Optimasi dan Validasi Metode Kromatografi Cair Kinerja Tinggi pada Penetapan Kadar Natrium Sakarin dalam Sirup yang Beredar di Kota Medan

Lampiran 1. Kromatogram Hasil Optimasi Perbandingan Fase Gerak Metanol 60% - Dapar Fosfat pH 6,8 dan Laju Alir 1 ml/menit pada Sampel Sirup

1.1. Kromatogram Optimasi pada Sampel Sirup dengan Fase Gerak Metanol 60% - Dapar Fosfat pH 6,8 (30:70) dan Laju Alir 1 ml/menit

a. Sirup ABC

c. Sirup Kapten

e. Sirup Pohon Pinang

Gambar11.

a, b, c, d, e

dan

f

merupakankromatogrampenyuntikandari larutan

sirup ABC, James, Kapten, Piramid Unta dan Pohon Pinang denganfasegerak metanol 60% - dapar fosfat pH 6,8 (30:70), volumepenyuntikan20µ l, laju alir1 ml/menit padapanjang gelombang225nm

1.2. Kromatogram Optimasi pada Sampel Sirup dengan Fase Gerak Metanol 60% - Dapar Fosfat pH 6,8 (40:60) dan Laju Alir 1 ml/menit

a. Sirup ABC

c. Sirup Kapten

e. Sirup Pohon Pinang

Gambar12.

a, b, c, d, e

dan

f

merupakankromatogrampenyuntikandari larutan

sirup ABC, James, Kapten, Piramid Unta dan Pohon Pinang denganfasegerak metanol 60% - dapar fosfat pH 6,8 (40:60), volumepenyuntikan20µ l, laju alir1 ml/menit padapanjang gelombang225nm

1.3. Kromatogram Optimasi pada Sampel Sirup dengan Fase Gerak Metanol 60% - Dapar Fosfat pH 6,8 (50:50) dan Laju Alir 1 ml/menit

a. Sirup ABC

c. Sirup Kapten

e. Sirup Pohon Pinang

Gambar13.

a, b, c, d, e

dan

f

merupakankromatogrampenyuntikandari larutan

sirup ABC, James, Kapten, Piramid Unta dan Pohon Pinang denganfasegerak metanol 60% - dapar fosfat pH 6,8 (50:50), volumepenyuntikan20µ l, laju alir1 ml/menit padapanjang gelombang225nm

a

c

e

f

Gambar14.

a, b, c, d, e

dan

f

merupakankromatogrampenyuntikan6kalidari

larutansirup ABC,fasegerak metanol 60% - dapar fosfat pH 6,8 (40:60), volumepenyuntikan20µ l, laju alir1 ml/menit padapanjang gelombang225nm

a

c

e

f

Gambar15.

a, b, c, d, e

dan

f

merupakankromatogrampenyuntikan6kalidari larutansirupJAMES,fasegerak metanol 60% : dapar fosfat pH 6,8

(40:60), volumepenyuntikan20µ l, laju alir 1 ml/menit pada Panjang gelombang225nm

Lampiran 4. KromatogramHasilPenyuntikanLarutanSirupKAPTEN

a

c

e

f

Gambar16.

a, b, c, d, e

dan

f

merupakankromatogrampenyuntikan6kalidari larutansirup KAPTEN,fasegerak metanol 60% : dapar fosfat pH

6,8 (40:60), volumepenyuntikan20µ l, laju alir 1 ml/menit pada panjang gelombang225nm

Lampiran 5. KromatogramHasilPenyuntikanLarutanSirupPIRAMID UNTA

a

c

e

f

Gambar17.

a, b, c, d, e

dan

f

merupakankromatogrampenyuntikan6kalidari

larutansirup PIRAMID UNTA,fasegerak metanol 60% : dapar fosfat pH 6,8 (40:60), volumepenyuntikan20µ l, laju alir1 ml/menit padapanjang gelombang225nm

Lampiran 6. KromatogramHasilPenyuntikanLarutanSirupPOHON PINANG

a

c

e

f

Gambar18.

a, b, c, d, e

dan

f

merupakankromatogrampenyuntikan6kalidari

larutansirup POHON PINANG,fasegerak metanol 60% - dapar fosfat pH 6,8 (40:60), volumepenyuntikan20µ l, laju alir 1 ml/menit padapanjang gelombang 225 nm

