Antioxidant activity of Mindi (Melia Azedarach Linn.) extractives

         

AKTIVITAS

 

ANTIOKSIDAN

 

ZAT

 

EKSTRAKTIF

 

DARI 

POHON

 

MINDI

 

(

Melia

 

azedarach

 

Linn.) 

                         

MITA

 

NURDYANA 

                                                   

DEPARTEMEN HASIL HUTAN  FAKULTAS KEHUTANAN  INSTITUT PERTANIAN BOGOR 

   

DHH

 

     

Antioxidant activity of Mindi (Melia  Azedarach Linn.) extractives   

Mita Nurdyana1)_{, Wasrin Syafii}2)_, 

and Rita Kartika Sari3) 

 

INTRODUCTION. The whole tree utilization concept can be applied to increase  utilization efficiency of forest  products,  included  the usage of wood  chemical  component  like  extractive.  Research  of Nahak  and  Sahu  (2010a)  showed  that  extract of mindi’s leaves has strong antioxidant activity. Mindi is a fast growing  tree species that developed for community forests. Therefore, it is interesting to do  research about the potential antioxidant activity of mindi that grown in Indonesia  because the distribution and variation of extractive compounds was depended on  many factors like the species, age, place grew, and parts used. The objective of  this research is to determine the extractive content of the bark (inner bark), leaves,  branches,  heartwood,  and  sapwood  of  mindi  that  extracted  with  a  multilevel  polarity maceration method and to assay antioxidant activity of mindi’s extract  and to analyze phytochemical on the active extracts. 

METHODS.   This   research  used   the   bark   (inner   bark),   leaves,   branches, 

heartwood, and  sapwood of mindi that  extracted  with a  multilevel  maceration  method in n-hexane, ethyl acetate, and methanol solvent. Antioxidant activity of  extractive was suspected by DPPH method. Absorbans value that had got from  DPPH assay was processed to obtain IC50 values. Then the active extract  was  analyzed by phytochemical assay. 

RESULT AND DISCUSSION. The result of this research showed that the etyl  acetat fraction of leaves is the highest total extractive content (11,01%)   but the  etyl acetat fraction of   heartwood exhibited the highest radical scavenging with  IC50 1,88 ppm so that it can be classified to be strong antioxidant that is stronger  than   vitamine   C.   Phytochemical   analyzed   indicated   that   the   antioxidative  coumpounds  in  the  most  active  extract  were  flavonoid,  saponin,  alkaloid,  phenolic,  triterpenoid,  steroid  dan  glycoside.  Therefore  it  is  very  potential  to  amendable as natural antioxidant so that it can be used more efficient. 

 

RINGKASAN   

MITA NURDYANA. Aktivitas Antioksidan Zat Ekstraktif dari Pohon Mindi  (Melia azedarach Linn.). Dibawah bimbingan: Prof. Dr. Ir. Wasrin Syafii,  M.Agr dan Dr.Ir. Rita Kartika Sari, M.Si 

 

Upaya pemanfaatan seluruh bagian pohon (the whole tree utilization) perlu  dilakukan  untuk   meningkatkan  efisiensi  pemanfaatan   hasil   hutan  termasuk  pemanfaatan komponen kimia kayu berupa zat ekstraktif.   Pengetahuan tentang  zat  ekstraktif  sebagai  sumber  bahan  obat-obatan  telah  mendorong  berbagai  penelitian   untuk   mengungkapkan   kemungkinan   pemanfaatan   zat   ekstraktif  tersebut,  salah  satunya  sebagai  antioksidan.  Antioksidan  merupakan  senyawa  yang mampu menangkap radikal bebas yang menjadi penyebab beberapa penyakit  degeneratif (Hanani 2005). 

Menurut  Nahak  dan  Sahu  (2010a),  daun  mindi  (Melia  azedarach  Linn.)  yang tumbuh di India terbukti memiliki aktivitas antioksidan yang kuat.   Mindi  merupakan jenis kayu dari hutan rakyat yang memiliki kualitas kayu yang baik  dan cepat tumbuh (fast growing spesies).  Mengingat distribusi dan komposisi zat  ekstraktif tidak hanya dipengaruhi oleh jenis pohon tetapi juga dipengaruhi oleh  umur, tempat tumbuh, posisi dalam pohon, kayu gubal, dan kayu teras (Sjostrom  1998), maka penelitian mengenai aktivitas antioksidan zat ekstraktif dari pohon  mindi menarik untuk dilakukan. Penelitian ini bertujuan untuk menetapkan kadar  ekstrak  bagian  kulit,  daun,  cabang,  kayu  teras  dan  gubal  pohon  mindi  yang  diekstraksi dengan pelarut  organik  dengan kepolaran  bertingkat  (n-heksan,  etil  asetat   dan   metanol)   dan   menguji   aktivitas   antioksidan   ekstraknya   serta  menganalisis fitokimia ekstrak teraktif secara kualitatif. 

Penelitian ini menggunakan bahan baku berupa bagian daun, kulit, cabang  kayu gubal, dan kayu teras pohon mindi yang diekstrak dengan metode maserasi  bersinambung  dengan  pelarut  n-heksan,  etil  asetat,  dan  metanol.  Pengujian  aktivitas antioksidan dilakukan dengan metode DPPH hingga didapatkan ekstrak  teraktif,  kemudian  dianalisis  fitokimianya  secara  kualitatif.  Pengolahan  data  dilakukan  dengan  menggunakan  program  Microsoft  excel  sehingga  didapatkan  nilai kadar ekstrak dan IC50. 

Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  daun  mindi  menghasilkan  kadar  ekstrak tertinggi yaitu 11,01%, diikuti bagian kulit, cabang, kayu gubal, dan kayu  teras.  Berdasarkan  jenis  pelarut  yang  digunakan,  ekstrak  terlarut  etil  asetat  menghasilkan kadar tertinggi (16,09%), diikuti ekstrak terlarut metanol (3,49%)  dan n-heksan (3,06%). Ekstrak bagian kayu teras mindi dengan pelarut etil asetat  memiliki  aktivitas  antioksidan  tertinggi  dengan  nilai  IC50 mencapai  1,88  ppm  sehingga   tergolong   sebagai   antioksidan   sangat   kuat   bahkan   lebih   kuat  dibandingkan dengan vitamin C.  Hasil pengujian fitokimia menunjukkan bahwa  ekstrak  etil  asetat  bagian  kayu  teras  mindi  mengandung  flavonoid,  alkaloid,  terpenoid, steroid, triterpenoid, fenolik, dan glikosida. 

   

           

AKTIVITAS

 

ANTIOKSIDAN

 

ZAT

 

EKSTRAKTIF

 

DARI 

POHON

 

MINDI

 

(

Melia

 

azedarach

 

Linn.) 

                     

MITA

 

NURDYANA 

          Skripsi  Sebagai salah satu syarat memperoleh gelar  Sarjana Kehutanan pada  Departemen Hasil Hutan                               

DEPARTEMEN HASIL HUTAN  FAKULTAS KEHUTANAN  INSTITUT PERTANIAN BOGOR 

                                               

© Hak Cipta milik IPB, tahun 2012  Hak Cipta dilindungi Undang-undang   

Dilarang mengutip sebagian atau seluruh karya tulis ini tanpa mencantumkan  atau menyebutkan sumbernya. Pengutipan hanya untuk kepentingan pendidikan,  penelitian,  penulisan  karya  ilmiah,  penyusunan laporan,  penulisan  kritik,  atau  tinjauan suatu masalah; dan pengutipan tersebut tidak merugikan kepentingan  yang wajar IPB. 

Dilarang mengumumkan dan memperbanyak sebagian atau seluruh karya tulis  dalam bentuk apa pun tanpa izin IPB.

       

PERNYATAAN 

 

Dengan ini saya menyatakan bahwa skripsi berjudul Aktivitas Antioksidan  Zat  Ekstraktif  dari  Pohon  Mindi  (Melia  azedarach  Linn.)  adalah  karya  saya  sendiri dan belum pernah diajukan dalam bentuk apapun kepada perguruan tinggi  atau lembaga manapun. Sumber informasi yang berasal atau dikutip dari karya  yang diterbitkan maupun tidak diterbitkan dari penulis lain telah disebutkan dalam  teks dan dicantumkan dalam Daftar Pustaka di bagian akhir skripsi ini. 

