Embriogenesis Somatik dari Salak Padangsidempuan (Salacca sumatrana Becc.) pada Media MS Diperkaya dengan Lisin

LAMPIRAN

Lampiran 1. Komposisi Media MS (Murashige & Skoog, 1962)

Bahan Kimia Konsentrasi dalam Media (mg/L) Makro Nutrien

NH4NO3

KNO3

CaCl2.2H2O

MgSO4.7H2O

KH2PO4

1.650,000 1.900,000 440,000 370,000 170,000 Iron

Na2EDTA

FeSO4.7H2O

37,300 27,800 Mikro Nutrien

MnSO4.4H2O

ZnSO4.4H2O

H3BO3

KI

Na2MoO4.2H2O

CuSO4.5H2O

CoCl2.6H2O

22,300 8,600 6,200 0,830 0,250 0,025 0,025 Vitamin Myo-inositol Glisin Niasin Piridoksin-HCl Tiamin-HCl 100,000 2,000 0,500 0,500 0,100 Sukrosa Agar 30.000,000 7.000,000

Lampiran 2. Data Pengamatan Awal Pertumbuhan Kultur (hari)

Perlakuan Ulangan Rata-

Rata

Lisin 1 2 3 4 5 6 7

0 mg/L 10 – 8 20 14 20 20 13,14ac

10 mg/L 8 – 9 8 9 8 20 8,85b

20 mg/L 14 12 10 14 12 14 15 13abc

30 mg/L 12 15 9 12 8 10 10 10,85b

40 mg/L 10 17 8 8 12 – 20 12,5abc

50 mg/L 12 20 14 12 20 – 20 15,6c

Jumlah eksplan yang tumbuh Jumlah seluruh eksplan 38

42 = 90,47 %

Analisis Statistik Descriptives

N Mean Std.

Deviation

Std. Error

95% Confidence Interval for Mean

Min Max

Lower Bound

Upper Bound

L1 7 15.0204 5.05711 1.91141 10.3434 19.6974 8.00 20.0 L2 7 10.1224 4.38181 1.65617 6.0699 14.1749 8.00 20.0 L3 7 13.0000 1.73205 .65465 11.3981 14.6019 10.0 15.0 L4 7 10.8571 2.34013 .88448 8.6929 13.0214 8.00 15.0 L5 7 12.2449 4.58681 1.73365 8.0028 16.4870 8.00 20.0 L6 7 16.0000 3.82971 1.44749 12.4581 19.5419 12.0 20.0 Total 42 12.8741 4.18693 .64606 11.5694 14.1789 8.00 20.0 Keterangan: L0 = 0 mg/L L3 = 30 mg/L

L1 = 10 mg/L L4 = 40 mg/L

L2 = 20 mg/L L5 = 50 mg/L ANOVA

Sum of Squares df Mean Square F Sig.

Between Groups 185.006 5 37.001 2.496 .049

Within Groups 533.738 36 14.826

Total 718.744 41

Uji Duncan 5%

Konsentrasi Lisin N Subset

1 2 3

10 mg/L 7 10.1224

30 mg/L 7 10.8571 10.8571

40 mg/L 7 12.2449 12.2449 12.2449

20 mg/L 7 13.0000 13.0000 13.0000

0 mg/L 7 15.0204 15.0204

50 mg/L 7 16.0000

Sig. .211 .071 .103

x 100% Persentase Kemampuan Tumbuh Eksplan =

x 100% =

Lampiran 3. Data Tipe Proliferasi Kultur

Perlakuan Ulangan

Lisin 1 2 3 4 5 6 7

0 mg/L Eksplan Membesar - Eksplan Membesar Tunas Kalus Remah Kalus Remah Tunas

10 mg/L Akar - Tunas Eksplan Membesar Eksplan Membesar Kalus Remah Kalus Embriogenik 20 mg/L Eksplan Membesar Akar Kalus Embriogenik Eksplan Membesar Eksplan Membesar Eksplan Membesar Eksplan Membesar 30 mg/L Eksplan Membesar Eksplan Membesar Kalus Embriogenik Kalus Embriogenik Eksplan Membesar Eksplan Membesar Eksplan Membesar 40 mg/L Akar Kalus Embriogenik Kalus Embriogenik Kalus Embriogenik Eksplan Membesar - Eksplan Membesar 50 mg/L Eksplan Membesar Eksplan Membesar Akar Kalus Embriogenik Eksplan Membesar - Eksplan Membesar

Persentase Eksplan Membesar = Jumlah Eksplan Membesar Jumlah Seluruh Kultur = 20

38 = 52,63%

Persentase Kalus = Jumlah Kalus Jumlah Seluruh Kultur = 11

38 = 28,95%

Persentase Akar = Jumlah Akar Jumlah Seluruh Kultur = 4

38 = 10,52%

Persentase Tunas = Jumlah Tunas Jumlah Seluruh kultur = 3

38 = 7,9%

Lampiran 4. Data Berat Basah Kultur (gram)

Perlakuan Ulangan Rata-rata

Lisin 1 2 3 4 5 6 7

0 mg/L 0,2 – 0,12 0,14 0,17 0,11 0,14 0,14a 10 mg/L 0,3 – 0,28 0,14 0,47 0,22 0,29 0,27b 20 mg/L 0,14 0,15 0,19 0,11 0,14 0,18 0,11 0,15a 30 mg/L 0,22 0,26 0,3 0,14 0,15 0,21 0,2 0,21ab 40 mg/L 0,21 0,43 0,22 0,46 0,12 – 0,1 0,25ab 50 mg/L 0,12 0,11 0,14 0,46 0,1 – 0,21 0,18ab

Analisis Statistik Descriptives

N Mean Std.

Deviation

Std. Error

95% Confidence Interval for Mean

Min Max

Lower Bound

Upper Bound

L0 7 .1429 .03200 .01209 .1133 .1724 .11 .20

L1 7 .2771 .10111 .03822 .1836 .3707 .14 .47

L2 7 .1457 .03101 .01172 .1170 .1744 .11 .19

L3 7 .2114 .05669 .02143 .1590 .2639 .14 .30

L4 7 .2514 .14100 .05329 .1210 .3818 .10 .46

L5 7 .1857 .12647 .04780 .0687 .3027 .10 .46

Total 42 .2024 .10043 .01550 .1711 .2337 .10 .47 Keterangan: L0 = 0 mg/L L3 = 30 mg/L

L1 = 10 mg/L L4 = 40 mg/L

L2 = 20 mg/L L5 = 50 mg/L

ANOVA

Sum of Squares df Mean Square F Sig.

Between Groups .106 5 .021 2.474 .050

Within Groups .308 36 .009

Total .414 41

Uji Duncan 5%

Konsentrasi Lisin N

Subset

1 2

0 mg/L 7 .1429

20 mg/L 7 .1457

50 mg/L 7 .1857 .1857

30 mg/L 7 .2114 .2114

40 mg/L 7 .2514 .2514

10 mg/L 7 .2771

Lampiran 5. Data Kultur yang Membentuk Embrio Somatik

Perlakuan Ulangan

Lisin 1 2 3 4 5 6 7

0 mg/L – –

10 mg/L – √

20 mg/L √

30 mg/L √ √

40 mg/L √ √ √

50 mg/L √

Jumlah kalus embriogenik Jumlah seluruh kalus 8

11 = 72,7 % Persentase Kalus Embriogenik =

DAFTAR PUSTAKA

Ashari, S. 2005. Meningkatkan Keunggulan Bebuahan Tropis Indonesia. Edisi Pertama. Andi. Yogyakarta.

Ashari, S. 2006. Biologi Reproduksi Tanaman Buah-buahan Komersial. Edisi Pertama. Bayumedia Publishing. Jawa Timur.

Barunawati., Nunun., Nihayati, E dan Wardiyati, T. 2006. Pengaruh Konsentrasi Sitokinin pada Regenerasi Embrio Somatik Mangga (Mangifera Indica L.). Habitat. 17(2): 152-157.

Barus, A dan Syukri. 2008. Agroteknologi Tananaman Buah-buahan. USU Press. Medan.

Bhojwani, S.S and Razdan, M.K. 1989. Plant Tissue Culture. Theory and Practise. Elsevier. New York.

Chawla, H.S. 2000. Introduction to Plant Biotechnology. Science Publishers Inc. USA.

El-Shiaty, O.H., El-Sharabasy, S.F and El-Kareim, A.H. 2004. Effect of Some Amino Acids and Biotin on Callus and Proliferation of Date Palm (Phoenix dactylifera L.) Sewy Cultiver. Arab J. Biotech. 7(2): 265-272. Federer, W.Y. 1963. Experimental Design: Theory and Application. New York.

Mac Milan.

Gardner, F. P., Pearce, R. B. and Roger, M. 2008. Fisiologi Tanaman Budidaya. UI Press. Jakarta.

George, E.F. 1996. Plant Propogation by Tissue Culture. Exegitics Limited. England.

Gunawan, L.W. 1995. Teknik Kultur In Vitro dalam Hortikultura. IPB. Bogor. Hibberd, K.A and Green, C.E. 1982. Inheritance and Expression of Lysine Plus

Treonine Resistance Selected in Maize Tissue Culture. Proc. Natl. Acod. Sci. 79: 559-563.

Jimenez, V.M. 2001. Regulation of in Vitro Somatic Embryogenesis with Emphasis on the Role of Endogenous Hormones. R. Bras. Physiol. Veg. 13(2): 196-223.

Jimenez, V.M. 2005. Involvement Of Plant Hormones And Plant Growth Regulators on in Vitro Somatic Embryogenesis. Plant Growth Regulation. 47: 110-115.

Johansen, D.A. 1940. Plant Microtechnique. First Edition. McGraw-Hill Publications in the Botanical Sciences. New York.

