Pembuatan Media Kontrol Percobaan I. Uji Efektivitas Teknik Sterilisasi Isolat
Methylobacterium spp. untuk Kultur
In Vitro Tanaman Nilam
Media kontrol pada Percobaan I terdiri dari media MS, MS+BAP 0,1 mgl, media MS+IAA 0,1 mgl, dan MS+NAA 0,1 mgl. Cara pembuatan media yang
akan dijelaskan adalah cara pembuatan media MS dan media MS+BAP 0,1 mgl
.
Cara pembuatan media MS+IAA 0,1 mgl, dan MS+NAA 0,1 mgl dilakukan dengan cara yang sama dengan cara pembuatan media MS+BAP 0,1 mgl
.
Perbedaannya hanya pada jenis ZPT yang ditambahkan saja yaitu IAA dan NAA.
A. Pembuatan media MS
Langkah-langkah pembuatan media MS adalah dengan cara memipet bahan-bahan media MS yang telah dibuat dalam larutan-larutan stok sesuai
konsentrasinya dan memasukkannya kedalam gelas kimia volume 1 liter. Komposisi media MS disajikan pada Lampiran 3. Sebanyak 15 gram gula pasir
dan aquades steril sebanyak 300 ml ditambahkan kedalamnya. Larutan dikocok menggunakan magnetik stirer sampai benar-benar larut, kemudian dilakukan
pengukuran pH menggunakan digital pH meter sampai 5,8-6. Larutan media dituangkan kedalam labu ukur untuk ditera dengan
ditambahkan aquades steril sampai tepat 500 ml. Sebagai bahan pemadat, sebanyak 2,5 gram pytagel ditambahkan kedalam larutan media. Larutan media
dididihkan menggunakan hotplate sampai mendidih, kemudian menuangkannya kedalam 20 botol kultur dengan volume yang sama setiap botolnya yaitu sekitar
25 ml media. Botol kultur yang sudah berisi media kemudian ditutup dengan menggunakan aluminium foil. Media disterilisasi mengunakan otoklaf selama
25-30 menit, kemudian disimpan sampai media memadat.
B. Pembuatan media MS+BAP 0,1 mgl
Langkah-langkah pembuatan media MS+BAP 0,1 mgl adalah dengan cara memipet bahan-bahan media MS yang telah dibuat dalam larutan-larutan stok
sesuai konsentrasinya dan memasukkannya kedalam gelas kimia volume 1 liter. Komposisi media MS disajikan pada Lampiran 3. Sebanyak 30 gram gula pasir
dan aquades steril sebanyak 700 ml ditambahkan kedalamnya. Larutan dikocok menggunakan magnetik stirer sampai benar-benar larut. Sebanyak 0,1 mgl BAP
dilarutkan kemudian ditambahkan kedalam larutan media., kemudian dilakukan pengukuran pH menggunakan digital pH meter sampai 5,8-6.
Larutan media dituangkan kedalam labu ukur untuk di tera dengan ditambahkan aquades steril sampai tepat 1000 ml atau 1 liter. Sebagai bahan
pemadat, sebanyak 5 gram pytagel ditambahkan kedalam larutan media. Larutan media dididihkan menggunakan hotplate sampai mendidih, kemudian
menuangkannya kedalam 40 botol kultur dengan volume yang sama setiap botolnya yaitu sekitar 25 ml media. Botol kultur yang sudah berisi media
kemudian ditutup dengan menggunakan aluminium foil. Media disterilisasi menggunakan otoklaf selama 25-30 menit, kemudian disimpan sampai media
memadat.
Percobaan II. Pengujian Strain Methylobacterium spp. Penghasil Sitokinin
TD-J
2
dan TD-J
7
untuk Meningkatkan Multiplikasi Tunas Tanaman Nilam dalam Kultur
In Vitro
Media kontrol pada Percobaan II terdiri dari media MS, MS+BAP 0,1 mgl, media MS+Zeatin 0,1 mgl, dan media AMS padat.
A. Pembuatan Media MS