19
Percobaan 1. Isolasi dan Identifikasi Kapang Entomopatogen
Lagenedium giganteum dari larva Nyamuk asal Daerah Sekitar Desa Cikarawang Bogor Sebagai
Kandidat Agen Pengendali Hayati METODE PENELITIAN
1. Pengambilan Sampel Larva Nyamuk
Larva nyamuk diambil dari persawahan yang sudah ditinggalkan didaerah sekitar Cikarawang, Kabupaten Bogor. Pengambilan sampel dilakukan dengan
menggunakan ciduk dan diambil secara acak. Waktu pengambilan dilaksanakan sampai 7 kali. Larva yang sudah diambil dimasukkan dalam tempat yang terbuat
dari plastik polietilen yang diisi air. Selanjutnya sampel larva dibawa ke Laboratorium untuk dilakukan isolasi dan identifikasi terhadap kapang.
2. Isolasi Kapang dari Larva Nyamuk
Larva asal lapangan dicuci bersih dengan menggunakan larutan NaCl fisiologis dan kemudian dicuci ulang menggunakan larutan Hipoklorit 0,5 .
Pencucian ini bertujuan untuk menghilangkan kontaminan-kontaminan yang tidak diinginkan. Larva kemudian dihancurkan menggunakan penggerus kaca steril dan
kemudian dibiakkan ke dalam lempengan agar Sabaurauds Dextrose Agar SDA yang sudah ditambah Antibiotika 0,2. Biakan kemudian diinkubasi pada suhu
25 C dalam ruangan gelap selama 7-14 hari. Setelah koloni kapang tumbuh
dilakukan pengamatan makroskopis koloni dengan cara melihat gambaran bentuk dari koloni, sifat pertumbuhan, warna koloni, ukuran , topografi dan
tekstur koloni. Selanjutnya dilakukan pemeriksaan mikroskopis untuk melihat gambaran morfologi dengan menggunakan bantuan mikroskop. Metode yang
20 digunakan untuk pemeriksaan morfologi ini adalah dengan metode secara natif,
dan untuk melihat morfologi secara jelas, koloni kapang yang terbentuk dibiakkan kembali dengan metode Slide culture Riddel pada suhu 25
o
C selama 10 hari. Dalam pengamatan secara mikroskopis menggunakan Lactophenol Cotton Blue
sebagai bahan pewarnaan.
3. Pemurnian Isolat Kapang
Isolat kapang yang tumbuh di media SDA, masing-masing dikelompokkan berdasarkan morfologi baik secara makroskopik dan mikroskopik. Selanjutnya
masing-masing isolat dimurnikan dengan menginokulasikan kembali pada media agar lempeng SDA yang ditambah antibiotik dan diinkubasi pada suhu kamar
selama 3-10 hari.
4. Identifikasi Kapang