Lestyana, B. 2000. Multiplikasi Salak (Salacca zalacca) Secara in vitro dan Subkultur dengan Metode Kultur Terapung. [Tesis]. Bogor: Institut Pertanian Bogor.

Lingga, L. 2012. The Healing Power of Antioxidant. PT Elex Media Komputindo. Jakarta.

Lizawati. 2012. Proliferasi Kalus dan Embriogenesis Somatik Jarak Pagar (Jatropha curcas L.) dengan Berbagai Kombinasi ZPT dan Asam Amino. 1(4): 256-259.

Meilvana, N.T. 2014. Analisis Histologi Embriogenesis Somatik dari Apikal Bud Kelapa Sawit (Elaeis guineensis Jacq.) Var. Tenera. [Tesis]. Medan: Universitas Sumatera Utara, Program Pascasarjana.

Meneses, A., Flores, D., Munoz, M., Arrieta, G and Espinoza, A.M. 2005. Effect of 2,4-D Hydric Stress and Light on Indica Rice (Oryza sativa) Somatic Embryogenesis. Rev. Biol. Trop. 53: 361-368.

Necrutiu, I., Cattoir-Reynearts, A., Verbruggen, I and Jacobs, M. 1984. Lysine Overproducer Mutants with an Altered Dihydrodipicolinate Synthase from Protoplast Culture of Nicotiana sylvestris (Spegazzini and Comes). Theor Appl Genet. 68: 11-20.

Pandiangan, D. 2011. Produksi Katarantin melalui Kultur Jaringan. Lubuk Agung. Bandung.

Pongtongkam, P., Peyachoknagul, S., Sripichit, P., Thongpan, A and Klakhaeng, K. 2004. Effects of L-lysine on Callus Formation, Plant Regeneration and Flowering of Thai Rice c.v. KDML 105. Kasetsart. J. Sci. 2(5): 95-99. Purnamaningsih. 2002. Regenerasi Tanaman melalui Embriogenesis Somatik dan

Beberapa Gen yang Mengendalikannya. Buletin Agro Bio. 5(2): 51-58. Ruangsak, J and Dheeranupattana, S. 2014. Effects of L-Ornithine and L-Lysine

on Alkaloid Production from in vitro Stemona sp. Chiang Mai J. Sci. 41(2): 334-344.

Santoso, U dan Nursandi, F. 2004. Kultur Jaringan Tanaman. UMM Press. Malang.

Sirait, M. 2007. Fitokimia Dalam Farmasi. Penerbit ITB. Bandung.

Soetomo, A.H.M. 2001. Teknik Bertanam Salak. Sinar Baru Algensido. Bandung. Sondahl, M.R., Romig, W.R dan Bragin, A. 1994. Induction and Selection of

Somaclonal Variation in Coffee. United States Patent. USA.

Sriyanti, D.P. 2000. Pelestarian Tanaman Nilam (Pogostemon heyneasus Benth.) melalui Kultur Mikrostek. Biosmart 2(2): 19-22.

Tjahjadi, N. 2006. Salak. Kanisius. Yogyakarta.

Utami, E.S.W., Sumardi, I., Taryono dan Semiarti, E. 2007. Pengaruh α -Naphtaleneacetic Acid (NAA) Terhadap Embriogenesis Somatik Anggrek Bulan Phalaenopsis amabilis (L.) Bl. Biodiversitas. 8(4): 295-296.

Vijayan, K., Chakraborti, S.P. and Ray, B.N. 1998. Regeneration of Plantlets Through Callus Culture in Mulberry. Indian J. Plant Physiol. 34: 310-314. Widiyanto, S.N.B. 2010. Pengaruh Lisin dan Senyawa Analognya Terhadap

Perubahan Aktivitas Enzim pada Tahap Pertumbuhan Kalus Padi (Oryza sativa L.). Jom Faperta. 2(1): 1-7.

Winarto, B. 2011. Pengaruh Glutamin dan Serin terhadap Kultur Anter Anthurium andraeanum cv. Tropical. J. Hort. 21(4): 295-296.

Yuliarti, N. 2010. Kultur Jaringan Tanaman Skala Rumah Tangga. Lily Publisher. Yogyakarta.

Yusnita. 2004. Kultur Jaringan, Cara Memperbanyak Secara Efisien. Agromedia Pustaka. Yogyakarta.

BAB 3

METODE PENELITIAN

3.1 Waktu dan Tempat

Penelitian ini dilakukan dari bulan Juni 2015 sampai dengan Januari 2016 di Laboratorium Fisiologi Tumbuhan dan Kultur Jaringan, Departemen Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sumatera Utara, Medan.

3.2 Rancangan Penelitian

Rancangan penelitian menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) non faktorial dengan perlakuan sebagai berikut:

Semua perlakuan menggunakan media MS + 2,4-D (1 mg/L) + Kinetin (1 mg/L). Perlakuan Lisin dengan 6 taraf konsentrasi:

L0: Konsentrasi 0 mg/L

L1: Konsentrasi 10 mg/L

L2: Konsentrasi 20 mg/L

L3: Konsentrasi 30 mg/L

L4: Konsentrasi 40 mg/L

L5 : Konsentrasi 50 mg/L

Sehingga diperoleh 6 perlakuan dengan sebanyak 7 ulangan. Jumlah ulangan setiap perlakuan ditentukan dengan menggunakan rumus Federer (1963), yaitu: (t-1) (n-1) ≥ 15, t= jumlah perlakuan; n= jumlah ulangan.

3.3 Prosedur Penelitian 3.3.1 Sterilisasi Alat

Alat-alat yang digunakan untuk penelitian ini seperti botol kultur, pipet serologi, pinset dicuci menggunakan air mengalir. Alat-alat tersebut dan cawan petri yang berisi kertas saring dan aluminium foil disterilisasi dengan menggunakan oven dengan suhu 180oC selama 2 jam.

3.3.2 Pembuatan Media

Media yang digunakan adalah media MS (Murashige dan Skoog, 1962) yang mengandung unsur makro, unsur mikro dan penambahan vitamin dan sukrosa (Lampiran 1, hlm. 28). Media diberi zat pengatur tumbuh 2,4-D (2,4-dichlorophenoxyacetic acid) dan kinetin (furfuryl amino purine) masing-masing 1 mg/L serta lisin dengan konsentrasi sesuai perlakuan.

Media diukur keasamannya dengan menggunakan pH meter hingga mencapai 5,75, untuk mendapatkan keasaman yang diharapkan maka ditambah dengan HCl 0,1 N atau NaOH 0,1 N. Media dibagi ke dalam 6 perlakuan dan dipanaskan hingga larutan mendidih. Larutan tersebut dituang ke dalam botol kultur, ditutup dengan aluminium foil dan plastik dan dikencangkan dengan karet. Media disterilisasi di autoklaf dan disimpan di ruang kultur pada suhu 25oC.

3.3.3 Sterilisasi Eksplan

Sterilisasi eksplan berdasarkan metode Zulkarnain (2009) yang dimodifikasi. Biji salak yang berasal dari lapangan, dicuci dengan air yang mengalir dan direndam dalam deterjen selama ± 5 menit. Biji salak dibilas dengan air mengalir sampai deterjen hilang. Tahap berikutnya, dilakukan dalam laminar air flow dengan merendam biji salak pada larutan yang berisi NaOCl (Natrium hipoklorit) 1% dan ditambah 4 tetes Tween 80® selama 30 menit. Biji salak dibilas dengan akuades steril ± 5 menit, direndam dalam larutan HgCl2 (Merkuri

klorida) 0,1% selama 30 menit dan dibilas akuades steril sebanyak tiga kali masing-masing selama 5 menit.

3.3.4 Penanaman Eksplan

Penanaman eksplan dilakukan dalam laminar air flow dengan eksplan yang digunakan adalah embrio salak padangsidempuan. Biji salak yang sudah steril diletakkan di atas cawan petri yang terdapat kertas saring. Embrio dikeluarkan dari biji dengan pisau scalpel dan ditanam ke dalam botol berisi media sesuai perlakuan. Botol ditutup dengan aluminium foil steril dan plastik lalu diikat karet.

3.3.5 Pemeliharaan Kultur

Eksplan yang telah ditanam di dalam botol kultur diletakkan pada rak pemeliharaan. Botol-botol disusun dengan rapi sehingga memudahkan dalam pengamatan. Botol kultur setiap hari disemprot dengan menggunakan alkohol 70% untuk mengurangi tingkat kontaminasi. Pemeliharaan kultur dilakukan selama ± 5 bulan. Eksplan yang terkontaminasi segera dikeluarkan dari rak kultur agar tidak mengkontaminasi kultur yang lainnya.

3.3.6 Analisis Histologi

Embrio somatik yang terbentuk selanjutnya diamati fase embriogenesisnya, dengan melakukan analisis histologi menggunakan metode paraffin Johansen (1940) yang terdiri atas:

3.3.6.1 Fiksasi

Fiksasi dilakukan dengan cara setiap sampel direndam dalam larutan Formalin 40%, Alkohol 70%, asam asetat glacial dengan perbandingan 1 : 8 : 1 FAA (Formaldehyde Acetic-acid Alcohol) dengan komposisi 10 mL formalin, 80 mL alkohol, dan 10 mL asam asetat glacial dalam setiap 100 mL larutan direndam minimal selama 24 jam dan diletakkan dalam vaccum pump. Tujuan perendaman dengan FAA adalah untuk mematikan sel pada sampel secara cepat tetapi seolah-olah sampel seperti kondisi masih segar (masih hidup).

