Gambar 4.1 : Grafik Massa Sel Kering Gram Vs Lama Inkubasi Hari pada Kurva
pertumbuhan Mucor miehei.
4.2. Isolasi Crude Lipase
Untuk menghasilkan crude lipase, dilakukan beberapa tahap antara lain perbanyakan biomassa. Perbanyakan biomassa diharapkan dapat digunakan
sebagai starter untuk pembuatan crude lipase. Perbanyakan biomassa ini dilakukan dengan menambahkan Mucor miehei pada media cair dan dilakukan
inkubasi selama 4 hari pada incubator shaker dengan suhu 54
o
C. Pembuatan starter
dilakukan selama 4 hari karena pada hari keempat Mucor miehei mengalami fase log.
Starter yang telah dihasilkan di tuang pada media cair sebanyak 10
dari jumlah media kemudian diinkubasi selama 5 hari. Lamanya inkubasi sesuai dengan fase stasioner dimana pada fase tersebut terjadi pengurangan
sumber nutrien serta faktor –faktor yang terkandung di dalam jasadnya sendiri,
maka sampailah puncak aktivitas pertumbuhan kepada titik yang tidak bisa dilampaui lagi selain itu pada fase ini menghasilkan metabolit sekunder
Budiyanto,2010. Metabolit sekunder adalah hasil metabolisme sel yang tidak
Hak Cipta © milik UPN Veteran Jatim : Dilarang mengutip sebagian atau seluruh karya tulis ini tanpa mencantumkan dan menyebutkan sumber.
berpengaruh pada pada pertumbuhan dan reproduksi sel itu sendiri Rulianah, 2005.
Hasil dari produksi crude lipase diisolasi dengan menggunakan metode sentrifugasi. crude ipase di sentrifugasi selama 10 menit dengan kecepatan
3000 rpm. Hasil dari sentrifugasi terdiri atas supernatant dan biomass. Supernatant
kemudian dipisahkan dari endapannya dan diiuji aktivitasnya dengan metode titimetri.
4.3. Uji Aktivitas Crude Lipase Hasil Isolasi
Uji aktivitas crude lipase hasil isolasi dilakukan dengan menggunakan metode titrimetri. Substrat yang digunakan dalam penelitian ini adalah minyak
randu dan titran yang digunakan adalah NaOH 0,5 N yang berfungsi untuk menentukan jumlah asam lemak yang dibebaskan selama reaksi. Satu unit U
crude lipase didefinisikan sebagai jumlah enzim yang diperlukan untuk
membebaskan 1µ mol asam lemak per ml per menit dari triasilgliserol Rahim, 2003.
Uji aktivitas crude lipase ini dilakukan pada kondisi optimum crude lipase yaitu pada suhu 40
o
C dan pH 7. Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa aktivitas crude lipase yang diperoleh sebesar 100 Uml crude lipase.
4.4. Amobilisasi Crude Lipase Menggunakan PUF dan Uji Aktivitas.
