhadap inflamasi dapat menyebabkan episode
berulang dari bengek, sesak nafas, sempit dada, dan batuk. Proses inflamasi yang
terjadi adalah degradasi dari sel mast akibat respon dari alergen, dan

5

PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI

6

mengakibatkan pembebasan mediator inflamasi seperti histamin, faktor
kemotaksis eosinofil dan neutrofil, prostaglandin, dan faktor pengaktivasi
platelet (PAF). Mediator inflamasi akan menginduksi konstriksi otot polos dan
bronkospasme dan berperan dalam edema mukosa dengan meningkatkan
produksi mukus yang viskositasnya cenderung tinggi sehingga menghambat
jalannya udara yang tersusun oleh syaraf parasimpatik, simpatik, dan syaraf
inhibisi nonadergenik. Otot polos pada jalan udara dipelihara oleh aktivitas
eferen vagal dengan memperantarai brokokonstriksi. Otot polos pada jalan udara
mengandung reseptor β-adregernik yang menyebabkan bronkodilatasi (Sukandar
dkk., 2009).

C. Sirup
Menurut Farmakope Indonesia edisi III, sediaan sirup merupakan sediaan cair
yang berupa larutan yang mengandung sakarosa, kecuali dinyatakan lain, kadar
sakarosa, C12H22O11, tidak kurang dari 64,0% dan tidak lebih dari 66,0% (Dirjen
POM RI, 1979). Rasa manis dari sakarosa dalam sirup dapat menutupi rasa tidak
enak dari obat, sehingga sirup sangat efektif untuk sistem penghantaran obat bagi
anak-anak. Sakarosa merupakan gula yang banyak digunakan pada sirup, tetapi
pada beberapa kasus dapat digantikan dengan pemanis lainnya yang bukan gula
seperti sorbitol, gliserin, dan propilen glikol (Ansel dan Popovich, 1990).

PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI

7

D. Salbutamol Sulfat

Gambar
copeia, 2009).
ar 1. Struktur Salbutamol Sulfat (British Pharmacop

Salbutamol
etil]-4-hidroksi-mol su
sulfat atau garam α‫ ׳‬-[(tert-butilamino)metil
xilena-α,α‫ ׳‬-diol sulfat
fat memiliki rumus molekul (C13H21NO3)2.H2SO4 dengan berat
molekul576,70 g/mol
kurang dari 98,5%
ol. Salbutamol sulfat mengandung tidak kura
dan tidak lebih darii 101,
hadap zat anhidrat.
101,0% (C13H21NO3)2.H2SO4 dihitung terhada
Pemerian salbutamol
ol sulfat merupakan serbuk putih atauu hampir putih,
kelarutannya mudahh larut dalam air, sukar larut dalam etanol,, da
dalam kloroform
dan dalam eter (Dirje
lam suasana asam
irjen POM RI, 1995).Salbutamol sulfat dalam
memiliki λ maksimum
um 276nm dengan nilai

lam suasana basa
= 71a dan dalam

memiliki λ maksimum
um 245nm dengan nilai

= 510a. Nilai log P salbutamol

sulfat (oktanol/air) = 0,6 serta nilai pKa 9,3 dan 10,3 (Moffat dkk., 2011
2011).
Salbutamol
onkodilator paling
ol sul
sulfat merupakan agonis β2 yang adalah bronkodi
kuat yang bekerja ppada reseptor β2-adregenik. Salbutamol sul
sulfat (albuterol)
merupakan agonis β2 aksi pendek yang digunakan jika terjadi
di ggejala (Sukandar
dkk., 2009).
gan mengunakan
mengenai analisis salbutamol sulfat denga
Penelitiann m
beberapa peneliti.
Kinerja Tinggi (KCKT) dilakukan oleh be
Kromatografi Cair K

PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI

8

Martis dan Gangrade (2011) melakukan analisis salbutamol sulfat dan
beklometason dipropionat dalam formulasi sediaan Rotacapsdengan metode
Kromatografi Cair Kinerja Tinggi fase terbalik dengan deteksi pada panjang
gelombang 230nm menggunakan fase diam C18 dan fas gerak air : asetonitril
(40:60). Muraldhiran dan Kumar (2012) pengembangan metode dan validasi
untuk salbutamol dengan KCKT fase terbalik dengan deteksi pada panjang
gelombang 276nm menggunakan fase diam C18 dan fase gerak asetonitril : 50mm
amonium asetat pH 7,0 (80:20) dengan kecepatan alir 1,0 mL/min. Jyothi,
VenuGopal, dan Rao (2012) pengembangan dan validasi metode KCKT untuk
analisis salbutamol sulfat dan ipratropium bromida dalam sediaan inhalasi yang
menggunakan fase diam C18 dan fase gerak 0,05 M buffer fosfat pH 3,5 : metanol
(40:60) dengan deteksi pada panjang gelombang 226 nm dan kecepatan alir 0,6
mL/min. Walode, Deshpande dan Deshpande (2013) melakukan analisis
salbutamol sulfat dan guaifenesin dengan metode KCKT fase terbalik
menggunakan fase diam C18 dan fase gerak campuran asetonitril : 0,05M bufer
fosfat pH 3,0 dengan 0,1 % triethylamine (36:64 v/v) dan laju alir fase gerak 0,8
mL/menit dengan deteksi pada panjang gelombang 225 nm dalam kondisi suhu
konstan 180C.

PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI

9

E. Guaifenesin

Gambar 2. Struktur Guaifenesin (British Pharmacopeia, 2009).

Guaifenesin atau3-(o-Metoksifenoksi)-1,2-propanadiol memiliki rumus
molekul C10H14O4 dengan bobot molekul 198,22 g/mol. Guaifenesin mengandung
tidak kurang dari 98,0% dan tidak lebih dari 102,0% C10H14O4, dihitung terhadap
zat yang telah dikeringkan. Pemerian guaifenesin adalah serbuk hablur, putih
sampai agak kelabu, bau khas lemah dan rasa pahit, kelarutanya dalam air, dalam
etanol, dalam kloroform, dan dalam propilen glikol, agak sukar larut dalam
gliserin (Dirjen POM RI, 1995).Guaifenesin memiliki bobot molekul 198,2; titik
lebur 78-82oC; nilai log P (oktanol/air)= 1,4; dalam suasana asam memiliki λ
maksimum 273 nm dengan nilai
Mekanisme

kerja

=125a (Moffat dkk., 2011).

guaifenesin

adalah

sebagai

ekspektoran

yang

menstimulasi reseptor yang mengatur sekresi cairan pada saluran pernafasan
(Walode dkk., 2013).
Penelitian

mengenai

analisis

guaifenesin

dengan

mengunakan

Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) dilakukan oleh beberapa peneliti.
Korany, Fahmy, Mahgoub, dan Maher (2011) melakukan analisis guaifenesin
dalam kombinasi obat batuk dan demam dengan metode KCKT menggunakan
fase diam C18 dan fase gerak metanol : 0,01M bufer fosfat dalam tiga

PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI

10

perbandingan pada pH 3,2, 6,2, dan 3,8. Walode, Deshpande dan Deshpande
(2013) melakukan analisis salbutamol sulfat dan guaifenesin dengan metode
KCKT fase terbalik menggunakan fase diam C18 dan fase gerak campuran
asetonitril : 0,05M bufer fosfat pH 3,0 dengan 0,1 % trietilamin (36:64 v/v) dan
laju alir fase gerak 0,8 mL/menit dengan deteksi pada panjang gelombang 225 nm
dalam kondisi suhu konstan 180C.

F. Spektrofotometri UV-Vis
Instumentasi yang digunakan untuk mempelajari serapan atau emisi
radiasi

elektromagnetik

“spektrometer”

atau

sebagai

fungsi

spektrofotometer.

panjang

gelombang

disebut

Komponen-komponen

pokok

spektrofotometer meliputi sumber tenaga radiasi yang stabil, sistem yang terdiri
atas lensa-lensa, cermin, dan celah-celah, monokromator untuk mengubah radiasi
menjadi komponen-komponen panjang gelombang tunggal; tempat cuplikan yang
transparan;

dan

detektor

radiasi

yang

dihubungkan

dengan

pencatat

(Sastrohamidjojo, 2001).

Gambar 3. Diagram Skematik Alat Spektrofotometer (Gandjar dan Rohman, 2007)

PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI

11

Sumber energi pada spektrofotometer harus dapat memberikan intensitas
radiasi elektromagnetik secara stabil pada daerah spektrum elektromagnetik.
Sumber energi dibagi menjadi dua yaitu sumber energi continuum dan sumber
energi line. Sumber energi continuum merupakan sumber energi yang
memancarkan lebih dari satu panjang gelombang dengan intensitas bervariasi dari
masing-masing panjang gelombang. Pada sumber energi line merupakan sumber
energi yang memancarkan satu panjang gelombang yang selektif.

