3.3. Prosedur Kerja 3.3.1.
Cara Pembuatan Media Potato Dextrose
Kentang diiris tipis dan direbus dalam aquades 1000 ml selama 1 jam kemudian disaring dengan kain saring. Dan ditambahkan dekstrosa ke dalam
filtrat dan dipanaskan hinga larut, ditambahkan air lagi untuk mengganti yang menguap. Selanjutnya, dimasukan ke dalam erlenmeyer dan di sterilkan dalam
autoklaf dalam suhu 121
o
C, ±30 menit.
3.3.2. Peremajaan Mikroorganisme
Media PDA dalam bentuk agar miring disiapkan, kemudian dalam keadaan steril dua lup ose dari biakan murni Mucor miehei dimasukan ke dalam
agar miring tersebut dan diinkubasi kembali dengan kondisi yang sama seperti
pada saat inkubasi biakan murni. 3.3.3. Pembuatan Starter Inokulum
Dua ml air steril dituang pada biakan murni Mucor miehei dan dikocok. Campuran tersebut di tuang ke dalam beaker 50 ml dan dilakukan pengulangan.
Campuran yang telah di dapat diencerkan hingga 10 ml dan dituang pada 100 ml media cair steril. Kemudian diinkubasi di dalam shaker incubator selama 4 hari
pada suhu 54
o
C.
3.3.4. Produksi Crude Lipase
Larutan inokulum dipindahkan pada 800 ml media cair sebanyak 3-10 dari 800 ml media cair fermentasi. Media cair diinkubasi selama 5 hari sesuai
dengan kurva pertumbuhan.
3.3.5. Isolasi Crude Lipase
Crude lipase dari biakan Mucor miehei dalam media fermentasi diisolasi
dengan metode sentrifugasi pada kecepatan 3000 rpm selama ± 10 menit. Supernatan yang diperoleh mengandung crude lipase murni dan di uji aktifitasnya.
3.3.6. Cara Pembuatan PUF
Polyol sebanyak 100 gram dimasukkan kedalam wadah pengaduk,
ditambah dengan air, surfaktan, katalis basa, katalis logam dan filler dengan volume tertentu. TDI ditambahkan kedalam tangki pengaduk dan diaduk
Hak Cipta © milik UPN Veteran Jatim : Dilarang mengutip sebagian atau seluruh karya tulis ini tanpa mencantumkan dan menyebutkan sumber.
selama 3 detik. Setelah itu EDA dituang kedalam tangki pengaduk dan diaduk lagi selama 5 detik.
3.3.7. Cara Pengimmobilisasian Crude Lipase pada PUF
PUF direndam dalam co - immobilizer lalu dikeringkan pada suhu ruang. Setelah itu crude lipase ditambahkan pada PUF.
3.3.8. Penentuan Efisiensi Crude Lipase Amobil