     

Bogor, September 2012   

Mita Nurdyana  NRP E24080021

       

LEMBAR PENGESAHAN   

 

Judul  :  Aktivitas  Antioksidan  Zat  Ekstraktif  dari  Pohon  Mindi  (Melia  azedarach Linn.) 

Nama  : Mita Nurdyana 

NRP  : E24080021 

       

Menyetujui, 

Dosen Pembimbing I  Dosen Pembimbing II 

         

Prof. Dr. Ir. Wasrin Syafii, M.Agr  Dr. Ir. Rita Kartika Sari, M.Si 

NIP. 19541017 198003 1 004  NIP. 19681124 199512 2 001 

       

Mengetahui 

Ketua Departemen Hasil Hutan  Institut Pertanian Bogor   

           

Dr. Ir. Wayan Darmawan, M. Sc  NIP. 19660212 199103 1002   

      Tanggal lulus

KATA PENGANTAR   

   

Puji dan syukur penulis panjatkan  kepada Allah SWT atas segala karunia-  Nya, sehingga karya ilmiah yang berjudul Aktivitas Antioksidan Zat Ekstraktif  dari Pohon Mindi (Melia azedarach Linn.) dapat diselesaikan.   Karya ilmiah ini  merupakan  salah  satu  syarat  untuk  memperoleh  gelar  Sarjana  Kehutanan  di  Departemen Hasil Hutan, Fakultas Kehutanan, Institut Pertanian Bogor. 

Penulis  mengucapkan  terima  kasih  kepada  seluruh  pihak  yang  telah  membantu dalam penyelesaian karya tulis ini. Penulis menyadari bahwa tulisan ini  masih jauh dari sempurna. Oleh karena itu, segala kritikan dan saran akan penulis  terima dengan senang hati. Semoga karya ilmiah ini dapat bermanfaat. 

         

Bogor, September 2012   

     

UCAPAN TERIMA KASIH   

Pada  kesempatan  ini  penulis  mengucapkan  terimakasih  yang  sebesar-besarnya  kepada: 

1  Keluarga  tercinta,  Ayahanda  (Suchemi),  Ibu  (Sri  Endyowati),  dan  kakak  (Kurnia widi T) yang telah memberi semangat dan dukungan kepada penulis  dalam menyelesaikan karya ilmiah ini. 

2  Prof. Dr. Ir. Wasrin Syafii, M.Agr dan Dr. Ir. Rita Kartika Sari, M.Si selaku  dosen  pembimbing   skripsi  atas  segala  arahan,  bimbingan,  waktu,  dan  kesabaran  yang  telah  diberikan  kepada  penulis  selama  proses  penyusunan  skripsi ini. 

3  Dr. Ir. Burhanuddin Masyud, MS atas kesediaannya menjadi penguji utama  dan atas segala sarannya terhadap penelitian ini. 

4  Ir. Deded Sarip Nawawi, M.Sc atas kesediaannya menjadi pemimpin sidang  dan atas segala sarannya terhadap penelitian ini. 

5  Dr. Ir. Sucahyo Sadiyo, MS atas kesediaannya menjadi moderator seminar  dan atas segala sarannya terhadap penelitian ini. 

6  Kepada seluruh keluarga BKHH, Bapak  Atin, Mas Gunawan, dan  Kak Adi  Setiadi yang telah membantu serta memberikan motivasi kepada penulis  7  Sahabat-sahabat  THH angkatan 45, Siti Maemunah, Rahmawati, Dhewi P, 

Isya T, Desi M, Vebri R, Arip, Putri,  seluruh teman teman THH angkatan 45  yang penulis tidak bisa sebutkan satu persatu atas kebersamaannya selama  penulis menyelesaikan kegiatan belajar di kampus. 

8  Ibu Susi, Ibu Laya, dan seluruh staff THH. Terima kasih atas segala bantuan  yang telah diberikan kepada penulis selama penyusunan skripsi, seminar, dan  sidang. 

 

Bogor, September 2012   

     

RIWAYAT HIDUP 

 

Penulis dilahirkan di Kendal,  Jawa Tengah pada tanggal 16  Maret  1990  sebagai anak kedua dari dua bersaudara pasangan Bapak Suchemi dan Ibu Sri  Endyowati. Penulis menyelesaikan pendidikan sekolah dasar di SDN 02 Pegulon  Kendal tahun 2002, SMPN 02 Kendal tahun 2005, kemudian melanjutkan sekolah  di SMAN 01 Kendal  dan lulus tahun 2008. Tahun 2008 penulis diterima di IPB  melalui  jalur  Undangan  Seleksi  Mahasiswa  IPB  (USMI).  Penulis   memilih  Program  Studi  Teknologi  Hasil  Hutan,  Departemen  Hasil  Hutan,  Fakultas  Kehutanan.  Tahun  2011  penulis  memilih  Kimia  Hasil  Hutan  sebagai  bidang  keahlian. 

Selama   menuntut   ilmu   di  IPB,   penulis   aktif   di  beberapa   organisasi  kemahasiswaan  yakni  anggota  aktif  Kopma  IPB  2008-2009,  staf  Departemen  Sosmas BEM E Fahutan IPB 2009-2010, anggota Organisasi Mahasiswa Daerah  FOKMA Kendal, dan Pengurus  HIMASILTAN 2010-2011. Penulis juga pernah  melaksanakan Praktek Pengenalan Ekosistem Hutan (PPEH) di Gunung Sawal  dan Pangandaran Jawa Barat, melaksanakan Praktek Pengelolaan Hutan di Hutan  Pendidikan Gunung Walat Sukabumi, dan Praktek Kerja Lapang (PKL) di PGT  Sindangwangi Jawa Barat. 

Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Kehutanan pada  Fakultas   Kehutanan  Institut  Pertanian  Bogor,  penulis   melakukan  penelitian  dengan  judul  Aktivitas  Antioksidan  Zat  Ekstraktif  dari  Pohon  Mindi  (Melia  azedarach Linn.) dibawah bimbingan Prof. Dr. Ir Wasrin Syafii, M.Agr dan Dr.  Ir. Rita Kartika Sari, M.Si.

DAFTAR ISI   

Halaman 

DAFTAR TABEL ...   xi 

DAFTAR GAMBAR ...   xi 

DAFTAR LAMPIRAN...   xiii 

I.PENDAHULUAN ...   1 

1.1  Latar Belakang...   1 

1.2  Tujuan ...   2 

1.3  Manfaat Penelitian ...   2 

II.TINJAUAN PUSTAKA ...   3 

2. 1.   Zat Ekstraktif ...   3 

2. 2.   Esktraksi...   4 

2. 3.   Mindi ...   6 

2. 4.   Radikal Bebas ...   8 

2. 5.   Antioksidan ...   ..9 

2. 6.   Metode DPPH (1,1-dipenil-2-pikrilhidrazil) ...   9 

III.METODE PENELITIAN ...   13 

3.1  Waktu dan Tempat Penelitian ...   13 

3.2  Bahan dan Alat ...   13 

3.3  Metode Penelitian ...   13 

3.3.1  Penyiapan Bahan Baku ...   14 

3.3.2  Ekstraksi...   15 

3.3.3  Pengujian...   16 

IV.HASIL DAN PEMBAHASAN ...   20 

4.1.  Kadar Zat Ekstraktif Mindi ...   20 

4.2  Sifat Antioksidan Ekstrak Kayu Mindi ...   23 

4.3.  Fitokimia Ekstrak Teraktif ...   27 

V.KESIMPULAN DAN SARAN ...   30 

5.1  Kesimpulan...   30 

5.2  Saran ...   30 

DAFTAR PUSTAKA ...   31 

 

DAFTAR TABEL 

 

Halaman 

 

1  Sifat fisika kimia beberapa pelarut ………...   6  2  Kadar ekstrak  bagian pohon mindi ………...   20  3  Nilai kadar ekstrak kayu mindi berdasarkan posisi batang dalam 

pohon………... 23 

4  Aktivitas antioksidan zat ekstraktif berbagai bagian pohon mindi (nilai 

IC50)…...  23  5  Hasil analisis fitokimia secara kualitatif terhadap serbuk dan ekstrak teraktif 

DAFTAR GAMBAR 

   

Halaman   

1  Profil mindi (A) pohon  dan (B) daun ……….……… ...  7 

2  Pengambilan contoh uji serbuk………..……...15 

3  Proses eksraksi maserasi bersinambung……….. 16 

4  Diagram alir uji aktivitas antioksidan ekstrak mindi ………...  18 

5  Kurva hubungan antara konsentrasi ekstrak etanol berbagai bagian pohon  mindi  dengan persen inhibisi………...  24 

6  Nilai IC50 ekstrak etil asetat kayu teras dan vitamin C menggunakan metode  DPPH……….27

DAFTAR LAMPIRAN 

 