3.3.6.2 Dehidrasi

Tujuan dehidrasi untuk menghilangkan air yang ada dalam jaringan tanaman, dilanjutkan dengan penghilangan alkohol. Dehidrasi dilakukan dengan merendam sampel secara bertahap melalui seri alkohol bertingkat dari alkohol 70% sampai alkohol absolut (sampel masih di dalam vaccum pump). Sampel dimasukkan ke dalam botol yang telah diberi campuran alkohol dan xylol dengan perbandingan 3:1, 1:1 dan 1:3 (v/v) secara berturut-turut. Tahap dehidrasi masing-masing dilakukan minimal 3 jam.

3.3.6.3 Infiltrasi

Infiltrasi adalah memasukkan parafin secara perlahan-lahan ke dalam rongga-rongga yang kosong dalam jaringan tanaman agar tidak terjadi kerusakan sampel pada saat penyayatan. Pada tahap ini, sampel yang telah direndam dalam xylol diberi serbuk parafin secara perlahan-lahan sampai jenuh. Bahan yang digunakan adalah xilol dan parafin yang sudah dicairkan dengan perbandingan 3:1; 1:1 dan 1:3 (v/v) secara berturut-turut sebanyak tiga kali selama 3 jam. Proses ini dilakukan di dalam oven pada suhu 55oC setelah kegiatan tersebut selesai, semua parafin diganti dengan parafin murni pada suhu 60oC. Perendaman dengan parafin murni dilakukan minimal selama 24 jam.

3.3.6.4 Embedding (Penanaman)

Embedding adalah penanaman sampel yang sudah diproses sebelumnya ke dalam blok parafin untuk mempermudah penyayatan. Penanaman dilakukan pada kotak dari cetakan kertas. Sampel yang sudah difiksasi dimasukkan ke dalam cetakan yang telah berisi parafin cair dengan menggunakan pinset. Sampel dikeluarkan dari cetakan setelah parafin mengeras.

3.3.6.5 Penyayatan

Penyayatan dilakukan dengan menggunakan mikrotom manual. Blok parafin dipasang pada mesin mikrotom putar. Sisi horizontal dari permukaan parafin dibuat sejajar dengan pisau penyayat. Pemegang dapat diatur dengan skrup sehingga ketebalan sayatan sesuai dengan yang dikehendaki. Sayatan yang baik apabila menghasilkan bentuk pita tipis yang lurus dan tidak terputus-putus. Sayatan yang baik ditempelkan pada objek gelas, kemudian objek gelas diletakkan pada hot plate dengan suhu 40oC agar sayatan melekat dengan baik dan sebagian parafin yang mengisi jaringan akan mencair untuk mempercepat proses penjernihan.

3.3.6.6 Penjernihan (Deparafinisasi)

Penjernihan bertujuan untuk menghilangkan parafin yang terdapat pada jaringan. Preparat dimasukkan ke dalam staining jar yang telah terdapat larutan xilol, 1:1 xilol-alkohol, dengan perbandingan 100% xilol, kemudian dimasukkan ke dalam larutan alkohol secara bertahap 100, 90, 70, 50 dan 30%. Pencucian dengan akuades masing-masing selama 3 menit.

3.3.6.7 Pewarnaan

Pewarnaan bertujuan agar bagian-bagian tertentu dari sel atau jaringan menjadi lebih jelas sehingga mudah untuk diamati. Tahapan pewarnaan meliputi preparat yang sudah jernih dimasukkan ke dalam larutan pewarna Safranin 1% selama 1 jam. Preparat dicuci dengan akuades sampai warna benar-benar hilang. Dehidrasi dengan alkohol 30, 50, 70, dan 90% selama 2-5 menit/langkah. Preparat dimasukkan ke dalam larutan larutan Fast Green 2% selama 1 menit, dibilas dengan alkohol 100% sebanyak dua kali masing-masing selama 2 menit. Preparat dibilas dengan xilol 100% sebanyak dua kali selama 5 menit. Preparat diamati dengan mikroskop.

3.4 Parameter Pengamatan

Pada penelitian ini parameter yang akan diamati adalah sebagai berikut: 1. Kemampuan Tumbuh Eksplan

Jumlah eksplan yang tumbuh Jumlah seluruh eksplan

2. Awal Pertumbuhan Kultur (HST) 3. Tipe Proliferasi Kultur

Mengamati pertumbuhan eksplan secara keseluruhan. 4. Berat Basah Kultur (gram)

5. Kultur yang Membentuk Embrio Somatik

3.5 Analisis Data

Data yang diperoleh selanjutnya dianalisis menggunakan uji ANOVA (Analysis of Variance) pada taraf 5%. Jika perlakuan berpengaruh nyata maka

dilanjutkan dengan uji DMRT (Duncan New Multiple Range Test) pada taraf 5% memakai bantuan software SPSS versi 22.

BAB 4

HASIL DAN PEMBAHASAN

Penelitian ini mempunyai berbagai parameter yang diamati yaitu awal pertumbuhan kultur, tipe proliferasi kultur, berat basah kultur dan pembentukan embrio somatik. Hasil yang diperoleh adalah sebagai berikut.

4.1 Awal Pertumbuhan Kultur

Awal pertumbuhan kultur salak diamati secara visual, dimulai dari hari setelah tanam (HST) hingga kultur tumbuh. Rentang waktu pertumbuhan kultur terjadi pada hari ke-8 sampai hari ke-20 setelah tanam. Analisis statistik terhadap awal pertumbuhan kultur menunjukkan perbedaan yang nyata (Lampiran 2, hlm. 27). Hasil rata-rata awal pertumbuhan ditampilkan pada Tabel 4.1.

Tabel 4.1. Rata-rata Awal Pertumbuhan Kultur Salak pada Beberapa Tingkat Konsentrasi Lisin (hari)

No. Konsentrasi Lisin Rata-Rata

1. L0 15bc

2. L1 10,12a

3. L2 13abc

4. L3 10,85ab

5. L4 12,24abc

6. L5 16c

Keterangan: Angka-angka yang diikuti oleh huruf yang berbeda menunjukkan berbeda nyata menurut uji Beda Nyata Terkecil (BNT) dengan tarah α = 5%

L0 = 0 mg/L L2 = 20 mg/L L4 = 40 mg/L

L1 = 10 mg/L L3 = 30 mg/L L5 = 50 mg/L

Berdasarkan Tabel 4.2 dapat dilihat bahwa lisin memberikan pengaruh nyata terhadap awal pertumbuhan kultur. Konsentrasi lisin 10 mg/L memberikan pengaruh nyata terhadap lisin 50 mg/L dan kontrol (0 mg/L), sedangkan penambahan konsentrasi lebih dari 10 mg/L yaitu 20 mg/L hingga 40 mg/L tidak berpengaruh nyata terhadap kontrol. Hal ini menunjukkan bahwa konsentrasi 10

mg/L sudah mencukupi untuk memacu pertumbuhan, apabila konsentrasi lisin ditingkatkan maka akan bersifat menurunkan laju pertumbuhan.

Rata-rata waktu tumbuh kultur yang paling cepat adalah pada perlakuan L1

(konsentrasi lisin 10 mg/L) dengan nilai rataan 10,12 hari, sedangkan paling lama pada perlakuan L5 (konsentrasi lisin 50 mg/L) dengan nilai rataan 16 hari. Pada

penelitian kultur salak, konsentrasi lisin 10 mg/L merupakan konsentrasi yang sesuai dalam memacu pertumbuhan. Menurut Winarto (2011), konsentrasi asam amino yang sesuai dapat memberikan pengaruh yang baik dalam keberhasilan kultur. Penelitian Hibbert dan Green (1982), menyatakan bahwa pengaruh kelebihan dalam pemberian lisin pada suatu medium dapat menganggu proses pembesaran sel dan menekan perkembangan kultur tanaman.

Masa inkubasi pada tahap pertumbuhan kultur selama beberapa hari, tetapi ketika memasuki hari ke-10 banyak kultur yang sudah mulai terlihat pertumbuhan untuk beberapa kelompok perlakuan. Bentuk pertumbuhan kultur pada hari ke-0 dan hari ke-10 dapat dilihat pada Gambar 4.1.

Gambar 4.1. Pertumbuhan Kultur Salak (Salacca sumatrana Becc.). Keterangan: A. Kultur hari ke-0 dan B. Kultur hari ke-10.

Gambar 4.1 terlihat bahwa perbedaan ukuran setelah 10 hari kultur. Awal pertumbuhan kultur dapat dilihat dari gambar yaitu dimulai pada bagian yang bersentuhan dengan media. Eksplan menyerap unsur mineral dan air melalui pelukaan. Kultur mulai terbentuk pertumbuhan dari bagian pelukaan atau bagian irisan eksplan yang bersifat meristematis dan selanjutnya ke bagian seluruh eksplan.

A

0,9 cm 0,3 cm

4.2 Tipe Proliferasi Kultur

Tipe proliferasi pada penelitian kultur salak ini diamati secara visual pada akhir pengamatan. Hasil pengamatan terhadap tipe proliferasi kultur diamati selama 60 hari masa tanam (Lampiran 3, hlm. 28). Data proliferasi pada kultur salak ditampilkan pada Tabel 4.2.

