Pembuatan media MS Pembuatan media MS+BAP 0,1 mgl

Pembuatan Media Kontrol Percobaan I. Uji Efektivitas Teknik Sterilisasi Isolat Methylobacterium spp. untuk Kultur In Vitro Tanaman Nilam Media kontrol pada Percobaan I terdiri dari media MS, MS+BAP 0,1 mgl, media MS+IAA 0,1 mgl, dan MS+NAA 0,1 mgl. Cara pembuatan media yang akan dijelaskan adalah cara pembuatan media MS dan media MS+BAP 0,1 mgl . Cara pembuatan media MS+IAA 0,1 mgl, dan MS+NAA 0,1 mgl dilakukan dengan cara yang sama dengan cara pembuatan media MS+BAP 0,1 mgl . Perbedaannya hanya pada jenis ZPT yang ditambahkan saja yaitu IAA dan NAA.

A. Pembuatan media MS

Langkah-langkah pembuatan media MS adalah dengan cara memipet bahan-bahan media MS yang telah dibuat dalam larutan-larutan stok sesuai konsentrasinya dan memasukkannya kedalam gelas kimia volume 1 liter. Komposisi media MS disajikan pada Lampiran 3. Sebanyak 15 gram gula pasir dan aquades steril sebanyak 300 ml ditambahkan kedalamnya. Larutan dikocok menggunakan magnetik stirer sampai benar-benar larut, kemudian dilakukan pengukuran pH menggunakan digital pH meter sampai 5,8-6. Larutan media dituangkan kedalam labu ukur untuk ditera dengan ditambahkan aquades steril sampai tepat 500 ml. Sebagai bahan pemadat, sebanyak 2,5 gram pytagel ditambahkan kedalam larutan media. Larutan media dididihkan menggunakan hotplate sampai mendidih, kemudian menuangkannya kedalam 20 botol kultur dengan volume yang sama setiap botolnya yaitu sekitar 25 ml media. Botol kultur yang sudah berisi media kemudian ditutup dengan menggunakan aluminium foil. Media disterilisasi mengunakan otoklaf selama 25-30 menit, kemudian disimpan sampai media memadat. B. Pembuatan media MS+BAP 0,1 mgl Langkah-langkah pembuatan media MS+BAP 0,1 mgl adalah dengan cara memipet bahan-bahan media MS yang telah dibuat dalam larutan-larutan stok sesuai konsentrasinya dan memasukkannya kedalam gelas kimia volume 1 liter. Komposisi media MS disajikan pada Lampiran 3. Sebanyak 30 gram gula pasir dan aquades steril sebanyak 700 ml ditambahkan kedalamnya. Larutan dikocok menggunakan magnetik stirer sampai benar-benar larut. Sebanyak 0,1 mgl BAP dilarutkan kemudian ditambahkan kedalam larutan media., kemudian dilakukan pengukuran pH menggunakan digital pH meter sampai 5,8-6. Larutan media dituangkan kedalam labu ukur untuk di tera dengan ditambahkan aquades steril sampai tepat 1000 ml atau 1 liter. Sebagai bahan pemadat, sebanyak 5 gram pytagel ditambahkan kedalam larutan media. Larutan media dididihkan menggunakan hotplate sampai mendidih, kemudian menuangkannya kedalam 40 botol kultur dengan volume yang sama setiap botolnya yaitu sekitar 25 ml media. Botol kultur yang sudah berisi media kemudian ditutup dengan menggunakan aluminium foil. Media disterilisasi menggunakan otoklaf selama 25-30 menit, kemudian disimpan sampai media memadat. Percobaan II. Pengujian Strain Methylobacterium spp. Penghasil Sitokinin TD-J 2 dan TD-J 7 untuk Meningkatkan Multiplikasi Tunas Tanaman Nilam dalam Kultur In Vitro Media kontrol pada Percobaan II terdiri dari media MS, MS+BAP 0,1 mgl, media MS+Zeatin 0,1 mgl, dan media AMS padat.

A. Pembuatan Media MS