Lampiran 7. Perhitungan Persamaan Regresi dari Kurva Kalibrasi Natrium SakarinBPFI

DataHasilPenyuntikanLarutanNatrium SakarinBPFI BerdasarkanLuas Puncak

No Konsentrasi(ppm) LuasArea

1 25 2255624,3

2 50 4231920,4

3 100 7895845,7

4 150 11626808,1

5 200 15283908,9

TabelKonsentrasi(X)Vs Luas Area(Y)untukNatrium Sakarin No

Konsentrasi

(ppm) LuasArea XY X2 Y2

X Y

1 0 0 0 0 0

2 25 2255624,3 56390607,5 625 5,08784x1012

3 50 4231920,4 211596020 2500 17,90915x1012 4 100 7895845,7 789584570 10000 62,34438x1012 5 150 11626808,1 1744021215 22500 135,18267x1012 6 200 15283908,9 3056781780 40000 233,59787x1012 ∑ 525 41294107,4 5858374193 75625 454,12191x1012 Rata2 87,5 6882351,233 976395698,8 12604,166 75,686985x1012 a =

(

X

)

n

X n Y X XY / / 2 2

∑

∑

∑

∑ ∑

− − =

( )(

)

( )

525 /6 75625 6 / 4 , 41294107 525 5858374193 2 − − = 75625,76152 Y = a X + b

b = Y− aX

= 6882351,233 – (75625,76252)(87,5) = 265097,1

Maka persamaan garis regresinya adalah: Y = 75625,76152X + 34676853,2

(

)

∑

−

∑

∑

∑ ∑

∑

−

∑

− = n Y Y n X X n Y X XY r / ) ( )( / ) ( / 2 2 2 2

=

( )(

)

( )

{

75625 525 /6

}

{

454,12191 10

(

41294107,4

)

/6

}

6 / 4 , 41294107 5 , 52 5858374193 2 10

2 _{× −}

−

−

= ₁₀

10 10 34703252 , 1 10 347083877 , 1 × × = 0,996

Lampiran 8. ContohPerhitunganuntukMencariKadarNatriumSakarin dalam Sirup Konsentrat (Sirup James)

Berat sampel yang ditimbang = 1,2495 Luas Area (Y) = 3233499

Persamaan Regresi : Y = 75625,76152X + 265097,1 X = 76152 , 75625 1 , 265097 3233499−

= 39,2512 µg/ml Konsentrasi Na. Sakarin = 39,2512 µg/ml

(g) Sampel Berat (ml) Larutan Volume x (µg/ml) i Konsentras (µg/g) Sakarin Na.

Kadar =

= g ml ml g 2495 , 1 10 / µ 39,2512 ×

= 314, 1353 µg/g = 314, 1353 mg/kg

Lampiran 9. HasilPerhitunganKadarNatriumSakarin padasirupABC, JAMES, KAPTEN, PIRAMID UNTA dan POHON PINANG

No Sirup LuasArea Kadar(mg/kg) Kadar rata-rata (mg/kg)

1 ABC

5707052 718,0677

722,3643 5693358 716,2605

5766873 725,9610 5747163 723,3605 5769341 726,2873 5753895 722,3643

2 JAMES

3233499 314,1353

302,3955 3214145 312,0976

3170977 307,5190 3258579 316,7891

2918559 280

2947152 283,8319

3 KAPTEN

7528679 767,0212

773,1373 7438420 757,4900

7614343 776,0669 7645895 779,3987 7648524 779,6766 7643729 779,1703

4 PIRAMID UNTA

6172301 622,1010

610,9154 6154296 620,2047

6134898 618,1618 5963086 600,0677 5907742 594,2394 6064210 610,7176

5 POHON PINANG

9284732 938,3690

1.034,2962 10201864 1.033,7836

10129721 1.026,2785 131,6380 1.035,7042 10321778 1.046,2596 11082310 1.125,3824

Lampiran 10. ContohPerhitunganuntukMencariKadarNatriumSakarin dalam Sirup Sesuai Aturan Penggunaannya (Sirup James)

