14 Tabung yang positif dari setiap kelompok pengenceran dicatat dan
hasilnya dalam bentuk nilai MPN100 mL ditentukan berdasarkan angka yang tertera dalam tabel MPN Nugroho, 2006.
Selain metode MPN terdapat metode lain yaitu metode hitungan cawan, di mana media yang digunakan adalah media padat. Dalam metode MPN media
yang digunakan adalah media cair di dalam tabung reaksi. Dalam metode MPN, pengenceran harus dilakukan lebih tinggi daripada pengenceran dalam hitungan
cawan Fardiaz, 1992.
2.4.1 Uji Penduga Presumtif Test
Merupakan uji spesifik untuk mendeteksi bakteri koliform. Di sini uji penduga menggunakan sistem 5-5-5 tabung. Air yang akan diuji ditambahkan ke
dalam kaldu fermentasi laktosa yang didalamnya diberi sebuah tabung durham terbalik. Tabung-tabung berisi media laktosa ini diinkubasikan dengan sampel air
sebanyak 10 mL, 1 mL, dan 0,1 mL. Gas yang terbentuk di dalam tabung durham merupakan petunjuk terhadap dugaan adanya bakteri koliform di dalam sampel
Cappuccino dan Sherman, 2013. Media yang digunakan adalah kaldu laktosa Lactose Broth. Tes ini
dikatakan positif jika setelah diinkubasi dengan suhu 35
o
C selama 24 jam, laktosa yang telah difermentasi akan berubah warna dan terbentuk gas yang ditampung
oleh tabung durham yang diletakkan terbalik Nugroho, 2006. Uji pendugaan dapat menggunakan nilai duga terdekat MPN Most
Probable Number, yang ditentukan dengan menghitung jumlah tabung setiap kelompok yang menunjukan adanya gas setelah diinkubasi. Tabung yang tidak
menunjukan pembentukan gas inkubasinyadiperpanjang sampai 48 jam. Jika
Universitas Sumatera Utara
15 tetap tidak terbentuk gas, dihitung sebagai tabung negatif. Jumlah tabung yang
positif dihitung pada masing-masing seri. MPN penduga dapat dihitung dengan melihat tabel MPN 5-5-5 tabung Cappuccino dan Sherman, 2013.
2.4.2 Uji Penegas Confirmed Test
Merupakan uji lanjutan dari uji penduggan. Dari tabung yang positif pada uji pendugaan, dilakukan uji menggunakan media BGLB Brilliant green lactose
broth yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri gram positif dan sebaliknya, dapat mempercepat pertumbuhan bakteri gram negatif seperti koliform Nugroho,
2006. Semua tabung yang mengandung gas dalam kaldu laktosa harus diperiksa
ulang untuk menyakinkan bahwa gas itu dihasilkan oleh fermentasi laktosa. Hal ini dilakukan dengan memindahkan media sebanyak satu lingkaran jarum ose dari
tabung dalam uji pendugaan yang menunjukkan gas ke dalam tabung fermentasi yang berisi kaldu laktosa yang hijau berkilauan. Tabung-tabung tersebut di
inkubasi pada suhu 35
o
C 24 jam, dan pembentukan gas dapat dilihat dari tabung durham yang terbalik dari fermentasi kaldu laktosa Volk dan Wheeler, 1989.
2.4.3 Uji Pelengkap Completed Test