Pada

spektrofotometer UV-Vis menggunakan sumber energi continuum, sehingga
membutuhkan monokromator sebagai selektor filter untuk membatasi jumlah
panjang gelombang radiasi elektromagnetik yang akan masuk (Harvey, 2000).

Gambar 4 . Monokromator (Harvey, 2000)

PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI

12

Panjang gelombang radiasi yang masuk melalui monokromator akan
melewati sampel. Pada saat panjang gelombang radiasi melewati sampel akan
terjadi pengurangan sejumlah radiasi, sehingga panjang gelombang radiasi yang
keluar dan ditangkap oleh detektor akan lebih kecil dari panjang gelombang
radiasi yang masuk. Banyaknya jumlah radiasi yang berkurang berbanding lurus
dengan konsentrasi analit dalam sampel (Harvey, 2000).
Serapan sinar UV dan sinar tampak (visibel) pada umumnya
mengakibatkan eksitasi elektron-elektron, akibatnya panjang gelombang pita yang
terserap dapat dihubungkan dengan elektron yang mungkin ada dalam suatu
molekul (Gandjar dan Rohman, 2007).
Serapan cahaya oleh molekul pada daerah spektrum ultraviolet dan sinar
tampak tergantung pada struktur elektronik molekul. Spektrum ultraviolet dan
sinar tampak senyawa-senyawa organik berkaitan erat dengan transisi-transisi
diantara

tingaktan-tingkatan energi elektronik, karena hal ini serapan radiasi

ultraviolet/terlihat sering dikenal sebagai spektroskopi elektronik. Panjang
gelombang serapan merupakan ukuran

pemisahan tingkatan-tingkatan tenaga

orbital-orbital yang bersangkutan. Energi yang paling tinggi diperoleh bila
elektron-elektron dalam ikatan σ tereksitasi yang menimbulkan serapan dalam
daerah dari 120 hingga 200 nm. Daerah ini dikenal sebagai daerah ultraviolet
vakum dan relatif tidak banyak memberikan keterangan (Sastrohamidjojo, 2001).

PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI

13

Gambar 5 . Spektrum Elektromagnetik (Harvey, 2000).

G. Penyiapan Sampel
Penyiapan sampel dalam analisis sangat penting karena untuk mengetahui
kadar atau konsentrasi suatu senyawa tertentu dalam sampel hanya dilakukan
terhadap sejumlah kecil sampel. Berdasarkan prinsipnya dikenal dua macam cara
pengambilan sampel dalam analisis yaitu:
1. Pengambilan sampel random (cuplikan random, cuplikan acak)
Cara pengambilan sampel ini dilakukan terhadap bahan yang serba sama
(homogen) atau dianggap serba sama. Misalnya larutan sejati, batch tablet,
dan ampul.
2. Pengambilan sampel representatif

PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI

14

Cara pengambilan sampel ini dilakukan jika bahan tidak homongen.
Dalam hal ini sampel harus diambil dari tiap bagian-bagian yang berbedabeda dari setiap wadah (atas, tengah, bawah, samping kanan, samping kiri,
dan sebagainya). Masing-masing sampel harus dicampur homogen
kemudian diambil secara random (Gandjar dan Rohman, 2007).

H. Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT)
1. Definisi dan Instrumentasi
Kromatografi cair kinerja tinggi atau KCKT atau biasa juga disebut
dengan HPLC (High Performance Liquid Chromatography) merupakan
teknik pemisahan yang diterima secara luas untuk analisis dan pemurnian
senyawa tertentu dalam suatu sampel. KCKT merupakan metode yang
tidak destruktif dan dapat digunakan baik untuk analisis kuantitatif
maupun kualitatif (Ganjar dan Rohman, 2007).
Pada sistem KCKT sampel akan dibawa masuk ke dalam kolom
oleh fase gerak. Proses pemisahan komponen dalam sampel terjadi karena
adanya interaksi yang berbeda antara komponen dalam sampel dengan fase
gerak dan fase diam yang berada di dalam kolom (Harvey, 2000).
Instrumentasi KCKT pada dasarnya terdiri atas delapan komponen
pokok yaitu: wadah fase gerak, sistem penghantaran fase gerak (pompa),
alat untuk memasukkan sampel (tempat injeksi), kolom, detektor, wadah
penampung buangan fase gerak, tabung penghubung, dan suatu komputer
atau integrator atau perekam (Gandjar dan Rohman, 2007).

PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI

15

Gambar 6. Diagram Skematik Alat KCKT (Ahuja dan Dong, 2005).

a. Wadah Fase Gerak dan Fase Gerak
Wadah fase gerak harus bersih dan lembam (inert). Wadah pelarut
kosong ataupun labu laboratorium dapat digunakan sebagai wadah fase
gerak. Larutan fase gerak atau eluent biasanya terdiri atas campuran
pelarut yang dapat bercampur dan secara keseluruhan berperan dalam
daya elusi dan resolusi. Polaritas keseluruhan pelarut, polaritas fase
diam, dan sifat komponen-komponen sampel menentukan daya elusi
dan resolusi. Elusi dapat dilakukan dengan cara isokratik (komposisi
fase gerak tetap selama elusi) atau dengan cara bergradien (komposisi
fase gerak berubah-ubah selama elusi). Elusi bergradien digunakan
untuk meningkatkan resolusi campuran yang kompleks terutama jika
sampel memiliki kisaran polaritas yang lebar. Fase gerak sebelum
digunakan harus disaring terlebih dahulu untuk menghindari partikelpartikel kecil. Fase gerak juga harus diultrasonikasi (penghilangan
gas), sebab adanya gas akan berkumpul dengan komponen lain

PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI

16

terutama di pompa dan detektor sehingga akan mengacaukan analisis.
Pada saat menyiapkan pelarut untuk fase gerak sangat dianjurkan
menggunakan pelarut, bufer, dan reagen dengan kemurnian yang
sangat tinggi. Adanya pengotor dalam fase gerak dapat menyebabkan
gangguan pada sistem kromatografi (Gandjar dan Rohman, 2007).
b. Pompa
Pompa yang cocok digunakan untuk KCKT adalah pompa yang
mempunyai syarat sebagaimana syarat wadah pelarut, yaitu: pompa
harus inert terhadap fase gerak. Bahan yang umum digunakan untuk
pompa adalah gelas, baja tahan karat, teflon, dan batu nilam. Pompa
yang digunakan seharusnya mampu memberikan tekanan sampai 5000
psi dan mampu mengalirkan fase gerak dengan kecepatan alir 3
mL/menit. Untuk tujuan preparatif, pompa yang digunakan harus
mampu mengalirkan fase gerak dengan kecepatan 20 mL/menit.
Tujuan

penggunaan

pompa

adalah

unuk

menjamin

proses

penghantaran fase gerak berlangsung secara tepat, reprodusibel,
konstan, dan bebas dari gangguan. Ada 2 jenis pompa dalam KCKT
yaitu: pompa dengan tekanan konstan, dan pompa dengan aliran fase
gerak yang konstan (Gandjar dan Rohman, 2007).
c. Tempat Penyuntikan Sampel
Sampel-sampel cair dan larutan disuntikkan secara langsung ke
dalam fase gerak yang mengalir di bawah tekanan menuju kolom
menggunakan alat penyuntik yang terbuat dari tembaga tahan karat dan

PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI

17

katup teflon yang dilengkapi dengan keluk sampel (sample loop)
internal atau eksternal. Pada saat penyuntikkan, katup diputar sehingga
fase gerak mengalir melewati keluk sampel dan mengalir sampai ke
kolom. Kelebihan penyuntikan sampel akan dikeluarkan ke pembuang
(Gandjar dan Rohman, 2007).
d. Kolom
Kolom pada KCKT berbentuk tabung silinder berisi partikel silika
yang ukurannya 1,5-5 µm. Pori-pori pada silika dilapisi oleh fase diam
yang berikatan dengan partikel-patikel silika. Fase diam yang biasa
digunakan adalah C18 (oktadesilsilan), C8 (oktilsilan), dan C4
(butilsilan). Pada dasarnya pori-pori pada silika adalah ruang yang ada
diantara partikel-partikel silika yang beragregasi (Snyder dkk., 2010).