Halaman 

 

1.  Hasil Identifikasi Spesies Pohon (LIPI Cibinong)………. ………36  2.  Hasil Pengujian Fitokimia di Balittro Cimanggu………37

I.  PENDAHULUAN 

     

1.1  Latar Belakang   

Kayu  merupakan  komoditas  utama  dari  hutan  yang  dimanfaatkan  oleh  masyarakat Indonesia dan merupakan penyumbang devisa negara terbesar selain  minyak   bumi   dan   hasil  tambang   lainnya.   Kebutuhan   akan  kayu   semakin  meningkat  seiring  dengan  pertambahan  penduduk.  Namun,  luas  areal  hutan  penghasil kayu-kayu komersil semakin menyusut. Sementara itu, tingkat efisiensi  pemanfaatan  kayu  saat  ini  masih  tergolong  rendah.  Secara  umum,  mulai  dari  industri pemanenan hingga pengolahan kayu masih banyak menghasilkan limbah.  Oleh  karena  itu,  upaya  peningkatan  efisiensi  pemanfaatan  hasil  hutan  perlu  dilakukan melalui penerapan konsep the whole tree utilization yaitu pemanfaatan  seluruh bagian pohon terutama bagian-bagian pohon yang belum termanfaatkan  secara  maksimal  seperti  daun,  kulit,  akar  atau  limbah-limbah  kayu  lainnya  termasuk semua komponen yang terdapat dalam kayu (Syafii 2008). 

Zat  ekstraktif  sebagai  hasil  metabolisme  sekunder  merupakan  salah  satu  komponen kimia kayu nonstruktural dan berbobot molekul rendah.   Pada proses  pulping dan proses pengerjaan kayu, zat ekstraktif sering dianggap merugikan.  Akan   tetapi,   zat   ekstraktif   memiliki   berbagai   fungsi,   antara   lain   sebagai  antiserangga,  antioksidan,  antivirus,  antibakteri,  sitotoksin,  dan  anticendawan  (Walker 2006).  Pengetahuan tentang peranan zat ekstraktif sebagai sumber bahan  obat-obatan   telah   mendorong   berbagai   penelitian   untuk  mengungkapkan  kemungkinan pemanfaatan senyawa tersebut, antara lain sebagai antioksidan. 

Menurut  Stevanovic  et  al.  (2009),  beberapa  jenis  zat  ekstraktif  yang  diisolasi   dari   tumbuhan   berkayu   yang   tumbuh   di   hutan   seperti   lignan,  proantosianidin,   senyawa   fenolik  sederhana,   fenol  glikosida,   dan  flavonoid  memiliki aktivitas antioksidan yang kuat.  Antioksidan merupakan senyawa yang  mampu  menangkap  radikal  bebas  yang  menjadi  penyebab  beberapa  penyakit  degeneratif  seperti  penyakit  jantung,  kanker,  arteoklerosis,  dan  penuaan  dini.  Antioksidan   sintetik   yang   banyak   digunakan   selama   ini   memiliki   efek  karsinogenik. Oleh karena itu, sumber antioksidan alami yang aman, ekonomis,

dan  memiliki  aktivitas  yang  kuat  dibutuhkan  sebagai  pengganti  antioksidan  sintetik.   Penelitian mengenai alternatif sumber antioksidan alami semakin marak  dilakukan  mengingat  kemampuannya  sebagai  peredam  radikal  bebas.  Antioksidan tidak hanya banyak digunakan dalam industri farmasi tapi juga dalam  industri makanan dan kosmetik. 

Menurut  Nahak  dan  Sahu  (2010a),  daun  mindi  (Melia  azedarach  Linn.)  yang   tumbuh   di  India   terbukti   memiliki   aktivitas   antioksidan   yang   kuat.  Sementara itu, penelusuran pustaka mengenai penelitian potensi antioksidan zat  ekstraktif dari pohon mindi yang tumbuh di Indonesia belum ditemukan. Padahal,  menurut Sjostrom (1998), distribusi dan komposisi zat ekstraktif dipengaruhi oleh  jenis pohon, umur, tempat tumbuh, posisi dalam pohon, kayu gubal, dan kayu  teras. Oleh karena itu, penelitian aktivitas antioksidan zat ekstraktif dari pohon  mindi yang tumbuh di Indonesia perlu dilakukan. 

   

1.2  Tujuan Penelitian 

 

Penelitian ini bertujuan untuk menetapkan kadar ekstrak bagian kulit, daun,  cabang,  kayu  teras  dan  gubal  pohon  mindi  yang  diekstraksi  dengan  pelarut  organik  dengan  kepolaran  bertingkat  (n-heksan,  etil  asetat  dan  metanol)  dan  menguji  aktivitas  antioksidan  ekstraknya,  serta  menganalisis  fitokimia  ekstrak  teraktif secara kualitatif. 

   

1.3  Manfaat Penelitian 

 

Penelitian ini dapat memberikan pengetahuan baru mengenai potensi mindi  sebagai antioksidan  dalam rangka  mencari  alternatif sumber  antioksidan  alami  sehingga mindi dapat dimanfaatkan dengan lebih optimal.

II.  TINJAUAN PUSTAKA 

     

2. 1.  Zat Ekstraktif 

 

Sjostrom  (1998)  mendefinisikan  zat  ekstraktif  sebagai  beraneka  ragam  senyawa kimia kayu, meskipun biasanya merupakan bagian kecil yang larut dalam  pelarut-pelarut organik  netral atau air.  Zat  ekstraktif dapat  dibagi menjadi tiga  subgrup  yaitu  komponen  alifatik  (lemak  dan  lilin),  terpen,   terpenoid,  dan  komponen fenolik.  Ekstraktif meliputi sejumlah besar senyawa yang berbeda dan  dapat  diekstraksi  dari  kayu  dengan  menggunakan  pelarut  polar  dan  nonpolar.  Secara   kuantitatif,   kandungan  zat   ekstraktif  dalam  kayu   paling   kecil  bila  dibandingkan  dengan  kandungan  selulosa  dan  lignin,  tetapi  secara  kualitatif  mempunyai pengaruh yang  besar terhadap sifat  kayu dan sifat  pengolahannya.  Menurut Syafii dan Siregar (2006), zat ekstraktif mempengaruhi proses pulping,  dimana semakin tinggi kandungan zat ekstraktif maka akan semakin tinggi pula  konsumsi  bahan  kimia   yang  diperlukan  dalam  proses   pulping  serta  dapat  menyebabkan   terjadinya   masalah   pitch,   yaitu   terjadinya   bintik-bintik   pada  lembaran pulp yang dihasilkan. 

Hal yang mempengaruhi kandungan zat ekstraktif dalam kayu di antaranya  adalah   umur,   tempat   tumbuh,   genetik,   posisi   dalam   pohon,   kecepatan  pertumbuhan, dan jenis pelarut yang digunakan. Penelitian terhadap 480 sampel  Pinus echinata yang hidup pada kondisi dan umur berbeda menunjukkan bahwa  umur  mempunyai  pengaruh  yang  sangat  dominan  dalam  jumlah  zat  ekstraktif  (Hillis 1987). 

Adanya  variasi  kandungan  zat  ekstraktif  tidak  hanya  terdapat  di  antara  spesies, umur atau tempat tumbuh, tetapi juga dalam pohon yang sama, terutama  di antara kayu gubal dan kayu teras (Tsoumis 1991).   Umumnya bagian-bagian  yang  berbeda  dari  pohon  yang  sama  memiliki  jumlah  maupun  komposisi  zat  ekstraktif yang berbeda (Sjostrom 1998). 

