dilarutkan kemudian ditambahkan kedalam larutan media., kemudian dilakukan pengukuran pH menggunakan digital pH meter sampai 5,8-6.
Larutan media dituangkan kedalam labu ukur untuk di tera dengan ditambahkan aquades steril sampai tepat 1000 ml atau 1 liter. Sebagai bahan
pemadat, sebanyak 5 gram pytagel ditambahkan kedalam larutan media. Larutan media dididihkan menggunakan hotplate sampai mendidih, kemudian
menuangkannya kedalam 40 botol kultur dengan volume yang sama setiap botolnya yaitu sekitar 25 ml media. Botol kultur yang sudah berisi media
kemudian ditutup dengan menggunakan aluminium foil. Media disterilisasi menggunakan otoklaf selama 25-30 menit, kemudian disimpan sampai media
memadat.
Percobaan II. Pengujian Strain Methylobacterium spp. Penghasil Sitokinin
TD-J
2
dan TD-J
7
untuk Meningkatkan Multiplikasi Tunas Tanaman Nilam dalam Kultur
In Vitro
Media kontrol pada Percobaan II terdiri dari media MS, MS+BAP 0,1 mgl, media MS+Zeatin 0,1 mgl, dan media AMS padat.
A. Pembuatan Media MS
Langkah-langkah pembuatan media MS dijelaskan pada sub judul Pembuatan Media Kontrol Percobaan I poin A.
B. Pembuatan media MS+BAP 0,1 mgl
Langkah-langkah pembuatan media MS+BAP 0,1 mgl dijelaskan pada sub judul Pembuatan Media Kontrol Percobaan I poin B.
C. Pembuatan media MS+Zeatin 0,1 mgl
Langkah-langkah pembuatan media MS+Zeatin 0,1 mgl adalah dengan diawali pembuatan media MS terlebih dahulu. Pembuatan media MS dibuat
dengan cara memipet bahan-bahan media MS yang telah dibuat dalam larutan-larutan stok sesuai konsentrasinya dan memasukkannya kedalam gelas
kimia volume 1 liter. Komposisi media MS disajikan pada Lampiran 3. Sebanyak 30 gram gula pasir dan aquades steril sebanyak 700 ml ditambahkan kedalamnya.
Langkah selanjutnya, larutan dikocok menggunakan magnetik stirer sampai benar-benar larut, kemudian dilakukan pengukuran pH menggunakan
digital pH meter sampai mencapai pH 5,8-6. Larutan media dituangkan kedalam gelas ukur untuk ditera dengan ditambahkan aquades steril sampai tepat 999 ml.
Larutan media dituangkan kembali kedalam labu erlenmeyer. Sebagai bahan pemadat, sebanyak 5 gram pytagel ditambahkan kedalam larutan media,
kemudian menutupnya dengan aluminium foil. Larutan media disterilisasi mengunakan otoklaf selama 25-30 menit.
Langkah ketiga adalah menambahkan zeatin yang sudah dilarutkan dan dibuat stok dengan dosis uptake 1 mlliter serta sudah disterilisasi sebanyak 1 ml
kedalam media MS steril. Kegiatan ini dilakukan secara aseptik didalam laminar air flow cabinet
segera setelah larutan media MS selesai disterilisasi dalam otoklaf. Kegiatan ini harus dilakukan dengan cepat sebelum media MS dingin dan
memadat dalam labu erlenmeyer. Larutan media dikocok sebentar sampai larut, kemudian dituangkan kedalam 40 botol kultur dengan volume yang sama yaitu
sekitar 25 ml per botol kultur. Botol kultur yang sudah diisi media MS+10 TD-J
7
ini kemudian ditutup menggunakan aluminium foil dan disimpan diruang media sampai media menjadi padat.
D. Pembuatan media AMS Padat