BAB IV METODOLOGI PENELITIAN
4.1. Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian dilaksanakan pada bulan Juni hingga Agustus 2010 dan bertempat di Laboratorium Biosain, Puslit biologi, LIPI Cibinong, Bogor.
4.2. Pengambilan Sampel
Sampel daun sirih Piper betle Linn. diambil dari tanaman yang terdapat di BALITRO Balai Tanaman Obat dan Rempah, Cimanggu,
Bogor. Waktu pengambilan sampel dilakukan pada bulan Mei 2010.
4.3. Determinasi Tanaman
Sampel daun sirih diidentifikasi di Herbarium Bogoriense Bidang Botani, Puslit biologi, LIPI Cibinong, Bogor.
4.4. Alat dan Bahan
1. Alat Alat yang digunakan dalam penelitian ini antara lain perangkat
distilasi uap dan air, cawan petri, inkubator, neraca analitik, Laminar Air Flow LAF, autoklaf, jarum ose, mikropipet, microplate, oven, tabung
reaksi, rak tabung reaksi, spektrofotometer Uv-Vis Perkin Elmer, spektrofotometer AAS Perkin Elmer a Analist 700, Gas Chromatography-
Mass Spectrophotometer GC-MS Varian Saturn 2000, Scanning Eletron Microscope SEM JEOL seri JSM-5310 LV, refrigerator, pipet tetes,
erlenmeyer, vial, ependrof, inkubator, inkubator shaker, vortek dan sentrifus.
2. Bahan Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun sirih Piper
bettle Linn., aquadest, NaSO
4
anhidrat, tween 80, aquadest steril, Blood Agar Base, Nutrient Agar, Mueller Hinton Agar, Mueller Hinton Broth,
darah kambing steril, dapar fosfat pH 7,4; cacodylate buffer, glutaraldehid 2,5, alkohol 50, alkohol 70, alkohol 80, alkohol 95, alkohol
96, tannin acid, terbutanol dan osmium tetraoksida 1. 3. Bakteri Uji
Bacillus subtilis, Staphylococcus epidermidis dan Steptococcus mutan.
4.5. Metode Penelitian Kegiatan yang dilakukan untuk mencapai sasaran :
1. Isolasi fraksi minyak atsiri daun sirih
2. Identifikasi komponen kimia fraksi minyak atsiri daun sirih
3. Pengujian aktivitas antibakteri fraksi minyak atsiri daun sirih
a. Sterilisasi alat dan bahan
b. Pembuatan medium
c. Pembiakan bakteri uji
d. Pembuatan suspensi bakteri uji
e. Pembuatan larutan uji
f. Penentuan Minimum Inhibitor Concentration MIC
4. Analisis protein dan asam nukleat
5. Analisis ion logam Ca
2+
dan K
+
6. Analisis Perubahan Morfologi Sel dengan Scanning Electron
Microscope SEM
4.6. Prosedur Kerja 4.6.1. Isolasi Fraksi Minyak Atsiri Daun Sirih