Senyawa bioaktif merupakan senyawa yang mempunyai aktivitas biologis  terhadap  organisme  lain  atau  pada  organisme  yang  menghasilkan  senyawa  tersebut. Senyawa bioaktif ini juga banyak terkandung pada zat ekstraktif.  Hutan

tropika  Indonesia  memiliki  sumber  senyawa-senyawa  metabolit  sekunder  (zat  ekstraktif)  yang  tak ternilai.  Senyawa-senyawa  ini dapat  dimanfaatkan sebagai  bahan obat untuk mengatasi berbagai penyakit. Obat-obatan modern yang beredar  di pasaran merupakan hasil eksplorasi zat ekstraktif tumbuhan yang terdapat di  hutan tropis.  Senyawa bioaktif ini hampir selalu toksik pada dosis tinggi. Setiap  zat kimia termasuk senyawa aktif dari tumbuhan pada dasarnya bersifat racun,  bergantung kepada penggunaan, takaran, pembuatan, cara pemakaian, dan waktu  yang  tepat   untuk   mengkonsumsi.   Beberapa   tanaman  dikenal  menghasilkan  senyawa bioaktif yang umumnya berupa senyawa-senyawa flavonoid, glikosida,  steroid, alkaloid, dan terpenoid (Meilani 2006).   Ekstrak daun sicerek (Clausena  excavate  Burm.)  yang  terbukti  berperan  sebagai  antioksidan  dengan  cara  menghambat  peroksida lipid  mengandung  senyawa alkaloid, steroid, terpenoid,  dan flavonoid (Irawan 2006). 

   

2. 2.  Ekstraksi 

 

Harborne (1987) menyatakan bahwa ekstraksi adalah proses pengambilan  zat terlarut dari suatu campuran dengan bantuan pelarut secara selektif. Metode  ekstraksi yang digunakan tergantung pada beberapa faktor, yaitu tujuan yang ingin  dicapai dari ekstraksi, skala ekstraksi, sifat-sifat (polaritas) komponen yang akan  diekstrak, dan sifat-sifat pelarut yang digunakan.   Houghton dan Raman (1998)  menjelaskan bahwa ada beberapa metode umum ekstraksi yang dapat dilakukan,  yaitu  ekstraksi  dengan  pelarut,  distilasi,  supercritical  fluid  extraction  (SFE),  pengepresan  mekanik,  dan  sublimasi.  Di  antara  metode-metode  yang  telah  diaplikasikan,  metode  yang  banyak  digunakan  adalah  distilasi  dan  ekstraksi  menggunakan pelarut.   Sarker et al. (2006) menyatakan bahwa beberapa tujuan  dari  ekstraksi  adalah  mengetahui  senyawa  bioaktif,  mengetahui  keberadaan  senyawa  dalam  organisme,  hubungan  struktur  senyawa  dalam  organisme,  dan  identifikasi seluruh senyawa bioaktif yang ada pada organisme. 

Ekstraksi berbagai bagian pohon mindi pada penelitian ini dilakukan dengan  menggunakan metode ekstraksi maserasi. Maserasi merupakan salah satu teknik  ekstraksi  yang  bertujuan  menarik  suatu  komponen  tertentu  dengan  merendam  sampel  dalam  pelarut  organik  pada  suhu  kamar,  dan  dalam  prosesnya  tidak

dilakukan   pemanasan.   Perendaman   dilakukan   pada   jangka   waktu   tertentu  sehingga  interaksi  antara  senyawa  yang  ingin  diekstrak  dan  pelarutnya  dapat  berlangsung  maksimal.  Menurut  Harborne (1987),  kekurangan  dari metode ini  adalah  waktu  yang  diperlukan  relatif  lama  dan  membutuhkan  banyak  pelarut.  Namun  bila  ekstraksi  menggunakan  cara  panas  dikhawatirkan  akan  merusak  komponen  sampel  yang  dianalisis  akibat  pemanasan.  Oleh  karena  itu,  metode  maserasi dianggap lebih tepat untuk mengekstrak jaringan tanaman yang belum  diketahui kandungan senyawanya yang kemungkinan bersifat tidak tahan panas  sehingga  kerusakan  komponen  tersebut  dapat  dihindari.  Selain  itu,  metode  maserasi relatif lebih sederhana dibandingkan dengan yang lain.  Ekstraksi dengan  metode maserasi tidak banyak memerlukan peralatan laboratorium. 

Hasil ekstraksi  yang  diperoleh  bergantung  pada  kandungan ekstrak  yang  terdapat   pada  contoh  uji  dan   jenis  pelarut   yang  digunakan.   Untuk  dapat  melarutkan zat ekstraktif perlu ditambahkan dua atau lebih jenis pelarut. Proses  ekstraksi berkesinambungan dengan menggunakan sederetan pelarut yang berbeda  tingkat kepolarannya merupakan prosedur klasik untuk memperoleh kandungan  senyawa organik dari jaringan tumbuhan kering  (Harborne 1987).   Fengel dan  Wegener  (1995)  menyatakan  bahwa  ekstraksi  kayu  meliputi  sejumlah  besar  senyawa  yang  berbeda  yang  dapat  diekstraksi dari kayu  dengan  menggunakan  pelarut polar dan nonpolar.  Polaritas sering diartikan sebagai adanya pemisahan  kutub muatan positif dan negatif dari suatu molekul sebagai akibat terbentuknya  konfigurasi tertentu  dari atom-atom penyusunnya.   Dengan demikian,  molekul  tersebut  dapat  tertarik  oleh  molekul yang  lain  yang  juga  mempunyai polaritas  yang kurang lebih sama.   Senyawa yang terbawa pada proses ekstraksi adalah  senyawa yang mempunyai polaritas sesuai dengan pelarutnya.   Prinsip kelarutan  adalah “like dissolve like”, yaitu (1) pelarut polar akan melarutkan senyawa polar,  demikian juga sebaliknya pelarut  nonpolar akan melarutkan senyawa nonpolar,  (2)   pelarut   organik   akan   melarutkan  senyawa   organik.  Harborne   (1987)  mengemukakan  bahwa  ekstraksi  senyawa  aktif  dari  suatu  jaringan  tanaman  dengan  berbagai  jenis  pelarut  pada  tingkat  kepolaran  yang  berbeda  bertujuan  memperoleh hasil yang optimum, baik jumlah ekstrak maupun senyawa aktif yang  terkandung dalam contoh uji.

Jenis  dan  mutu  pelarut  yang  digunakan  sangat  menentukan  keberhasilan  proses  ekstraksi.  Pelarut  yang  digunakan  harus  dapat  melarutkan  zat  yang  diinginkan, mempunyai titik didih yang rendah, murah, dan tidak toksik (Ketaren  1986).   Sifat  penting  yang  harus diperhatikan dalam pemilihan  pelarut  adalah  kepolaran senyawa yang dilihat dari gugus polarnya (gugus OH, COH, dan lain-  lain). Derajat polaritas tergantung pada tahapan dielektrik, makin besar tahapan  dielektrik semakin polar pelarut tersebut (Hafiluddin 2011). Tabel 1 menguraikan  mengenai sifat fisika kimia pelarut organik yang digunakan dalam penelitian ini,  yaitu n-heksan, etil asetat, dan metanol.  Ketiga jenis pelarut ini digunakan karena 

memenuhi  kriteria  pelarut  yang  baik  yang  memiliki  kepolaran  dari  nonpolar,  semipolar hingga polar. 

 

Tabel  1 Sifat fisika kimia beberapa pelarut 

Nama pelarut  Indeks kepolaran  Titik didih (°C)  Sifat kepolaran 

n-Heksan  0,0  69  Nonpolar 

Etil Asetat  4,4  77  Semipolar 

Metanol  5,1  65  Polar 

 

Sumber: Sarker et al. (2006).   

 

2. 3.  Mindi 

 

Melia  azedarach  Linn.  dikenal  di  beberapa  daerah  di  Indonesia  dengan  sebutan mindi atau gring-gring (Jawa), sedangkan di beberapa negara lain pohon  ini  dikenal dengan sebutan white cedar, umbrella tree atau chinaberry (English),  paraiso, Pride of Indian  atau Indian lilac (India) ( USDA 2012). 

Mindi termasuk dalam famili Meliaceae yang merupakan jenis pohon cepat  tumbuh, selalu hijau di daerah tropis, menggugurkan daun selama musim dingin,  menyukai cahaya, cukup tahan kekeringan, dan toleran terhadap salinitas tanah  (Bramasto  2011).  Gambar  1  menunjukkan  profil  pohon  dan  daun  mindi.  Tanaman  mindi  pada  umur  10  tahun  tingginya  dapat  mencapai  tinggi  bebas  cabang 8 m dan diameter  40 cm.

                                     

(A)  (B) 

Gambar 1 Profil mindi (A) pohon dan (B) daun.   