D

m = ×

C B A g/kg) ( nya penggunaan aturan sesuai sirup dalam Sakarin Na. Kadar Keterangan:

A = Volume total sirup B = Saran penyajian (gelas) C = Volume 1 gelas (200 ml)

D = Kadar Na. Sakarin dalam sediaan sirup

D

m = ×

C B A g/kg) ( nya penggunaan aturan sesuai James sirup dalam Sakarin Na. Kadar

= 302,3955mg/kg

ml/gelas 200 gelas 21 ml 600 ×

Lampiran 11. KomatogramHasilUjiPerolehanKembali(%recovery)dariSirup ABCsebelumDitambah Natrium Sakarin BPFI 201,4597µg/gsampel

a

c

e

f

Gambar19.

a, b, c, d, e

dan

f

merupakankromatogramdarilarutanSirupABC sebelum ditambahNatriumSakarinBakumasing-masing 201,4597 µg/gsampel, fase gerak metanol 60%-daparfosfat pH 6,8 (40:60),

77

Lampiran 12. KomatogramHasilUjiPerolehanKembali(%recovery)dari Sirup ABC setelah Ditambah Natrium Sakarin201,4597µg/gsampel

a

78 c

79 e

f

Gambar20.

a, b, c, d, e

dan

f

merupakankromatogramdarilarutanSirupABC setelah ditambahNatriumSakarin201,4597 µg/g sampel, fase gerak

80

metanol 60% : dapar fosfat pH 6,8 (40:60),volumepenyuntikan20µ l, laju alir1ml/menitpadapanjanggelombang225nm

Lampiran 13. UjiValidasidariSirupABC

13.1.PerhitunganPerolehanKembali(%recovery)dariSirupABC

% Recovery =

A A F C C C * −

x 100 % Keterangan :

CF = Kadar Na. Sakarin dalam sampel setelah penambahan baku

CA = Kadar Na.Sakarin dalam sampel sebelum penambahan baku

C*A = Kadar larutan baku yang ditambahkan Jumlah Baku Natrium Sakarinyang ditambahkan kedalam sampeladalah1mg/5gramsirup.

Pengenceran : Ditimbang sirup sebanyak 200.04 gram, kedalamnya ditambahkan 40,3 mg baku Natrium Sakarin, digerus

didalamlumpanghinggahomogen.Setelahhomogenditimbangsebanyak 5,0513 gram.

KadarNatriumSakarinyangditambahkan=

40,3mg

200,04g

KadarNatrium Sakarin sirup ABCsebelum dan sesudah ditambah bakuNatrium Sakarin =201,4597mg/kg

No

Luas Area Kadar ( mg/kg )

Recovery ( % ) Sebelum

Penambahan

Sesudah

Penambahan _Penambahan Sebelum _Penambahan Setelah

1 5707052 7391905 718,0677 932,8074 106,5919 2 5693358 7451464 716,2605 940,6034 111,3587 3 5766873 7459707 725,9610 941,6823 107,0791 4 5747163 7448480 723,3605 940,2124 107,6403 5 5769341 7466484 726,2873 942,5692 107,3574

6 5753895 7440529 724,2486 939,1721 106,6831 Rata-rata % Recovery = 107,7851 mg/kg

82

13.1.1. Contoh Perhitungan % Recovery dengan Metode Adisi Standar

% Recovery =

A A F

C C C

*

−

x 100 %

% Recovery = 100%

4597 , 201

0677 , 718 8074 ,

932 − _×

83 13.2. Perhitungan RSD dari Sirup ABC

No.

Kadar (mg/kg) (X)

Luas Area

(Y) (X-X ) (X-X )2

1. 932,8074 7391905 -6,70055 15,8603

2. 940,6034 7451464 1,09545 33,5206

3. 941,6832 7459707 2,17525 15,2944

4. 940,2124 7448480 0,70445 1,7169

5. 942,5692 7466484 3,06125 17,9530

6. 939,1721 7440529 -0,33585 0,0987

∑ = 5637,0477 X _{= 939,50795}

∑ = 60,8094

SD =

(

)

1 -n X -Xi 2

∑

= 1 6 60,8094 − = 3,4874 RSD = ×100%

X SD

= 100%

50795 , 939 4874 , 3 _×

84 No Kadar (mg/kg) (X) LuasArea

(Y) Yi Y-Yi (Y-Yi)