Tabel 4.2. Data Proliferasi Kultur No. Perlakuan

Lisin

Tipe Proliferasi Tidak Membentuk

Organ

Akar Tunas Kalus

1. L0 2 – 2 2

2. L1 2 1 1 2

3. L2 5 1 – 1

4. L3 5 – – 2

5. L4 2 1 – 3

6. L5 4 1 – 1

Jumlah 20 4 3 11

Keterangan: L0 = 0 mg/L L2 = 20 mg/L L4 = 40 mg/L

L1 = 10 mg/L L3 = 30 mg/L L5 = 50 mg/L

Tabel 4.2 menjelaskan bahwa tipe proliferasi yang diperoleh dalam penelitian ini adalah akar, tunas, kalus dan tidak membentuk organ. Lisin memberikan pengaruh terhadap tipe proliferasi kalus, konsentrasi lisin 40 mg/L merupakan konsentrasi yang optimum karena menghasilkan 3 kalus jika dibandingkan dengan kontrol yang menghasilkan 2 kalus. Konsentrasi lisin 20 mg/L dan 50 mg/L merupakan konsentrasi yang kurang optimum dalam memacu pertumbuhan kalus karena jumlah kalus lebih sedikit daripada kontrol. Menurut Ruangsak dan Dheeranupattana (2014), bahwa pemberian lisin dengan rentang konsentrasi 10 – 30 mg/L merupakan konsentrasi yang optimum dalam pembentukan kalus.

Kombinasi pada setiap perlakuan lisin dapat memberikan pengaruh terhadap pertumbuhan kultur salak dalam membentuk akar kecuali perlakuan L3

(30 mg/L). Penelitian Hibbert dan Green (1982), lisin bermanfaat dalam memacu pertumbuhan akar pada kultur jagung. Pada pembentukan tunas dengan kombinasi perlakuan lisin yang dilakukan hanya konsentrasi 10 mg/L yang dapat membentuk tunas, tetapi dengan jumlah yang lebih sedikit dibandingkan kontrol. Hal ini dapat disimpulkan bahwa pemberian lisin tidak memberikan pengaruh dalam

pembentukan tunas pada kultur salak. Hasil penelitian Hibbert dan Green (1982) menyatakan bahwa asam amino lisin dan treonin dapat menghambat pertumbuhan tunas, tetapi pada penelitian Vijayan et al. (1998) didapatkan bahwa penambahan L-lisin dalam media memberikan efek positif dalam induksi tunas mulberry.

4.2.1 Kultur yang Membentuk Kalus

Kalus diamati secara visual pada akhir pengamatan. Hasil kultur merupakan hasil dari subkultur pada perlakuan yang sama. Subkultur bertujuan untuk mendapatkan kalus friabel dan noduler yang berkembang menjadi kalus embriogenik (Gambar 4.2).

Gambar 4.2. Kalus Embriogenik yang Terbentuk pada Akhir Pengamatan.

Gambar 4.2 memperlihatkan bahwa terbentuknya kalus terjadi pada bagian luka bekas irisan, kemudian berlanjut dengan pertumbuhan kalus sebagai akibat dari proliferasi sel-sel penyusun kalus, sehingga menutup sebagian permukaan bekas irisan. Pada pengamatan ditemukan dua macam kalus yang terbentuk dalam media, yaitu (1) kalus embriogenik dan (2) kalus non embriogenik. Kalus embriogenik adalah kalus yang mempunyai potensi untuk beregenerasi menjadi tanaman melalui embriogenesis. Kalus non embriogenik adalah kalus yang mempunyai kemampuan sedikit atau tidak mempunyai kemampuan untuk beregenerasi menjadi tanaman. Kalus embriogenik mempunyai struktur kompak, membentuk nodul berwarna putih, bergranul dan pertumbuhan relatif lambat. Menurut George (1996), lisin merupakan salah satu asam amino yang menjadi faktor penunjang untuk induksi pembentukan dan pertumbuhan kalus.

Kalus Embriogenik Eksplan

4.2.2 Kultur yang Membentuk Tunas dan Akar

Hasil kultur yang membentuk tunas dan akar seperti yang ditunjukkan pada Tabel 4.2 yaitu perlakuan L0 (konsentrasi 0 mg/L) menghasilkan 2 tunas dan disusul

oleh perlakuan L1 (konsentrasi 10 mg/L). Akar yang tumbuh pada media kultur

berjumlah 4 yang masing-masing pada perlakuan L1, L2, L4 dan L5 (konsentrasi

10, 20, 40 dan 50 mg/L). Tunas dan akar yang tumbuh dalam media kultur diperlihatkan pada Gambar 4.3.

Gambar 4.3. Tunas dan Akar yang Terbentuk pada Akhir Pengamatan. Keterangan: A. Tunas, SK (Selubung Kotiledon) dan B. Akar.

Pada Gambar 4.3 dapat dilihat bahwa pada tunas ditemukan adanya bagian yang dinamakan protophyll. Protophyll yang tumbuh merupakan cikal bakal daun dalam hal ini berbentuk seperti pelepah daun yang menempel pada batang tetapi tidak mempunyai helai daun. Selubung kotiledon mempunyai struktur yang lebih tebal dari protophyll dan biasanya menutup sempurna melindungi bakal calon daun. Pada embrio, akar berkembang dari akar embrio atau akar lembaga (radicle). Akar embrio tumbuh menjadi akar utama atau akar primer dan bertambah panjang sebagai akibat pembelahan dan perpanjangan sel di belakang apek akar yang terlindung oleh tudung akar.

Tunas dan akar yang muncul merupakan kecambah yang berasal dari embrio. Hasil yang sama juga didapatkan pada penelitian Lestyana (2000), bahwa eksplan yang berasal dari biji memiliki potensi untuk berkecambah pada media. Eksplan yang dikulturkan tidak semua dapat membentuk kalus tapi dapat juga

Eksplan Phrotophyll

Akar SK

mengalami proses pembentukan organ-organ tanaman seperti akar dan tunas maupun tanaman yang lengkap dari jaringan.

4.3Data Berat Basah Kultur

Berat basah kultur salak (Salacca sumatrana Becc.) dalam penelitian ini menunjukkan respon yang beragam. Data pengamatan dan analisis statistik berat basah kultur dapat dilihat pada Lampiran 4 hlm. 29, bahwa pemberian lisin memberikan pengaruh yang berbeda nyata. Rata-rata berat basah kultur salak dengan beberapa tingkat konsentrasi lisin dapat dilihat pada Tabel 4.3.

Tabel 4.3. Rata-rata Berat Basah (gram) pada Beberapa Tingkat Konsentrasi Lisin

No. Konsentrasi Lisin Rata-Rata

1. L0 0,14a

2. L1 0,27b

3. L2 0,15a

4. L3 0,21ab

5. L4 0,25ab

6. L5 0,18ab

Keterangan: Angka-angka yang diikuti oleh huruf yang berbeda menunjukkan berbeda nyata menurut uji Beda Nyata Terkecil (BNT) dengan tarah α = 5%

L0 = 0 mg/L L2 = 20 mg/L L4 = 40 mg/L

L1 = 10 mg/L L3 = 30 mg/L L5 = 50 mg/L

Tabel 4.3 menunjukkan bahwa berat basah kultur berkisar antara 0,1 sampai 0,47 gram. Lisin memberikan pengaruh nyata terhadap berat basah kultur. Konsentrasi lisin 10 mg/L memberikan pengaruh nyata terhadap lisin 20 mg/L dan kontrol (0 mg/L), sedangkan penambahan konsentrasi lebih dari 10 mg/L yaitu 20 mg/L hingga 50 mg/L tidak berpengaruh nyata terhadap kontrol. Menurut penelitian Lizawati (2012), asam amino yang diberikan ke media secara tunggal maupun dengan kombinasi zat pengatur tumbuh menunjukkan pengaruh terhadap penambahan berat segar

Lisin yang diberikan pada konsentrasi 0 hingga 50 mg/L menghasilkan data yang mengalami kenaikan dan penurunan (fluktuasi). Rata-rata berat basah cenderung meningkat dari konsentrasi 0 hingga 10 mg/L tetapi pada konsentrasi 20 mg/L mengalami penurunan kemudian terjadi peningkatan kembali, selanjutnya terlihat mengalami penurunan pada konsentrasi 50 mg/L. Hal ini biasa terjadi dalam pengukuran berat basah disebabkan karena adanya fluktuasi kandungan air dalam sel, sehingga pengukuran tidak konstan.

Berat basah kultur yang berbeda-beda diduga karena disebabkan oleh kemampuan jaringan dalam menyimpan air dan unsur hara, dalam hal ini meliputi kemampuan mengadakan difusi, osmosis, dan pengaturan tekanan turgor sel (Sriyanti, 2000). Tekanan turgor menyebabkan pemanjangan dan pembesaran sel. Hal inilah yang menyebabkan perbedaan peningkatan berat basah kalus, sebab respon setiap sel (berupa tekanan turgor) terhadap kondisi cairan di sekitar sel berbeda-beda (Meilvana, 2014).

4.4Kultur yang Membentuk Embrio Somatik

Kultur diamati secara visual setiap hari hingga akhir kultur untuk mengamati ada atau tidaknya terbentuk kalus embrio somatik dari salak (Salacca sumatrana Becc.). Jumlah embrio somatik yang diperoleh dalam penelitian kultur salak hanya ditemukan 8 kalus embriogenik (Lampiran 5, hlm. 30). Data kalus embriogenik dari salak dengan beberapa tingkat konsentrasi lisin dapat dilihat pada Tabel 4.4.