Mindi memiliki penyebaran alami di India dan Burma.  Pohon ini  banyak  ditanam di  daerah tropis dan  subtropis,  sedangkan  di Indonesia  mindi  banyak  ditanam di daerah Sumatera, Jawa, Nusa Tenggara, dan Irian Jaya. Pohon mindi  tumbuh  pada  daerah  dataran  rendah  hingga  dataran  tinggi  (0-1200  m  di  atas  permukaan laut) dengan curah hujan rata-rata per tahun 600-2000 mm dan dapat  tumbuh  pada  berbagai  tipe  tanah.  Mindi  dapat  tumbuh  subur  pada  tanah  berdrainase baik, tanah yang dalam, tanah liat  berpasir, toleran terhadap tanah  dangkal, tanah asin, dan basa (Bramasto 2011). 

Mindi   merupakan   tanaman   serbaguna   karena   dapat   digunakan   untuk  berbagai  keperluan.  Kayu  mindi  dapat  digunakan  dalam  bentuk  kayu  utuh  misalnya  sebagai komponen rumah,  mebel,  dan  barang  kerajinan.  Kayu  mindi  merupakan salah satu jenis kayu dari hutan rakyat yang digunakan sebagai bahan  baku mebel untuk ekspor dan domestik. Tanaman mindi memiliki prospek yang  baik  karena  kayunya   sudah   cukup  dikenal  oleh  masyarakat.   Potensi  ini  menjadikan  alasan  mindi  untuk  dikembangkan  menjadi  tanaman  hutan  rakyat.  Kayu mindi tergolong kelas kuat III-II, setara dengan mahoni, sungkai, meranti,  dan kelas awet IV (Nasution 2009). 

Ekstrak  daun  mindi   dapat  digunakan   pula  sebagai  bahan   untuk  mengendalikan hama termasuk belalang. Kulit  mindi dipakai sebagai penghasil

obat  untuk  mengeluarkan  cacing  usus.  Kulit,  daun,  dan  akar  mindi  telah  digunakan sebagai obat rematik, demam, bengkak, dan radang. Suatu glycopeptide  yang  disebut  meliacin  diisolasi  dari  daun  dan  akar  mindi  berperan  dalam  menghambat   perkembangan  beberapa  DNA  dan  RNA  dari  beberapa  virus  misalnya virus polio (Nasution 2009). 

Beberapa  penelitian  aktivitas  antioksidan  terhadap  keluarga  Meliaceae  sudah  banyak  dilakukan  salah  satunya  tanaman  mimba  (Azadiracta  indica),  dimana daun dan kulit mimba terbukti memiliki aktivitas antioksidan yang cukup  tinggi (Ghimeray et al. 2002).   Penelitian mengenai aktivitas antioksidan daun  (Nahak dan Sahu 2010a), kulit, dan akar (Nahak dan Sahu 2010b) dari pohon  mindi dan mimba pernah dilakukan di India. Penelitian tersebut menyimpulkan  bahwa ekstrak  pohon  mindi  bagian daun,  kulit,  dan akar  mempunyai aktivitas  antioksidan yang lebih kuat dibandingkan dengan mimba. Menurut penelusuran  pustaka penelitian  mengenai potensi antioksidan bagian tanaman yang lain seperti  cabang, kayu gubal dan kayu teras belum pernah dilakukan sebelumnya terutama  di Indonesia. 

   

2. 4.  Radikal Bebas   

Radikal bebas adalah atom atau gugus atom yang memiliki satu atau lebih  elektron  tak  berpasangan.  Adanya  elektron  tidak  berpasangan  menyebabkan  senyawa  tersebut  sangat  reaktif  mencari pasangan.  Radikal  ini  akan  merebut  elektron  dari  molekul  lain  yang  ada  di  sekitarnya  untuk  menstabilkan  diri  sehingga senyawa kimia ini sering dihubungkan dengan terjadinya kerusakan sel,  kerusakan  jaringan,  dan  proses  penuaan  (Fessenden  dan  Fessenden  1986).  Menurut Ketaren (1986), radikal bebas dapat bereaksi dengan molekul sel tubuh  dengan cara  mengikat  elektron sel tersebut  dan mengakibatkan reaksi berantai  yang menghasilkan radikal bebas baru.  Reaksi ini dapat berakhir jika ada molekul  yang memberikan elektron yang dibutuhkan oleh radikal bebas tersebut atau dua  buah gugus radikal bebas membentuk ikatan nonradikal.   Radikal bebas dalam  tubuh  pada  dasarnya  diperlukan  untuk  memerangi peradangan,  mengendalikan  tonus otot polos pembuluh darah, dan organ-organ dalam tubuh serta membunuh  bakteri.  Radikal  bebas  dapat  bekerja  dengan  aman  dan  efektif  dalam  tubuh

manusia  bila  jumlahnya  tidak  berlebihan.  Bila  jumlahnya  berlebihan  akan  menyerang   jaringan   tubuh   dan   menghasilkan   efek   sitotoksik   yang   sangat  berbahaya.  Radikal  bebas  selanjutnya  merusak  sel  dan  jaringan  dalam  tubuh  sehingga menimbulkan berbagai penyakit degeneratif. 

Menurut  Hussain  et  al.  (2003),  radikal  bebas  bersifat  sangat  reaktif dan  mampu bereaksi dengan protein, lipid, karbohidrat, atau asam deoksiribonukleat  (DNA) sehingga terjadi perubahan pada struktur dan fungsi sel. Radikal bebas  juga diyakini berperan dalam kerusakan DNA sel yang menyebabkan mutasi sel  sehingga sel-sel tubuh tak terkendali, kemudian menjadi kanker.   Stres oksidatif  adalah  kerusakan  sel  yang  disebabkan  reaksi  kimia  antara  radikal  bebas  dan  molekul  dalam  tubuh.  Kerusakan  sel  yang  disebabkan  oleh  stress  oksidatif  dipercaya menjadi penyebab penyakit kanker. 

Dalam kehidupan organisme radikal bebas dapat terbentuk melalui berbagai  cara  misalnya  dari  hasil  metabolisme  sel,  hasil  samping  proses  oksidasi  atau  pembakaran yang berlangsung pada waktu bernapas, olahraga yang berlebihan,  dan  faktor  eksternal,  seperti  asap  kendaraan  bermotor,   asap  rokok,  bahan  pencemar, zat kimiawi dalam makanan, pestisida, dan radiasi matahari atau radiasi  kosmis (Ahmed et al. 2008). 

   

2. 5. Antioksidan 

Antioksidan merupakan senyawa kimia yang penggunaannya sudah banyak  dikenal oleh masyarakat. Hal ini berkaitan dengan kemampuan antioksidan untuk  menghambat reaksi oksidatif oleh radikal bebas yang menjadi salah satu penyebab  penyakit-penyakit  degeneratif  seperti  penyakit  jantung,  alzhaimer,  kanker,  dan  gejala  penuaan  dini  (Ahmed  et  al.2008;  Stevanovic  et  al.  2009).  Antioksidan  dapat menyumbangkan satu atau lebih elektron kepada radikal bebas, sehingga  radikal  bebas  tersebut  dapat  diredam.  Tubuh  manusia  pada  dasarnya  menghasilkan  senyawa  antioksidan,  tetapi  jumlahnya  sering  kali  tidak  cukup  untuk menetralkan radikal bebas yang masuk ke dalam tubuh.   Sebagai contoh,  tubuh  manusia  dapat  menghasilkan  glutathione,  salah  satu  antioksidan  yang  sangat kuat, hanya saja tubuh memerlukan asupan vitamin C sebesar 1.000 mg  untuk memicu tubuh menghasilkan glutathione ini (Kuncahyo dan Sunardi 2007).

Antioksidan terbagi menjadi antioksidan enzim dan vitamin.   Antioksidan  enzim meliputi superoksida dismutase (SOD), katalase dan glutation peroksidase  (GSH.Prx).  Antioksidan vitamin lebih populer sebagai antioksidan dibandingkan  enzim.   Antioksidan vitamin mencakup _α-tokoferol (vitamin E), _β-karoten, dan  asam  askorbat  (vitamin  C)  (Kuncahyo  dan  Sunardi  2007).  Menurut  sumber  perolehannya ada 2 macam antioksidan, yaitu antioksidan alami dan antioksidan  buatan (sintetik).   Antioksidan sintetik yang biasa digunakan adalah Vitamin C  sintetik, butylated hydroxytoluene (BHT) dan butylated hydroxyanisole (BHA).  Antioksidan sintetis memiliki efektivitas yang tinggi namun kurang aman bagi  kesehatan.   Adanya kekhawatiran akan kemungkinan efek samping yang belum  diketahui  dari  antioksidan  sintetik  menyebabkan  antioksidan  alami  menjadi  alternatif yang sangat dibutuhkan (Romansyah 2011). 