2

1

25 2255624,3 2155741,138 99883,162 0,9976646051x1010 2

50 4231920,4 4046385,176 185535,224 3,442331934x1010 3

100 7895845,7 7827673,252 68172,448 0,4647482666x1010 4

150 11626808,1 11608961,33 17846,77 0,03185071994x1010 5

200 15283908,9 15390249,4 -106340,5 1,130830194x1010

∑ _{6,06742572 x10}10

13.3. Perhitungan Batas Deteksi(LOD)dan Batas Kuantitasi(LOQ)Natrium Sakarin 2 ) ( ) / ( Deviasi Standar 2 − − =

∑

n Yi Y x Sy 2 5 10 06742572 , 6 / 10 − × = x Sy

Sy/x = 142213,756

Slope x Sy x LOD) 3 / ( Deteksi Batas = 76152 , 75625 756 , 142213 3x LOD=

LOD = 5,6415 mg/kg

Slope x Sy x LOQ) 10 / (

Kuantitasi

Batas =

LOQ = 18,8049 mg 76152 , 75625 756 , 142213 10x LOQ=

85

Lampiran 14. Analisis data statistik untuk mencari kadar Natrium Sakarin sebenarnya dari penyuntikanSirupABC

No Kadar) X

(

X−X

)

(

X−X

)

2

1 718, 0677 -3,9825 15,8603

2 716,2605 -5,7897 33,5206

3 725,9610 3,9108 15,2944

4 723,3605 1,3103 1,7169

5 726,2873 4,2371 17,9530

6 722,3643 0,3141 0,0987

∑X=4.332,3013

X = 722,0502

∑=84,4439

SD =

(

)

1 -n X -Xi 2

∑

= 1 6 84,4439 − = 4,1096

Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α = 0.01, dk = n-1 = 5, diperoleh nilai t tabel = 4,03.

Data diterima jika t hitung< t tabel. t hitung =

n SD X Xi / −

t hitung 1 =

6 / 4,1096 3,9825 = 2,3748

t hitung 2 =

6 / 4,1096 5,7897 = 3,4524

t hitung 3 =

6 / 4,1096

3,9108

86 t hitung 4 =

6 / 4,1096

1,3103

= 0,7810

t hitung 5 =

6 / 4,1096

4,2371

= 2,5255

t hitung 6 =

6 / 4,1096

0,3141

= 0,1872

Dari hasil perhitungan di atas didapat semua t hitung < t tabel, maka semua data tersebut diterima.

Kadar Natrium Sakarin dalam sirup ABC: µ = X ± (t _{(α/2, dk)} x SD /√n )

= 722,0502 mg/kg± (4,0321 x 4,1096 /√6 ) = (722,0502 ± 6,7647) mg/kg

87

Lampiran 15. Analisisdata statistik untuk mencari kadar Natrium Sakarin sebenarnya dari penyuntikanSirup JAMES

No Kadar) X

(

X−X

)

(

X−X

)

2

1 314,1353 -11,7398 137,8229

2 312,0976 9,7021 94,1307

3 307,5190 5,1235 26,2503

4 316,7891 14,3936 207,1757

5 280 -22,3955 501,5584

6 283,8319 -18,5636 344,6072

∑X=1814,3729

X = 302,3955

∑=1311,5452

SD =

(

)

1 -n X -Xi 2

∑

= 1 6 1.311,5452 − = 16,1960

Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α = 0.01, dk = n-1 = 5, diperoleh nilai t tabel = 4,03.

Data diterima jika t hitung< t tabel. t hitung =

n SD X Xi / −

t hitung 1 =

6 / 16,1960 11,7398 = 1,7755

t hitung 2 =

6 / 1960 , 16 9,7021 = 1,4673

t hitung 3 =

6 / 16,1960

5,1235

= 0,7749

t hitung 4 =

6 / 16,1960

14,3936

88 t hitung 5 =

6 / 16,1960

22,3955

= 3,3871

t hitung 6 =

6 / 16,1960

18,5636

= 2,8076

Dari hasil perhitungan di atas didapat semua t hitung < t tabel, maka semua data tersebut diterima.