Tabel 4.4. Data Kalus Embriogenik

No. Konsentrasi Lisin Jumlah Kalus Embriogenik

1. L0 –

2. L1 1

3. L2 1

4. L3 2

5. L4 3

6. L5 1

Keterangan: L0 = 0 mg/L L2 = 20 mg/L L4 = 40 mg/L

L1 = 10 mg/L L3 = 30 mg/L L5 = 50 mg/L

Tabel 4.4 menjelaskan bahwa penggunaan lisin memberikan pengaruh terhadap pembentukan kalus embriogenik pada kultur salak. Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa konsentrasi dengan rentang 10 – 50 mg/L merupakan konsentrasi yang mampu meningkatkan pembentukan kalus embriogenik dibandingkan dengan kontrol. Perlakuan L4 (konsentrasi 40 mg/L) menghasilkan

3 kalus embriogenik, pada perlakuan L3 (konsentrasi 30 mg/L) berjumlah 2 kalus

dan masing-masing 1 kalus pada perlakuan L1, L2, dan L5 (konsentrasi 10, 20 dan

50 mg/L). Hal ini sejalan dengan penelitian El-Shiaty et al. (2004) melaporkan bahwa penambahan asam amino berperan penting pada tanaman palem (Phoenix

Kalus embriogenik yang diperoleh diamati tahapan perkembangan embrionya dengan menggunakan uji histologi metode Johansen (1940), yang terdiri atas: fiksasi, dehidrasi, embedding dengan menggunakan parafin hingga pewarnaan menggunakan Safranin dan Fast-Green. Tahapan perkembangan embrio somatik yang diperoleh dari kultur salak mencakup fase globular dan fase berbentuk hati (Gambar 4.4).

Gambar 4.4. Perkembangan Embrio.

Keterangan: A. Fase Globular, B. Fase Hati dan C. Fase Torpedo.

Gambar 4.4 menjelaskan bahwa tahapan perkembangan embrio somatik yang diperoleh dalam penelitian ini terdiri atas: fase globular, fase hati dan fase torpedo tetapi fase kotiledon tidak dapat dicapai. Pada fase globular terlihat sel yang berbentuk bulat dengan bidang polarisasi yang jelas. Sel globular masing-masing terpisah satu dengan lainnya dan memiliki sel meristematik yang menyebar (Gambar 4.4.A). Tahap selanjutnya terdapat daerah penonjolan disusun oleh sel yang memiliki sifat meristematik. Sel globular berkembang membentuk dua sudut dimana bagian atas melekuk seperti hati (Gambar 4.4.B). Sisi kanan dan kiri terdapat penonjolan yang terjadi akibat pembelahan sel yang lebih cepat pada daerah tersebut. Kedua sisi embrio akan membelah lebih cepat dibandingkan bagian tengah sehingga membentuk embrio tahap torpedo (Gambar 4.4.C).

Tahap perkembangan embrio somatik pada penelitian Purnamaningsih (2002), dari tahap globular, hati, torpedo, kotiledon, kecambah hingga terbentuk planlet. Penggunaan media yang tepat dapat menginduksi terjadinya seluruh tahap perkembangan embrio, sebaliknya pada media yang kurang sesuai tidak terlihat perkembangan embrio. Menurut Widiyanto (2010), regenerasi tanaman melalui jalur embriogenesis dengan penggunaan zat pengatur tumbuh pada beberapa taraf

B C

30,69 µm 68,1 µm 146,92 µm

konsentrasi dan dikombinasikan dengan lisin dapat menginduksi pembentukan kalus embriogenik dan perkembangan embrio somatik.

BAB 5

KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan

Kultur salak padangsidempuan (Salacca sumatrana Becc.) dengan pemberian konsentrasi lisin 40 mg/L berpengaruh pada pembentukan embrio somatik dengan jumlah 3 kalus embriogenik.

5.2 Saran

a. Penelitian berikutnya disarankan untuk melakukan perbandingan dengan media lain.

BAB 2

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Tanaman Salak

Tanaman salak termasuk ke dalam famili Palmae dengan sub famili Calamoideae, sub famili Calamoideae terbagi menjadi dua tribe yaitu Calamae dan Lepidocaryeae. Tribe Calamae terbagi menjadi beberapa sub tribe diantaranya Calamineae (salak) (Ashari, 2005). Salak serumpun dengan kelapa, kelapa sawit, aren (enau), palem, pakis yang bercabang rendah dan tegak. Salak adalah tumbuhan monokotil yang batangnya hampir tidak kelihatan karena tertutup pelepah daun yang tersusun rapat dan berduri, dari batang yang berduri itu tumbuh tunas baru yang dapat menjadi anakan atau tunas bunga buah salak dalam jumlah yang banyak (Soetomo, 2001).

Tanaman salak termasuk golongan tanaman yang berumah dua (dioecious), yaitu suatu golongan tanaman yang mempunyai bunga jantan atau betina terpisah dalam pohon yang berbeda. Dengan demikian, dikenal tanaman salak jantan (hanya menghasilkan bunga jantan) dan tanaman salak betina (penghasil bunga betina) (Ashari, 2005). Daging buah salak berwarna putih kekuningan atau merah tergantung pada jenisnya. Biji berbentuk bulat hingga bulat telur, satu buah salak mengandung 1 – 3 biji. Rasa buah manis, manis agak asam atau manis agak sepat (Tjahjadi, 2006).

2.1.1 Jenis-jenis Salak

Jenis salak di Indonesia yang banyak dikenal masyarakat di antaranya adalah: salak pondoh, salak madu, salak nangka, salak bali, salak kelapa atau salak gondok, salak gading, salak putih, salak lilipan (Soetomo, 2001), salak condet, salak manonjaya, salak madura, salak ambarawa, salak banjarnegara dan salak padangsidempuan (Tjahjadi, 2006). Jenis salak liar yang biasanya hidup di hutan raya adalah Salacca magnifica dan Salacca dransfieldiana yang banyak

tumbuh di Serawak dan Kalimantan Timur. Perbedaan mencolok antara jenis salak budidaya dan salak liar terletak pada bentuk batangnya. Tipe liar lainnya seperti Salacca affinis dan Salacca wallichiana (salak bangkok) bertipe panjang menjalar pada permukaan tanah sedangkan tipe budidaya batangnya tumbuh tegak (Ashari, 2005).

2.1.2 Salak Padangsidempuan

Salak padangsidempuan merupakan buah khas dari Sumatera Utara tepatnya di Desa Sibakua daerah Kabupaten Tapanuli Selatan, Kota Padangsidempuan. Salak yang tumbuh di Padangsidempuan lebih dikenal dengan sebutan salak sibakua. Buah yang rasanya manis bercampur asam dan agak sepat ini banyak mengandung vitamin A, vitamin C dan beta karoten (Lingga, 2012).

Daging buah pada salak mengandung tanin, saponin dan flavonoida. Rasa sepat yang timbul pada buah salak disebabkan karena adanya kandungan zat tanin. Daging buah salak berkhasiat sebagai antioksidan, menjaga kesehatan mata, anti diabetes, menurunkan kolesterol dan anti diare (Sirait, 2007).

Menurut Soetomo (2001), buah salak mengandung gizi tinggi bila dibandingkan dengan pisang, nenas dan papaya. Kandungan gizi setiap 100 gram buah salak dari bagian yang dapat dimakan terdiri atas: kalori 77 kal, kalsium 28 g, karbohidrat 20,9 g, protein 0,4 g, lemak 0 g, fosfor 18 mg, besi 4,2 mg, vitamin B1 0,04 mg, vitamin C 2 mg dan air 78 mg.

2.2 Kultur Jaringan

Perbanyakan bibit secara kultur jaringan menggunakan bahan vegetatif atau organ tanaman lalu dibiakkan secara in vitro dan menghasilkan bibit-bibit tanaman dalam jumlah banyak pada waktu singkat, serta sifat dan kualitas yang sama dengan induknya. Teknik kultur jaringan saat ini telah berkembang menjadi suatu teknologi bioteknologi yang bermanfaat untuk memproduksi bibit-bibit unggul, pemuliaan tanaman, pelestarian plasma nutfah dan kreasi varietas baru untuk perbaikan kualitas tanaman (Zulkarnain, 2009).

Keberhasilan teknik kultur jaringan sangat bergantung pada medium, salah satu komponen medium adalah zat pengatur tumbuh. Penambahan zat pengatur

tumbuh dalam kultur jaringan diberikan untuk memperoleh efek pertumbuhan (Pandiangan, 2011). Penggunaan zat pengatur tumbuh yang perlu diperhatikan adalah ketepatan memilih jenis dan konsentrasi yang sesuai dengan jenis tanaman dan kondisi fisiologis dari eksplan. Hal ini disebabkan karena setiap eksplan mempunyai respon tersendiri terhadap pemberian zat pengatur tumbuh (Lizawati, 2012).

2.3 Zat Pengatur Tumbuh

Zat pengatur tumbuh merupakan substansi (bahan) organik (selain vitamin dan unsur mikro) yang dalam jumlah sedikit mampu merangsang, menghambat atau sebaliknya mengubah proses fisiologis (Gardner et al. 2008). Pada teknik kultur jaringan seperti, inisiasi akar, embriogenesis dan induksi kalus sangat sulit dilakukan tanpa melibatkan zat pengatur tumbuh. Zat pengatur tumbuh yang hadir dalam suatu media sangat berpengaruh nyata untuk kultur. Senyawa-senyawa lain yang memiliki karakteristik yang sama dengan hormon tetapi diproduksi secara eksogen, dikenal sebagai zat pengatur tumbuh. Macam-macam zat pengatur tumbuh yaitu auksin, sitokinin, giberelin, asam absisat, dan etilen (Zulkarnain, 2009). Dua golongan zat pengatur tumbuh yang sangat penting dalam kultur jaringan adalah sitokinin dan auksin (Lizawati, 2012).

2.3.1 Auksin (2,4–D)

Auksin dalam aktivitas kultur jaringan dikenal sebagai hormon yang mampu menginduksi kalus dan mendorong proses pembentukan embrio (Santoso dan Nursandi, 2004). Secara umum diketahui bahwa auksin dalam konsentrasi tinggi mendorong embrio somatik secara efektif (Lizawati, 2012). Auksin yang paling banyak digunakan pada kultur in vitro adalah IAA (indole-3-acetic acid), NAA (α-naphthalenaacetic acid) dan 2,4–D (2,4-dichlorophenoxyacetic acid) (Zulkarnain, 2009). Pada berbagai hasil penelitian menunjukkan bahwa 2,4–D merupakan auksin yang efektif untuk induksi kalus embriogenik (Purnamaningsih, 2002). 2,4–D merupakan golongan auksin yang sering digunakan untuk menginduksi pembentukan kalus embriogenik pada serealia (Menneses et al. 2005).