Antioksidan  alami  mampu  melindungi  tubuh  terhadap  kerusakan  yang  disebabkan  spesies  oksigen  reaktif,  mampu  menghambat  terjadinya  penyakit  degeneratif, dan mampu menghambat peroksida lipid pada makanan. Minat untuk  mendapatkan antioksidan alami cenderung meningkat beberapa tahun terakhir ini.  Antioksidan   alami   umumnya   mempunyai   gugus   hidroksil   dalam   struktur  molekulnya  (Kuncahyo  dan  Sunardi  2007).  Antioksidan  menghambat  pembentukan radikal bebas dengan bertindak sebagai donor H terhadap radikal  bebas  sehingga  radikal  bebas  berubah  menjadi  bentuk  yang  lebih  stabil  (Aini  2007).  Contoh  antioksidan  alami  diantaranya  asam  askorbat,  α-tokoferol,  β-  karoten,  glutasi,  asam  urat,  sistein,  vitamin  K,  serum  albumin,  bilirubin,  dan  logam seperti seng, dan selenium. 

Antioksidan  alami  banyak  dihasilkan  oleh  hewan  dan  tumbuhan  sebagai  hasil  dari  metabolit  sekunder.  Salah  satunya  adalah  flavonoid  yang  tergolong  dalam senyawa fenolik.   Antioksidan diharapkan memiliki ciri-ciri di antaranya  aman dalam penggunaan,  tidak  memberi flavor,  odor  dan warna pada produk,  efektif  pada  konsentrasi  rendah,  tahan  terhadap  proses  pengolahan  produk  berkemampuan antioksidan yang  baik, dan tersedia dengan harga yang  murah.  Selain  berperan dalam menghambat  reaksi oksidatif, antioksidan juga berperan  dalam   menghambat   terjadinya   proses   oksidasi   dari   lemak   dan   minyak,  memperkecil terjadinya proses kerusakan dalam makanan, memperpanjang masa

pemakaian   dalam   industri   makanan,   meningkatkan   stabilitas   lemak   yang  terkandung dalam makanan serta mencegah hilangnya kualitas sensori dan nutrisi.  Antioksidan tidak hanya digunakan dalam industri farmasi, tetapi juga digunakan  secara  luas  dalam  industri  makanan,  industri  petroleum,  industri  karet  dan  sebagainya (Kuncahyo dan Sunardi 2007). 

   

2. 6.  Metode DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil)   

Metode yang umum digunakan untuk menguji aktivitas antioksidan suatu  bahan   adalah   metode   DPPH.   Metode   ini   merupakan   metode   penentuan  antioksidan berdasarkan penangkapan radikal bebas.  DPPH merupakan senyawa  radikal  bebas   yang   larut   dalam  pelarut   polar  seperti  metanol  dan  etanol.  Penangkapan radikal bebas pada metode ini diukur berdasarkan nilai absorbansi  pada panjang gelombang 515-520 nm.   Awalnya larutan DPPH berwarna ungu  gelap, ketika ditambahkan senyawa antioksidan maka warna larutan akan  berubah  menjadi kuning cerah.  Penurunan absorbansi akan menunjukkan adanya aktivitas  penghambatan  dengan  berkurangnya  warna  ungu  (Molyneux  2004).  DPPH  merupakan  radikal  yang  stabil  yang  dapat  diukur  intensitasnya  pada  panjang  gelombang  515  nm  (Rohman  dan  Sugeng  2005).  Senyawa  antioksidan  akan  bereaksi dengan radikal DPPH melalui mekanisme donasi atom hidrogen (Blois  1958 dalam Hanani 2005). 

Metode DPPH dipilih  karena metode ini adalah  metode sederhana untuk  evaluasi  aktivitas  antioksidan.  Selain  itu,  juga  cepat  dan  peka  serta  hanya  memerlukan sedikit  sampel.  Radikal DPPH telah digunakan  secara  luas untuk  menyelidiki aktivitas dari beberapa senyawa alami, seperti fenolik, antosianin, dan  ekstrak kasar dari tumbuhan (Huang et al. 2005). 

Parameter untuk menginterpretasikan hasil pengujian dengan metode DPPH  adalah  IC50  (inhibition  concentration).  IC50  merupakan  besarnya  konsentrasi  larutan  uji  yang  mampu  menurunkan  50%  absorbansi  DPPH  dibandingkan  dengan  larutan  blanko.  Persamaan  kurva  standar  dari  persen  inhibisi  sebagai  sumbu  y dan konsentrasi fraksi antioksidan sebagai sumbu  x diperlukan untuk  menentukan IC50.   IC50 dihitung dengan cara memasukkan nilai 50% ke dalam  persamaan  kurva  standar  sebagai  sumbu  y  kemudian  dihitung  nilai  x  sebagai

konsentrasi IC50. Dalam hal  ini diharapkan radikal bebas dapat  ditangkap  oleh  senyawa antioksidan hanya dengan konsentrasi yang kecil (Pratiwi 2009).

III. METODE PENELITIAN 

     

3.1  Waktu dan Tempat Penelitian   

Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan  Desember  2011-Maret  2012  dan  dilanjutkan pada bulan Juli-Agustus 2012 bertempat di Laboratorium Kimia Hasil  Hutan  dan  Workshop  Teknologi  Peningkatan  Mutu  Kayu,  Departemen  Hasil  Hutan,  Fakultas  Kehutanan,  Institut  Pertanian  Bogor,  Herbarium  Bogoriense  bidang  Botani Pusat  Penelitian  Biologi  Lembaga  Ilmu  Pengetahuan  Indonesia  (LIPI)  Cibinong  serta  Balai  Penelitian  Tanaman  Rempah  dan  Obat  (Balittro)  Cimanggu dan Laboratorium Biofarmaka IPB Bogor. 

   

3.2  Bahan dan Alat   

Bahan-bahan yang digunakan dalam  penelitian ini adalah kayu teras, kayu  gubal, daun, cabang dan kulit (inner bark) pohon mindi berumur ± 5 tahun dengan  diameter ± 20 cm dan panjang ± 6,15  m yang  berasal dari daerah Cibeureum  Bogor.   Bahan lain yang digunakan adalah pelarut seperti n-heksan, etil asetat,  metanol, DPPH, etanol, DMSO (dimetil sulfoksida), dan vitamin C. 

Peralatan yang digunakan antara lain labu erlenmeyer, tabung reaksi, gelas  piala, gelas ukur, pipet volumetrik, toples kaca, corong, kertas saring, alat suling,  golok, hammer mill, evaporator putar, cawan porselin, oven, neraca analitik, dan  eliza reader. 

   

3.3  Metode Penelitian   

Adapun rangkaian metode penelitian dimulai dengan penyiapan bahan baku,  ekstraksi  dengan  metode  maserasi,  uji  aktivitas  antioksidan  dengan  metode  DPPH, dan analisis senyawa bioaktif dengan metode fitokimia.

3.3.1 Penyiapan Bahan Baku 

 

Persiapan  bahan  baku  penelitian  meliputi  persiapan  bahan  baku  serbuk  bagian  pohon  mindi  (daun,  kulit,  cabang,  kayu  gubal,  dan  kayu  teras)  dan  persiapan pelarut. 

   

a.  Bahan Baku Serbuk  Bagian Pohon Mindi 

 

Sampel diambil dari pohon mindi berumur 5 tahun asal Cibeureum Bogor  yang telah diidentifikasi di Herbarium Bogoriense bidang Botani Pusat Penelitian  Biologi Lembaga Ilmu Pengetahuan Indinesia (LIPI) Cibinong, Kabupaten Bogor.  Hasil identifikasi dapat dilihat pada Lampiran 1. Bagian yang diambil meliputi  daun, cabang, kulit, kayu teras, dan kayu gubal.  Untuk bagian kulit, bagian yang  diambil adalah bagian kulit  dalam,  sedangkan untuk  bagian batang,  baik  teras  maupun gubal diambil dari posisi pangkal, tengah, dan ujung. 