Kadar Natrium Sakarin dalam sirup JAMES: µ = X ± (t _{(α/2, dk)} x SD / √n )

= 302,3955 mg/kg± (4,03 x 16,1960 / √6 ) = (302,3955 ± 26,6602) mg/kg

Lampiran 16. Analisisdatastatistikuntukmencarikadar Natrium Sakarin sebenarnya dari penyuntikanSirup KAPTEN

No Kadar

(X)

(

X−X

)

(

X−X

)

2

1 767,0212 -6,1161 37,4067

2 757,4900 -15,6473 244,8379

3 776,0669 2,9296 8,5825

4 779,3987 6,2614 39,2051

5 779,6766 6,5393 42,7624

6 779,1703 6,0330 36,3971

∑X= 4638,8237

X = 773,1373

∑= 409,1917

SD =

(

)

1 -n X -Xi 2

∑

= 1 6 409,1917 − = 9,0464

Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α = 0.01, dk = n-1 = 5, diperoleh nilai

t tabel = 4,03.

Data diterima jika t hitung< t tabel. t hitung =

n SD X Xi / −

t hitung 1 =

6 / 9,0464 6,1161 = 1,6560

t hitung 2 =

6 / 0464 , 9 15,6473 = 4,2368

t hitung 3 =

6 / 9,0464

2,9296

= 0,7932

t hitung 4 =

6 / 9,0464

6,2614

t hitung 5 = 6 / 9,0464 6,5393 = 1,6954

t hitung 6 =

6 / 9,0464

6,0330

= 1,6335

Dari hasil perhitungan di atas didapat data 2 t.hitung > t.tabel, maka tidak semua data tersebut diterima.

No Kadar

(X)

(

X−X

)

(

X−X

)

2

1 767,0212 -9,2455 85,4793

2 776,0669 -0,1998 0,0399

3 779,3987 3,1320 9,8094

4 779,6766 3,4132 11,6499

5 779,1703 2,9036 8,4309

∑X= 3.881,3337

X = 776,2667

∑= 105,4094

SD =

(

)

1 -n X -Xi 2

∑

= 1 5 105,4094 − = 5,1334

Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α = 0.01, dk = n-1 = 4, diperoleh nilai

t tabel = 4.60.

Data diterima jika t hitung< t tabel. t hitung =

n SD X Xi / −

t hitung 1 =

5 / 5,1334 9,2455 = 4,0273

t hitung 2 =

5 / 1334 , 5 0,1998 = 0,0870

t hitung 3 =

5 / 5,1334

3,1320

t hitung 4 =

5 / 5,1334

3,4132

= 1,4868

t hitung 5 =

5 / 5,1334

2,9036

= 1,2648

Dari hasil perhitungan di atas didapat semua t hitung < t tabel, maka semua data tersebut diterima.

Kadar Natrium Sakarin dalam sirup KAPTEN: µ = X ± (t _{(α/2, dk)} x SD / √n )

= 776,2667 mg/kg± (4,60 x 5,1334 / √5 ) = (776,2667 ± 10,5603) mg/kg

sebenarnya dari penyuntikanSirup PIRAMID UNTA

No Kadar

(X)

(

X−X

)

(

X−X

)

2

1 622,1010 11,1856 125,1177

2 620,2047 9,2893 86,2911

3 618,1618 7,2464 52,5103

4 600,0677 -10,8477 117,6726

5 594,2394 -16,676 278,0889

6 610,7176 -0,1978 0,0391

∑X= 3665,4922

X = 610,9154

∑= 659,7197

SD =

(

)

1 -n X -Xi 2

∑

= 1 6 659,7197 − = 11,4867

Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α = 0.01, dk = n-1 = 5, diperoleh nilai

t tabel = 4,03.

Data diterima jika t hitung< t tabel. t hitung =

n SD X Xi / −

t hitung 1 =

6 / 11,4867

11,1856

= 2,3853

t hitung 2 =

6 / 4867 , 11 9,2893 = 1,9809

t hitung 3 =

6 / 11,4867

7,2464

= 1,5453

t hitung 4 =

6 / 11,4867 10,8477 = 2,3132

t hitung 5 =

6 / 11,4867

16,676

= 3,5561

t hitung 6 =

6 / 11,4867

0,1978

= 0,0422

Dari hasil perhitungan di atas didapat semua t.hitung < t.tabel, maka semua data tersebut diterima.