2.3.2 Sitokinin (Kinetin)

Sitokinin merupakan kelompok hormon tumbuh yang sangat penting dalam kultur jaringan (Santoso dan Nursandi, 2004). Hormon tumbuh yang terdapat dalam media, terutama golongan sitokinin sangat menentukan sel embrio berdiferensiasi menjadi tanaman sempuma (Barunawati et al. 2006). Sitokinin mempengaruhi berbagai proses fisiologis di dalam tumbuhan (Pandiangan, 2011). Sitokinin yang pertama kali ditemukan adalah kinetin (Santoso dan Nursandi, 2004). Sitokinin yang paling banyak digunakan adalah BAP, kinetin, zeatin dan 2–ip dalam menginduksi embriogenesis somatik (Sondahl et al. 1994).

2.4 Embriogenesis Somatik

Lima tipe dasar dari mikropropagasi, yaitu kultur meristem, proliferasi tunas aksilar, induksi pucuk adventif, organogenesis dan embriogenesis somatik (Zulkarnain, 2009). Embriogenesis somatik, yaitu proses diferensiasi meristem bipolar yang berupa bakal tunas dan akar. Dua meristem diperlukan untuk pertumbuhan tanaman utuh. Embrio yang terbentuk selanjutnya akan tumbuh dan berkembang menjadi tanaman utuh. Pertumbuhan dan perkembangan embrio berlangsung secara bertahap melalui proses identik dengan proses embriogenesis pada tanaman dikotil, yaitu dengan terbentuknya struktur bipolar melalui tahapan bulat (globular), jantung, (heart stage), torpedo dan akhirnya berkecambah menjadi planlet (Yuliarti, 2010).

Tahap-tahap embriogenesis somatik menurut Bhojwani dan Razdan (1989), yaitu: Tahap Perkembangan (Development Phase), embrio somatik berkembang dari kumpulan sel meristematis menjadi bentuk globural, bentuk hati, bentuk torpedo dan kotiledon; Tahap Konversi (Conversion Phase), setelah mencapai bentuk kotiledon, embrio somatik berkecambah, ini yang disebut tahap konversi; Tahap Maturasi (Maturation Phase), kemudian embrio somatik mengalami perubahan biokimia dan menjadi keras.

Embriogenesis somatik mempunyai beberapa kelebihan dibandingkan kultur mata tunas dan organogenesis. Saat ini perbanyakan tanaman dapat dilakukan melalui organogenesis dan embriogenesis dengan teknik kultur

jaringan. Tanaman yang menggunakan embrio somatik mempunyai peluang yang lebih tinggi dalam keberhasilan kultur karena embrio somatik berasal dari satu sel somatik. Eksplan yang digunakan bersifat meristematik, umumnya memberikan keberhasilan pembentukan embrio somatik yang lebih tinggi. Eksplan yang digunakan dapat berupa aksis embrio zigotik muda dan dewasa, kotiledon, mata tunas, epikotil maupun hipokotil (Purnamaningsih, 2002), akar, batang, daun, biji, tunas, anther, kepala sari dan lain-lain (Santoso dan Nursandi, 2004).

2.5 Asam Amino (Lisin)

Komponen penyusun medium mikropropagasi meliputi unsur makro dan mikro, zat pengatur tumbuh, air, asam amino dan matriks medium. Kasein hidrolisat merupakan sumber nitrogen organik di dalam media kultur, penambahan kasein hidrolisat dapat memberikan pengaruh yang menguntungkan dalam penelitian. Kasein hidrolisat dapat digantikan dengan berbagai asam amino untuk memenuhi kebutuhan nitrogen organik (Zulkarnain, 2009). Di dalam media kultur jaringan, asam amino merupakan sumber N–organik (Yusnita, 2004). Sumber N organik dapat dianggap penting dalam kasus tertentu, terutama diperlukan pada saat inisiasi kalus (Santoso dan Nursandi, 2004).

Asam amino merupakan sumber N-organik yang lebih cepat diserap oleh eksplan daripada N yang terdapat dalam media. Asam amino dalam penelitian tertentu sudah terbukti memberikan hasil positif pada kultur in vitro. Asam amino adalah salah satu faktor penunjang keberhasilan kultur jaringan tanaman yang merupakan salah satu yang berperan dalam induksi pembentukan kalus (Zulkarnain, 2009).

Lisin merupakan asam amino penyusun protein yang dalam pelarut air bersifat basa, seperti Histidin (Necrutiu et al. 1984). Lisin merupakan salah satu asam amino yang banyak digunakan pada kultur jaringan untuk berbagai tujuan. Lisin berfungsi sebagai pendorong pertumbuhan sel dan regenerasi tanaman. Penambahan asam amino seperti glutamin, lisin dan arginin pada media yang mengandung auksin dapat meningkatkan keberhasilan pembentukan kalus embriogenik. Pada kloroplas dapat berperan sebagai prekursor untuk pembentukan asam nukleat dan proses seluler lainnya (Gunawan, 1995).

BAB 1 PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Potensi alam Indonesia sangat mendukung upaya pengembangan tanaman buah-buahan tropis untuk menjadi komoditas unggulan (Barus dan Syukri, 2008). Buah-buahan Indonesia selain bergizi tinggi juga dapat dimanfaatkan untuk terapi kesehatan, salah satunya adalah salak. Kandungan kalsium, fosfor dan besi pada buah salak dibandingkan beberapa buah lainnya termasuk tinggi. Salak merupakan tanaman asli Indonesia. Oleh karena itu, bila kita bertanam salak berarti kita melestarikan dan meningkatkan produksi negeri sendiri (Soetomo, 2001).

Salak telah dibudidayakan secara luas di Indonesia karena buahnya yang enak dimakan dan mempunyai nilai ekonomi relatif tinggi. Di Indonesia ada 2 jenis salak yang banyak dibudayakan, yaitu spesies Salacca sumatrana Becc. (salak padangsidempuan) dan Salacca zalacca (Ashari, 2005). Salak yang ditanam orang di Bali adalah Salacca zalacca var amboinensis, sedangkan di Pulau Jawa orang menanam Salacca zalacca var zalacca (salak pondoh), dan selanjutnya di Pulau Sumatera adalah salak padangsidempuan (Salacca sumatrana Becc.) (Ashari, 2006). Produksi salak di Indonesia masih rendah karena budidaya salak yang dilakukan sekarang ini masih sederhana (tradisional), selain itu tanaman yang dibudidayakan umumnya tidak berasal dari bibit yang unggul (Soetomo, 2001).

Embriogenesis somatik salah satu teknik in vitro yang dapat digunakan untuk penggandaan bibit bermutu dalam jumlah banyak (Purnamaningsih, 2002). Embriogenesis somatik dapat terbentuk melalui dua cara, yaitu secara langsung dan tidak langsung (melewati fase kalus). Embriogenesis somatik langsung ialah proses perkembangan embrio yang terjadi secara langsung. Penelitian ini menggunakan teknik embriogenesis tidak langsung, ialah proses perkembangan

embrio melalui pembentukan kalus terlebih dahulu sebelum membentuk kalus embriogenik (Chawla, 2000).

Faktor-faktor yang mempengaruhi keberhasilan embriogenesis melalui kultur in vitro menurut Jimenez (2001), adalah: (1) genotip tanaman donor, (2) kondisi fisiologis tanaman donor, menurut Utami et al. (2007) (3) jenis medium dan kondisi fisik medium, (4) Zat Pengatur Tumbuh (ZPT) dan (5) lingkungan kultur. Media kultur merupakan campuran berbagai garam mineral, air, pemadat, vitamin, gula, zat pengatur tumbuh, dan asam amino (Gunawan, 1995). Asam amino umumnya ditambahkan untuk meningkatkan induksi kalus, regenerasi, pertumbuhan tunas (Winarto, 2011) dan meningkatkan keberhasilan pembentukan kalus embriogenik (Gunawan, 1995).

Asam amino yang sering diberikan pada media kultur in vitro adalah glisin, lisin dan treonin (Yusnita, 2004). Lisin dapat membantu dalam ikatan hidrogen dan sebagai dasar umum dalam mengubah kecepatan reaksi kimia. Konsentrasi asam amino yang tepat dapat memberikan pengaruh yang positif terhadap keberhasilan kultur tanaman, tetapi pada konsentrasi yang tidak sesuai dapat menimbulkan keracunan sel dan menghambat regenerasinya (Winarto, 2011).

Pada penelitian Pongtongkam et al. (2004), pertumbuhan kalus dari kultur

embrio padi KDML 105 menggunakan media Murashige dan Skoog (MS) dengan

penambahan 1mg/L kinetin, 1 g/L L–prolin, 300 mg/L kasein hidrolisat dan L–

lisin pada konsentrasi 0, 5, 10, 20 dan 40 μM. Pembentukan kalus yang terbaik

dengan rata-rata 95,16% pada media MS yang berisi 2 mg/l 2,4–D, 1 g/L L-prolin,

1 g/L kasein hidrolisat dan konsentrasi 20 μM lisin. Pada regenerasi kalus menjadi

planlet yang terbaik dengan rata-rata 63,87% yang berisi 1 mg/L kinetin, 1 g/L L–

prolin, 300 mg/L kasein hidrolisat dan konsentrasi 20 μM lisin.