Dalam tahapan ini, contoh uji bagian daun dipotong kecil-kecil, kemudian  dikeringudarakan.  Setelah  kering,  contoh  uji  digiling  dengan  menggunakan  hammer mill dan disaring hingga berbentuk serbuk dengan ukuran seragam (40-60  mesh) sebanyak 20 g untuk setiap ulangan.   Begitu pula untuk bagian kulit dan  cabang,  sedangkan  untuk  kayu  dipisahkan  bagian  kayu  teras  dan  gubalnya.  Bagian kayu teras dan gubal dibagi lagi menjadi 3 bagian yaitu bagian pangkal,  tengah, dan ujung. Selanjutnya pengambilan contoh uji dilakukan secara acak.  Serbuk  yang  seragam  dipisahkan  ke  dalam  empat  bagian,  dan  dari  keempat  bagian  tersebut  diambil  satu  bagian  secara  acak  yang  selanjutnya  dipisahkan  kembali ke dalam empat bagian. Setelah itu, dari keempat bagian tersebut diambil  satu  bagian  serbuk  yang  kemudian  ditimbang  sebanyak  ±  20  g.  Tahapan  pengambilan contoh uji tersebut dilakukan sebanyak 3 kali ulangan (Gambar 2).

                        Gambar 2 Pengambilan contoh uji serbuk. 

   

b.  Pelarut Organik 

 

Pelarut  organik  teknis  yang  digunakan  terdiri  dari  3  jenis,  yaitu  pelarut  nonpolar (n-heksan), pelarut semipolar (etil asetat) dan pelarut polar (metanol).  Sebelum digunakan, masing-masing pelarut terlebih dahulu dimurnikan dengan  metode penyulingan pada titik didih masing-masing pelarut. 

   

3.3.2 Ekstraksi   

Ekstraksi  dilakukan  dengan  metode  maserasi  secara  berkesinambungan  dengan  menggunakan  pelarut  n-heksan,  etil  asetat,  dan  metanol  (Gambar  3).  Metode maserasi dilakukan dengan  merendam contoh uji (serbuk)  sebanyak 20 g  dalam 100 mL pelarut atau dengan perbandingan serbuk dan pelarut 1:5 ke dalam  pelarut n-heksan selama 24 jam pada suhu kamar, kemudian disaring. Perendaman  dan  penyaringan  dilakukan  beberapa  kali  dengan  jumlah  pelarut  yang  sama  hingga cairan hasil perendaman kelihatan tidak berwarna lagi (bening). Setelah  itu, residunya direndam dengan pelarut etil asetat hingga bening dan direndam  kembali  dengan  metanol  hingga  bening.  Teknik  ekstraksi  dilakukan  dengan  pengulangan   sebanyak   3   kali.   Selanjutnya   setiap   cairan   hasil  perendaman  dipekatkan dengan evaporator  putar bervakum dengan suhu 40 °C, tekanan 400  mmHg, dan kecepatan putaran tingkat 4 untuk memisahkan pelarut dan ekstrak  pekat. Ekstrak pekat kemudian dikeringkan dalam oven bersuhu 40 °C selama 24  jam lalu ditimbang bobotnya untuk mendapatkan kadar ekstrak.

Serbuk berbagai bagian pohon  Mindi 

 

Ekstraksi dengan n-heksan   

 

Ekstrak n-heksan  Residu (serbuk)   

)Ekstraksi dengan etil asetat   

 

Ekstrak etil asetat  Residu (serbuk)   

Ekstraksi dengan metanol   

 

Ekstrak metanol  Residu (serbuk)   

 

Gambar 3 Proses ekstraksi maserasi bersinambung.   

3.3.3 Pengujian 

 

Pengujian   yang   dilakukan   meliputi   pengukuran   kadar   ekstrak,   uji  antioksidan dengan metode DPPH, dan uji fitokimia. 

   

a.  Kadar Ekstrak 

 

Ekstrak  basah  hasil  pemekatan  dari  masing-masing  jenis  pelarut  diambil  sebanyak 5 mL dan dimasukkan ke dalam wadah aluminium yang telah diketahui  bobotnya.  Ekstrak dan wadah ditimbang lalu dikeringkan pada suhu 103  ±  2 °C  selama 12 jam.   Selanjutnya wadah dan ekstrak kering ditimbang.   Kandungan  ekstraktif kayu dapat dihitung dengan rumus sebagai berikut: 

 

Kadar Ekstrak   

  Keterangan: 

Wa = Bobot kering oven ekstrak kayu (g) 

b.  Kelarutan Kayu dalam Air Panas 

 

Pengujian ini berdasarkan TAPPI T 207 om-88.  Pengujian kelarutan kayu  dalam air panas bertujuan untuk melarutkan metabolit primer seperti gula, gum,  pati atau zat warna.  Serbuk kayu (gubal dan teras) sebanyak 2 g diekstrak dengan  100 mL aquades panas dalam erlenmeyer 250 mL.   Sampel dipanaskan di atas  waterbath selama 3 jam dan diaduk sesekali.  Setelah reaksi sampel disaring dan  dicuci dengan air  panas.   Pengeringan dilakukan pada oven  bersuhu  103±2°C  sampai  bobotnya konstan dan ditimbang.  Kadar  zat  ekstraktif larut  air  panas  dapat dihitung dengan: 

   

% Kelarutan   

  Keterangan : 

Wa = Bobot kering oven serbuk awal (g)  Wb = Bobot kering serbuk setelah ekstraksi (g)   

 

c.  Uji Antioksidan dengan Metode DPPH 

 

Uji  antioksidan  dengan  metode  DPPH  yang  dilakukan  mengacu  pada  metode  Salazar  et  al.  (2009).  Ekstrak  mindi  hasil  ekstraksi  bertingkat  setelah  dipekatkan  dan  dikeringkan  dilarutkan  dalam  etanol  sebagai  larutan  induk  (konsentrasi  1000  ppm).  Banyaknya  larutan  induk  yang  digunakan  tergantung  pada konsentrasi larutan ekstrak yang diinginkan (200 ppm; 100 ppm; 50 ppm; 25  ppm; 12,5 ppm; 6,25 ppm dan 3,125 ppm).  Nisbah larutan ekstrak dengan larutan  DPPH  dalam  pengujian  ini  adalah  1:1.  Total  larutan  dalam  setiap  sumur  microplate adalah 200 µL yang terdiri atas larutan ekstrak sebanyak 100 µL dan  100 µL larutan DPPH. Campuran tersebut  kemudian diaduk sampai tercampur  sempurna, lalu campuran tersebut diinkubasi pada suhu 37 °C selama 30 menit,  kemudian diukur absorbansinya dengan menggunakan eliza reader pada panjang  gelombang 517 nm.  Kontrol negatif dibuat dengan mencampurkan 100 µL etanol  dengan 100 µL DPPH.  Vitamin C digunakan sebagai kontrol positif antioksidan  yang dibuat dengan cara dilarutkan dalam pelarut etanol dengan konsentrasi yang  sama dengan sampel.

      Ekstrak 1 mg 

   

Pembuatan larutan induk 1000 ppm dengan penambahan etanol  p.a. 1 mL 

   

200 ppm ; 100 ppm; 50 ppm; 25 ppm; 12,5 ppm; 6,25 ppm; 3,125  ppm sebanyak 100 µL + 100 µL DPPH 

   

Inkubasi 30 menit pada suhu 37 ˚C   

 

Ukur absorbansi dengan  eliza reader   

Gambar 4 Diagram alir uji aktivitas antioksidan ekstrak mindi.   

 

Diagram alir pada Gambar 4 berlaku untuk setiap ekstrak dari sampel mindi  dengan  pelarut  metanol,  etil  asetat,  dan  n-heksan.  Begitu  juga  untuk  kontrol  positif (vitamin C) dan kontrol negatif (blanko). Pengujian kualitatif dari metode  DPPH yaitu dengan melihat  warna larutan sampel ketika dicampurkan dengan  DPPH.   Adanya perubahan warna ungu pada DPPH menjadi ungu  yang  lebih  muda atau warna kuning ketika pencampuran dilakukan, menandakan terdapatnya  aktivitas antioksidan pada larutan sampel tersebut.   Pengujian kuantitatif metode  DPPH dilakukan dengan cara menghitung  nilai persen inhibisi dan dilanjutkan  dengan perhitungan nilai IC50. 