Kadar Natrium Sakarin dalam sirup PIRAMID UNTA: µ = X ± (t _{(α/2, dk)} x SD / √n )

= 610,9154 mg/kg± (4,03 x 11,4867 / √6 ) = (610,9154 ± 18,9082) mg/kg

Lampiran 18. Analisis data statistik untuk mencari kadar Natrium Sakarin sebenarnya dari penyuntikanSirup POHON PINANG

No Kadar

(X)

(

X−X

)

(

X−X

)

2

1 938,3690 95,9272 9.202,0277

2 1.033,7836 0,5126 0,2628

3 1.026,2785 8,0177 64,2835

4 1.035,7042 1,408 1,9825

5 1.046,2596 11,9634 143,1229

6 1.125,3824 91,0862 8.296,6958

∑X= 6.205,7773

X =1.034,2962

∑= 17.708,3752

SD =

(

)

1 -n X -Xi 2

∑

= 1 6 2 17.708,375 − = 59,5119

Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α = 0.01, dk = n-1 = 5, diperoleh nilai

t tabel = 4,03.

Data diterima jika t hitung< t tabel. t hitung =

n SD X Xi / −

t hitung 1 =

6 / 59,5119

95,9272

= 3,9483

t hitung 2 =

6 / 5119 , 59 0,5126 = 0,02109

t hitung 3 =

6 / 59,5119

8,0177

= 0,3300

t hitung 4 =

6 / 59,5119

1,408

t hitung 5 =

6 / 59,5119

11,9634

= 0,4924

t hitung 6 =

6 / 59,5119

91,0862

= 3,7491

Dari hasil perhitungan di atas didapat semua t.hitung < t.tabel, maka semua data tersebut diterima.

Kadar Natrium Sakarin dalam sirup POHON PINANG: µ = X ± (t _{(α/2, dk)} x SD / √n )

= 1.034,2962 mg/kg± (4,03 x 59,5119 / √6 ) = (1.034,2962 ± 97,9624) mg/kg

1. SirupABC

No. Batch : MD 149310242310 Tgl.Kadaluwarsa: 20 Januari 2014

Komposisi : Air, Gula, Pengatur Keasaman, Perisa Jeruk,

pemanis buatan Natrium Siklamat 0,7 g/kg minuman siap saji,pengawet Natrium benzoat, pewarna

Tartrazin Cl 15985, sari buah jeruk. 2. SirupJAMES

No. Batch : MD 149402005121 Tgl.Kadaluwarsa: -

Komposisi : Gula pasir, Food Colour, Essence, Sodium Cyclamate

3. SirupKAPTEN

No. Batch : MD 209121212467 Tgl.Kadaluwarsa: 31 Agustus 2014

Komposisi : Air, Na. Benzoat, Na. Siklamat, Asam Sitrat, Aroma Lychee, Pewarna Makanan Tartrazin Cl 19140 4. SirupPIRAMID UNTA

No. Batch : MD 149402017027 Tgl.Kadaluwarsa: 15 Oktober 2014

Komposisi : Air, Gula, Natrium Benzoat, Asam sitrat, Aroma Melon, Pewarna Cl No.19140/Cl No. 42090 5. SirupPOHON PINANG

No. Batch : MD 149402017027 Tgl.Kadaluwarsa: 16 Juli 2014

Komposisi : Air, Gula pasir, Sari Marquisa, Na. Benzoat, Na. Siklamat, Asam sitrat, FCF Cl 15985

Gambar 21.Alat KCKT (Shimadzu)

Gambar 22. Syringe KCKT

Gambar 23.Sonifikator (Branson 1510)

Gambar24. Pompa Vakum (Gast DO A-PG04-BN) dan alat penyaring fase gerak

Gambar 25.Sonifikator Kudos

Gambar 21.Alat KCKT (Shimadzu)

Gambar 22. Syringe KCKT

Gambar 23.Sonifikator (Branson 1510)

Gambar24. Pompa Vakum (Gast DO A-PG04-BN) dan alat penyaring fase gerak

Gambar 25.Sonifikator Kudos