Pada penelitian Ruangsak dan Dheeranupattana (2014), pertumbuhan

planlet pada Stemona sp. di media kultur cair MS yang berisi 2 mg/L IBA, L– ornithin dan L-lisin dengan konsentrasi yang bervariasi 0, 10, 20, 30, 50 mg/L. Produksi alkaloid tertinggi disebabkan oleh L-lisin yang dikultur pada media cair MS dengan 20 mg/L L–lisin untuk 1 minggu.

1.2 Permasalahan

Permasalahan yang dihadapi saat ini adalah keterbatasan jumlah bibit klonal salak padangsidempuan (Salacca sumatrana Becc.).

1.3 Tujuan Penelitian

Penelitian ini bertujuan untuk memperoleh konsentrasi lisin yang optimal dalam pembentukan embrio somatik salak padangsidempuan (Salacca sumatrana Becc.).

1.4Hipotesis

Lisin dapat mempercepat pembentukan embrio somatik pada salak padangsidempuan (Salacca sumatrana Becc.).

1.5 Manfaat

Manfaat penelitian ini memberikan pengetahuan dan informasi dalam teknik embriogenesis somatik pada salak padangsidempuan (Salacca sumatrana Becc.) dengan penambahan lisin.

ABSTRAK

Penelitian yang berjudul “Embriogenesis Somatik dari Salak Padangsidempuan (Salacca sumatrana Becc.) pada Media MS Diperkaya dengan Lisin” telah dilakukan di Laboratorium Kultur Jaringan Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sumatera Utara, Medan mulai dari bulan Juni 2015 sampai dengan bulan Januari 2016. Tujuan penelitian ini untuk mengetahui pengaruh konsentrasi lisin terhadap pertumbuhan dan perkembangan embrio somatik dari salak padangsidempuan. Penelitian ini menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) non faktorial dengan 6 taraf konsentrasi lisin yaitu 0, 10, 20, 30, 40 dan 50 mg/L. Hasil analisis statistika menunjukkan bahwa lisin berpengaruh nyata terhadap waktu tumbuh dan berat basah kultur. Konsentrasi lisin 10 mg/L memberikan pengaruh terbaik terhadap waktu tumbuh dan berat basah kultur, sedangkan konsentrasi 40 mg/L memberikan pengaruh yang terbaik untuk membentuk embrio somatik. adalah konsentrasi. Hasil pengamatan histologi menunjukkan pembentukan embrio somatik dari eksplan salak padangsidempuan adalah fase globular, hati dan torpedo.

ABSTRACT

The Research of Somatic Embryogenesis from Zalaccca Padangsidempuan (Salacca sumatrana Becc.) in MS Media Enriched by Lysine has been conducted at the Laboratory of Physiology and Plant Tissue Culture, Faculty of Mathematics and Natural Science, University of Sumatera Utara, Medan from June 2015 until January 2016. This study was aimed to determine the effect of lysine treatment on the growth and development of somatic embryos in zalaccca padangsidempuan. The experimental design was completely randomized (CRD) non factorial with six levels of lysine concentrations: 0, 10, 20, 30, 40 dan 50 mg/L. The statistical analysis showed significantly affected the time of initiation and fresh weights. The best lysine concentration was 10 mg/L for time initiation and fresh weights, while the best lysine concentration was 40 mg/L to form somatic embryo. The histological analysis showed that somatic embryos formed globular, heart and torpedo phase.

EMBRIOGENESIS SOMATIK DARI SALAK PADANGSIDEMPUAN (Salacca sumatrana Becc.) PADA MEDIA MS YANG DIPERKAYA

OLEH LISIN

SKRIPSI

KHAIRIYAH KHAIRUDDIN 110805041

DEPARTEMEN BIOLOGI

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS SUMATERA UTARA

MEDAN

EMBRIOGENESIS SOMATIK DARI SALAK PADANGSIDEMPUAN (Salacca sumatrana Becc.) PADA MEDIA MS YANG DIPERKAYA

OLEH LISIN

SKRIPSI

Diajukan untuk melengkapi tugas dan memenuhi syarat mencapai gelar Sarjana Sains

KHAIRIYAH KHAIRUDDIN 110805041

DEPARTEMEN BIOLOGI

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS SUMATERA UTARA

MEDAN

Judul : Embriogenesis Somatik dari Salak Padangsidempuan (Salacca sumatrana Becc.) pada Media MS Diperkaya

dengan Lisin

Kategori : Skripsi

Nama : Khairiyah Khairuddin

Nomor Induk Mahasiswa : 110805041

Program Studi : Sarjana (S1) Biologi

Departemen : Biologi

Fakultas : Matematika Dan Ilmu Pengetahuan Alam Universtas Sumatera Utara

Disetujui di Medan, Juli 2016

Komisi Pembimbing :

Pembimbing 2, Pembimbing 1,

Dra. Isnaini Nurwahyuni, M.Sc NIP. 196005231985022001

Dr. Elimasni, M.Si

NIP.196505241991032001

Disetujui Oleh

Departemen Biologi FMIPA USU Ketua,

Dr. Nursahara Pasaribu, M. Sc. NIP. 196301231990032001

EMBRIOGENESIS SOMATIK DARI SALAK PADANGSIDEMPUAN (Salacca sumatrana Becc.) PADA MEDIA MS DIPERKAYA DENGAN

LISIN

SKRIPSI

Saya mengakui bahwa skripsi ini adalah hasil karya sendiri. Kecuali beberapa kutipan dan ringkasan yang masing-masing disebutkan sumbernya.

Medan, Juli 2016

Khairiyah Khaairuddin 110805041

Puji dan syukur penulis panjatkan kehadirat Allah SWT dan juga Shalawat beriring salam kepada Nabi Muhammad SAW berkat rahmat dan hidayah-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul “Embriogenesis Somatik dari Salak Padangsidempuan (Salacca sumatrana Becc.) pada Media MS Diperkaya dengan Lisin”. Skripsi ini dibuat sebagai salah satu syarat untuk

meraih gelar Sarjana Sains pada Fakultas MIPA USU Medan.

Pada kesempatan ini penulis memberikan penghargaan dan ucapan terima kasih sedalam-dalamnya kepada Ayahanda Khairuddin, ST dan Ibunda Hadijah, S.Pdi yang senantiasa setulus hati memberikan doa, dorongan, kasih sayang, semangat serta pengorbanan yang besar baik berupa moril maupun materi kepada penulis dalam menyelesaikan studi. Adik-adik tercinta Rahmah Khairunnisa dan Muhammad Khairi yang turut memberikan bantuan dan dukungan kepada penulis untuk menyelesaikan skripsi ini.

Penelitian dan penulisan skripsi ini dapat diselesaikan dengan baik karena bantuan, peran serta dukungan dari berbagai pihak. Penulis mengucapkan terimakasih kepada Ibu Dr. Elimasni, M.Si selaku dosen pembimbing I dan Ibu Dr. Isnaini Nurwahyuni M.Sc selaku dosen pembimbing II yang telah banyak meluangkan waktu kepada penulis dalam memberikan bimbingan, motivasi dan pengetahuan untuk penyusunan skripsi. Ucapan terima kasih penulis ucapkan kepada Ibu Dr. Saleha Hannum, M.Si. selaku dosen penguji I dan Ibu Dra. Nunuk Priyani, M.Sc selaku dosen penguji II yang telah banyak memberikan kritik, saran dan masukan demi penyempurnaan skripsi ini.

Terima kasih penulis sampaikan kepada Ibu Dr. Nursahara Pasaribu, M.Sc. selaku ketua Departemen Biologi, Ibu Dr. Erni Jumilawaty, M.Si selaku dosen pembimbing akademik yang telah banyak memberikan nasehat dan bimbingan kepada penulis dalam menjalani perkuliahan. Ucapan terima kasih juga ditujukan kepada Abangda Endra Raswin, Ibu Roslina Ginting selaku pegawai administrasi dan Ibu Nurhasni Muluk selaku Laboran serta seluruh staf dan dosen di Departemen Biologi Fakultas MIPA USU dalam membantu dan memberi ilmu pengetahuan yang bermanfaat bagi penulis.

Terima kasih kepada rekan-rekan di bidang Fisiologi dan Kultur Jaringan Tumbuhan khususnya Violita, Rani Apriyani, Mujahidin, Luhut, Fitri, Desi, Robiatul, Ilham, Andrew dan Bang Imam yang telah membantu penulis dalam menyelesaikan penelitian. Terima kasih untuk sahabat-sahabat (Virza, Ria Yelvi Poppy, Desmun, Yentiti, Sri Desy dan Harnisya) yang telah mewarnai kehidupan penulis selama masa perkuliahan. Teman-teman seperjuangan di Biologi angkatan 2011 Zia, Mariati, Maya, Putri, Mesrayanti, Titis, Pufeb, Rinda, Graceson, Gracelum, Frico, Taufik, Natanael, Sahrina, Dewi, Chandra, Rasmin, Imelda, Steven, Sera, Sister, Siren, Sisdew, Nana, Junaydy, Jordany, Arisa, Friska, Riski, Febi, Berlina, Elsa dan lain-lain. Kakak asuh (kak Novi dan kak Eka) yang telah banyak membantu penulis dalam perkuliahan dan adik asuh (Maya dan Sahara), serta kakak dan abang Biologi 2009 dan 2010, adik-adik Biologi 2012, 2013 dan 2014 lainnya yang tidak dapat disebutkan namanya satu persatu. Teman-teman di

Penulis menyadari masih banyak kekurangan dalam penyusunan skripsi ini, untuk itu penulis mengharapkan kritik dan saran yang membangun dari semua pihak demi kesempurnaan skripsi ini. Akhir kata penulis mengucapkan terima kasih, semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi semua pihak yang membutuhkan.