Gambar 7. Diagram Kolom KCKT (Snyder dkk., 2010).

PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI

18

Pada kolom KCKT terjadi proses pemisahan antar komponen
dalam sampel. Pemisahan terjadi berdasarkan interaksi yang terjadi
antara komponen dalam sampel dengan fase gerak dan fase diam. Pada
sistem KCKT fase terbalik, fase diam yang digunakan bersifat lebih
nonpolar dari fase gerak yang digunakan. Komponen dalam sampel
yang bersifat polar akan terelusi lebih dahulu dari kolom KCKT,
sedangkan komponen dalam sampel yang bersifat nonpolar akan
terelusi lebih lambat dari kolom KCKT. Hal ini disebabkan karena
interaksi antara komponen polar dalam sampel dengan fase diam
lemah sehingga lebih terbawa fase gerak dan interaksi antara
komponen nonpolar dalam sampel dengan fase diam lebih kuat
sehingga lebih sukar terbawa fase gerak (Snyder dkk., 2010).

Gambar 8. Pemisahan Sampel (Snyder dkk., 2010).

PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI

19

e. Fase Diam
Fase diam yang banyak digunakan pada KCKT adalah silika yang
dimodifikasi secara kimiawi, silika yang tidak dimodifikasi, atau
polimer-polimer stiren dan divinil benzen. Permukaan silika adalah
polar dan sedikit asam karena adanya residu gugus silanol (Si-OH).
Silika dapat dimodifikasi secara kimiawi dengan menggunakan reagen
seperti klorosilan. Gugus silanol akan bereaksi dengan klorosilan dan
mengganti gugus silanol dengan gugus fungsional. Hasil modifikasi
tersebut adalah silika fase terikat yang stabil terhadap hidrolisis, karena
adanya ikatan siloksan (Si-O-Si).
Interaksi antara silika dengan fase diam stabil pada pH diatas 2. R
merupakan gugus metil yang terikat, banyakanya gugus metil yang
terikat akan menentukan sifat kepolaran. Fase diam bersifat polar
apabila gugus metil yang terikat pendek dan bersifat semakin non polar
apabila gugus metil yang terikat semakin panjang (Ahuja dan Dong,
2005).

Gambar 9. Interaksi Silika dengan Fase Diam (Ahuja dan Dong, 2005).

Oktadesilsilan (ODS atau C18) merupakan fase diam yang paling
banyak digunakan karena mampu memisahkan senyawa-senyawa

PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI

20

dengan kepolaran rendah, sedang, dan tinggi. Oktil atau rantai alkil
yang lebih pendek lagi lebih sesuai untuk solut polar (Gandjar dan
Rohman, 2007).
f. Detektor
Detektor KCKT yang ideal memiliki karakteristik sebagai berikut:
1. Memiliki respon terhadap solut yang cepat dan reprodusibel
2. Memiliki sensitivitas yang tinggi, mampu mendeteksi solut
pada kadar yang sangat kecil
3. Stabil pada pengoperasiannya
4. Memiliki

sel

volume

yang

kecil

sehingga

mampu

meminimalkan pelebaran pita.
5. Signal yang dihasilkan berbanding lurus dengan konsentrasi
solut pada kisaran yang luas (kisaran dinamis linier)
6. Tidak peka terhadap perubahan suhu dan kecepatan alir fase
gerak (Gandjar dan Rohman, 2007).
Pada KCKT ada dua jenis detektor, yaitu:
1. Detektor Pemisahan
Teknik pengukuran ini menggunakan detektor universal
yang dapat mendeteksi banyak komponen. Detektor akan
mengukur setiap komponen yang terbawa oleh fase gerak.
Salah satu detektor pemisahan adalah detektor indek bias.
Keunggulan detektor pemisahan adalah dapat mendeteksi
banyak komponen, dan semua komponen yang keluar dari

PLAGIAT
PLAGIATMERUPAKAN
MERUPAKANTINDAKAN
TINDAKANTIDAK
TIDAKTERPUJI
TERPUJI

kolom

akan

terdeteksi

sehingga

menjadi

21

kurang

selektif(Rohman, 2009).
2. Detektor Spesifik sampel
Teknik pengukuran ini didasarkan pada karakter sampel
yang unik. Detektor akan mendeteksi keunikan dari karakter
sampel, contohnya pengukuran komponen sampel yang
mengabsorpsi sinar uv