Medan, Juli 2016

ABSTRAK

Penelitian yang berjudul “Embriogenesis Somatik dari Salak

Padangsidempuan (Salacca sumatrana Becc.) pada Media MS Diperkaya dengan Lisin” telah dilakukan di Laboratorium Kultur Jaringan Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sumatera Utara, Medan mulai dari bulan Juni 2015 sampai dengan bulan Januari 2016. Tujuan penelitian ini untuk mengetahui pengaruh konsentrasi lisin terhadap pertumbuhan dan perkembangan embrio somatik dari salak padangsidempuan. Penelitian ini menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) non faktorial dengan 6 taraf konsentrasi lisin yaitu 0, 10, 20, 30, 40 dan 50 mg/L. Hasil analisis statistika menunjukkan bahwa lisin berpengaruh nyata terhadap waktu tumbuh dan berat basah kultur. Konsentrasi lisin 10 mg/L memberikan pengaruh terbaik terhadap waktu tumbuh dan berat basah kultur, sedangkan konsentrasi 40 mg/L memberikan pengaruh yang terbaik untuk membentuk embrio somatik. adalah konsentrasi. Hasil pengamatan histologi menunjukkan pembentukan embrio somatik dari eksplan salak padangsidempuan adalah fase globular, hati dan torpedo.

ABSTRACT

The Research of Somatic Embryogenesis from Zalaccca Padangsidempuan (Salacca sumatrana Becc.) in MS Media Enriched by Lysine has been conducted at the Laboratory of Physiology and Plant Tissue Culture, Faculty of Mathematics and Natural Science, University of Sumatera Utara, Medan from June 2015 until January 2016. This study was aimed to determine the effect of lysine treatment on the growth and development of somatic embryos in zalaccca padangsidempuan. The experimental design was completely randomized (CRD) non factorial with six levels of lysine concentrations: 0, 10, 20, 30, 40 dan 50 mg/L. The statistical analysis showed significantly affected the time of initiation and fresh weights. The best lysine concentration was 10 mg/L for time initiation and fresh weights, while the best lysine concentration was 40 mg/L to form somatic embryo. The histological analysis showed that somatic embryos formed globular, heart and torpedo phase.

Halaman

PERSETUJUAN i

PERNYATAAN ii

PENGHARGAAN iii

ABSTRAK v

ABSTRACT vi

DAFTAR ISI vii

DAFTAR TABEL ix

DAFTAR GAMBAR x

DAFTAR LAMPIRAN xi

BAB 1. PENDAHULUAN 1

1.1 Latar Belakang 1

1.2 Permasalahan 3

1.3 Tujuan Penelitian 3

1.4 Hipotesis 3

1.5 Manfaat 3

BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA 4

2.1 Tanaman Salak 4

2.1.1 Jenis-jenis Salak 4

2.1.2 Salak Padangsidempuan 5

2.2 Kultur Jaringan 5

2.3 Zat Pengatur Tumbuh 6

2.3.1 Auksin (2,4–D) 6

2.3.2 Sitokinin (Kinetin) 7

2.4 Embriogenesis Somatik 7

2.5 Asam Amino (Lisin) 8

BAB 3. METODE PENELITIAN 9

3.1 Waktu dan Tempat 9

3.2 Rancangan Penelitian 9

3.3 Prosedur Penelitian 9

3.3.1 Sterilisasi Alat 9

3.3.2 Pembuatan Media 10

3.3.3 Sterilisasi Eksplan 10

3.3.4 Penanaman Eksplan 10

3.3.6.3 Infiltrasi 12 3.3.6.4 Embedding (Penanaman) 12

3.3.6.5 Penyayatan 12

3.3.6.6 Penjernihan 12

3.3.6.7 Pewarnaan 13

3.4 Parameter Pengamatan 13

3.5 Analisis Data 13

BAB 4. HASIL DAN PEMBAHASAN 14

4.1Awal Waktu Tumbuh Kultur 14

4.2 Tipe Proliferasi Kultur 16

4.2.1 Kultur yang Membentuk Kalus 17

4.2.2 Kultur yang Membentuk Tunas dan Akar 18

4.3 Berat Basah Kultur 19

4.4 Kultur yang Membentuk Embrio Somatik 20

BAB 5. KESIMPULAN DAN SARAN 22

5.1 Kesimpulan 22

5.2 Saran 22

DAFTAR PUSTAKA 23

Nomor Judul Halaman 4.1. Rata-rata Awal Pertumbuhan Kultur Salak pada

Beberapa Tingkat Konsentrasi Lisin (hari)

14

4.2. Data Proliferasi Kultur 16

4.3. Rata-rata Berat Basah (gram) pada Beberapa Tingkat Konsentrasi Lisin

19

Nomor Judul Halaman 4.1. Pertumbuhan Kultur Salak (Salacca sumatrana Becc.) 15 4.2. Kalus Embriogenik yang Terbentuk pada Akhir Pengamatan 17 4.3. Tunas dan Akar yang Terbentuk pada Akhir Pengamatan 18

Nomor Judul Halaman 1 Komposisi Media MS (Murashige & Skoog, 1962) 26 2 Data Pengamatan Awal Pertumbuhan Kultur (hari) 27

3 Data Tipe Proliferasi Kultur 28

4 Data Berat Basah Kultur (gram) 29

vi

SOMATIC EMBRYOGENESIS FROM ZALACCA PADANGSIDEMPUAN (Salacca sumatrana Becc.) IN MS MEDIA ENRICHED BY LYSINE

ABSTRACT

The Research of Somatic Embryogenesis from Zalaccca Padangsidempuan (Salacca sumatrana Becc.) in MS Media Enriched by Lysine has been conducted at the Laboratory of Physiology and Plant Tissue Culture, Faculty of Mathematics and Natural Science, University of Sumatera Utara, Medan from June 2015 until January 2016. This study was aimed to determine the effect of lysine treatment on the growth and development of somatic embryos in zalaccca padangsidempuan. The experimental design was completely randomized (CRD) non factorial with six levels of lysine concentrations: 0, 10, 20, 30, 40 dan 50 mg/L. The statistical analysis showed significantly affected the time of initiation and fresh weights. The best lysine concentration was 10 mg/L for time initiation and fresh weights, while the best lysine concentration was 40 mg/L to form somatic embryo. The histological analysis showed that somatic embryos formed globular, heart and torpedo phase.

vii DAFTAR ISI

Halaman

PERSETUJUAN i

PERNYATAAN ii

PENGHARGAAN iii

ABSTRAK v

ABSTRACT vi

DAFTAR ISI vii

DAFTAR TABEL ix

DAFTAR GAMBAR x

DAFTAR LAMPIRAN xi

BAB 1. PENDAHULUAN 1

1.1 Latar Belakang 1

1.2 Permasalahan 3

1.3 Tujuan Penelitian 3

1.4 Hipotesis 3

1.5 Manfaat 3

BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA 4

2.1 Tanaman Salak 4

2.1.1 Jenis-jenis Salak 4

2.1.2 Salak Padangsidempuan 5

2.2 Kultur Jaringan 5

2.3 Zat Pengatur Tumbuh 6

2.3.1 Auksin (2,4–D) 6

2.3.2 Sitokinin (Kinetin) 7

2.4 Embriogenesis Somatik 7

2.5 Asam Amino (Lisin) 8

BAB 3. METODE PENELITIAN 9

3.1 Waktu dan Tempat 9

3.2 Rancangan Penelitian 9

3.3 Prosedur Penelitian 9

3.3.1 Sterilisasi Alat 9

3.3.2 Pembuatan Media 10

3.3.3 Sterilisasi Eksplan 10

3.3.4 Penanaman Eksplan 10

viii

3.3.6 Analisis Histologi 11

3.3.6.1 Fiksasi 11

3.3.6.2 Dehidrasi 11

3.3.6.3 Infiltrasi 12

3.3.6.4 Embedding (Penanaman) 12

3.3.6.5 Penyayatan 12

3.3.6.6 Penjernihan 12

3.3.6.7 Pewarnaan 13

3.4 Parameter Pengamatan 13

3.5 Analisis Data 13

BAB 4. HASIL DAN PEMBAHASAN 14

4.1Awal Waktu Tumbuh Kultur 14

4.2 Tipe Proliferasi Kultur 16

4.2.1 Kultur yang Membentuk Kalus 17

4.2.2 Kultur yang Membentuk Tunas dan Akar 18

4.3 Berat Basah Kultur 19

4.4 Kultur yang Membentuk Embrio Somatik 20

BAB 5. KESIMPULAN DAN SARAN 22

5.1 Kesimpulan 22

5.2 Saran 22

DAFTAR PUSTAKA 23

ix

DAFTAR TABEL

Nomor Judul Halaman

4.1. Rata-rata Awal Pertumbuhan Kultur Salak pada Beberapa Tingkat Konsentrasi Lisin (hari)

14

4.2. Data Proliferasi Kultur 16

4.3. Rata-rata Berat Basah (gram) pada Beberapa Tingkat Konsentrasi Lisin

19

x

DAFTAR GAMBAR

Nomor Judul Halaman

4.1. Pertumbuhan Kultur Salak (Salacca sumatrana Becc.) 15 4.2. Kalus Embriogenik yang Terbentuk pada Akhir Pengamatan 17 4.3. Tunas dan Akar yang Terbentuk pada Akhir Pengamatan 18

xi

DAFTAR LAMPIRAN

Nomor Judul Halaman

1 Komposisi Media MS (Murashige & Skoog, 1962) 26 2 Data Pengamatan Awal Pertumbuhan Kultur (hari) 27

3 Data Tipe Proliferasi Kultur 28

4 Data Berat Basah Kultur (gram) 29