 

% Inhibisi   

    Keterangan: 

Ab = Absorbansi blanko  As = Absorbansi sampel   

Persen inhibisi merupakan persentase penghambatan aktivitas radikal bebas  diperoleh dari nilai absorbansi sampel yang terukur oleh eliza reader. Persamaan

regresi  diperoleh  dari  hubungan   antara  konsentrasi  sampel  dan  persentase  penghambatan aktivitas radikal bebas (inhibisi).  Nilai konsentrasi penghambatan  aktivitas  radikal  bebas  sebanyak  50%  (IC50)  dihitung  dengan  menggunakan  persamaan regresi.  Nilai IC50 diperoleh dengan memasukkan Y=50 serta nilai A  dan B yang telah diketahui. Nilai x sebagai IC50 dapat dihitung dengan persamaan  berikut: 

   

y = A + B Ln (x)   

  Keterangan : 

y = persen inhibisi = 50%  A = slope (kemiringan)  B = intersep 

x = IC50 (ppm)   

c.  Uji Fitokimia 

 

Uji Fitokimia yang meliputi pengujian flavonoid, saponin, alkaloid, fenolik,  tannin, triterpenoid, steroid, dan glikosida dilakukan di Balai Penelitian Tanaman  Obat  dan  Aromatik  (Balittro)  Bogor.   Metode yang  digunakan  mengacu  pada  Harbone (1987) dan Medichal Material plant MMI (Materia Medika Indonesia)  Jilid VI (Depkes 1995). Hasil Pengujian fitokimia dapat dilihat pada Lampiran 2.

IV.  HASIL DAN PEMBAHASAN 

       

4.1  Kadar Zat Ekstraktif Mindi 

 

Kadar ekstrak pohon mindi beragam berdasarkan bagian pohon dan jenis  pelarut.   Berdasarkan  bagian,  daun  menghasilkan kadar  ekstrak tertinggi  yaitu  11,01%, diikuti bagian kulit (6,65%), cabang (1,92%), kayu gubal (1,54%), dan  kayu teras (1,52%) (Tabel 2). 

 

Tabel  2 Kadar ekstrak bagian pohon mindi 1)   

 

Pelarut  Bagian pohon mindi  _Total 

Daun  Kulit  Cabang  Gubal  Teras 

n-Heksan  1,37  0,91  0,32  0,18  0,29  3,06 

Etil asetat  8,43  4,63  1,06  0,96  1,00  16,09 

Metanol  1,21  1,11  0,54  0,40  0,23  3,49 

Total  11,01  6,65  1,92  1,54  1,52  22,64 

Keterangan:   1)_{Rerata 3 kali ulangan , % bobot kering tanur.}   

Daun memiliki kadar ekstrak tertinggi karena adanya senyawa klorofil atau  zat hijau daun yang terdistribusi dalam daun dan dapat larut dalam pelarut organik  yang  digunakan.  Harborne  (1987)  menyatakan  bahwa  sebagian  besar  klorofil  terdistribusi dalam daun dan dapat larut dalam etanol, aseton, metanol, eter, dan  kloroform.  Hal  ini  didukung  oleh  hasil  penelitian  Rahmawan  (2011)  yang  menunjukan bahwa ekstrak daun lebih tinggi dari ekstrak ranting, kayu gubal, dan  kayu teras. 

Kadar  ekstrak  kulit  menempati  urutan  kedua  tertinggi.  Hal  ini  selaras  dengan  hasil  penelitian  Meilani  (2006)  yang  menunjukkan  bahwa  rendemen  ekstrak etanol dari kulit Suren (T. sureni) lebih tinggi dibandingkan   kayu teras  cabangnya  yang  disebabkan  oleh  tingginya  kandungan  konstituen-konstituen  lipofil dan hidrofil dalam kulit.  Menurut  Sjostrom (1998), kandungan ekstraktif  tersebut  lebih  tinggi  terdapat  pada  kulit  dibandingkan  dalam  bagian  kayunya.  Bagian hidrofil seperti senyawa-senyawa fenol dan suberin dapat larut dalam air  dan pelarut-pelarut polar seperti etanol, aseton, dan metanol.

    Bagian cabang memiliki kadar ekstraktif lebih tinggi daripada kayu gubal  dan  teras  baik  untuk  ekstrak  n-heksan,  etil  asetat  maupun  ekstrak  metanol.  Penelusuran  pustaka  mengenai  kadar  ektraktif  cabang  mindi  tidak  ditemukan,  namun hasil ini didukung penelitian Fuwape (1990) yang menunjukkan bahwa  bagian cabang salah satu dari tiga sampel kayu Gmelina arborea yang ditelitinya  mengandung kadar ekstrak tertinggi (9,7%) dibandingkan kadar ekstrak kayu teras  (5,1%)  dan kayu  gubalnya (5,7%).  Menurut  Ekman (1979)  dalam  Fengel  dan  Wegener  (1995),  bagian  cabang  kayu  dapat  mengandung  lebih  banyak  zat  ekstraktif dibandingkan batangnya, seperti yang ditunjukkan oleh cabang   Picea  abies yang mengandung konsentrasi lignan yang lebih tinggi (4-6% dan 2-3%)  dibandingkan bagian  batangnya  (0,1%). 

Pada umumnya kadar  ekstrak  kayu  teras  lebih  tinggi dibandingkan kayu  gubal (Sjostrom 1998). Akan tetapi, fenomena ini berbeda dengan hasil penelitian.  Data pada Table 2 menunjukkan bahwa kadar ekstrak total kayu gubal lebih tinggi  dibandingkan dengan bagian kayu terasnya.   Hal ini diduga senyawa polar hasil  metabolit  primer  seperti pati,  gula,  asam-asam amino,  dan  monosakarida  yang  lebih  banyak  terdapat  pada  kayu  gubal  ikut  larut  dalam  metanol.  Senyawa-  senyawa tersebut  mudah larut  dalam metanol yang  memiliki tingkat  kepolaran  tinggi.   Metanol sendiri merupakan pelarut berbobot molekul rendah yang dapat  membentuk  ikatan  hidrogen  sehingga  dapat  larut  dan  bercampur  dengan  air  dengan kelarutan yang tak terhingga. Ikatan hidrogen lebih mudah terbentuk pada  pelarut  metanol  sehingga  zat  bioaktif  lebih  mudah  larut  dalam  metanol  (Hart  1987). Untuk mendukung hal tersebut maka dilakukan pengujian kelarutan kayu  dalam air panas yang juga merupakan pelarut polar. Tingginya kelarutan dalam air  panas   dari   kayu   gubal   (4,2%)   dibandingkan   dengan   kayu   teras   (2,6%)  menunjukkan bahwa senyawa metabolit primer (pati, gula, asam-asam amino, dan  monosakarida) lebih banyak terdapat pada kayu gubal dibandingkan dalam kayu  teras.   Menurut  Sjostrom (1998), kayu gubal mengandung  lebih  banyak  bahan  metabolit  primer  berupa  pati  dan  gula  sedangkan  sangat  sedikit  mengandung  senyawa-senyawa  fenolik.  Sunarsih  (2001)  juga  menyatakan  bahwa kadar  pati  bagian kayu gubal lebih tinggi dibandingkan dengan kayu teras pada kayu Damar.

Bila  didasarkan  pada  klasifikasi  kelas  komponen  kimia  kayu  Indonesia  (Lestari dan Pari 1990), maka kadar ekstraktif mindi yang diperoleh dapat dibagi  dalam dua kelas yaitu kelas tinggi dan rendah.   Kadar ekstraktif kayu gubal dan  kayu teras termasuk ke dalam kelas rendah karena nilainya kurang dari 2%. 

Zat ekstraktif pada setiap jenis kayu dapat diekstrak dengan menggunakan  pelarut-pelarut  yang  berbeda  tergantung  sifat  dari  zat  ekstraktif  tersebut  dan  pelarutnya.  Zat  ekstraktif  bersifat  polar  dapat  terekstrak  dalam  pelarut  yang  bersifat polar, dan sebaliknya.  Tabel 2 menunjukkan bahwa  ekstraktif dari semua  bagian yang larut pada pelarut etil asetat memiliki nilai tertinggi yaitu 16,09%,  diikuti  pelarut  metanol  (3,49%),  dan  yang  terendah  adalah  n-heksan  (3,06%).  Tabel 2 menunjukkan bahwa kadar ekstraktif didominasi oleh senyawa semipolar  yang terlarut dalam etil asetat, sedangkan untuk ekstrak n-heksan memiliki kadar  ekstraktif terendah.   Umumnya keberadaan senyawa nonpolar cenderung paling  sedikit dibandingkan senyawa ataupun fraksi semipolar dan polar (Meilani 2006).  Besarnya rendemen ekstraksi dengan pelarut etil asetat mungkin disebabkan oleh  sifat etil asetat yang semipolar yang dapat mengekstrak komponen glikon yang  polar dan komponen aglikon yang nonpolar pula sehingga ekstrak ini memiliki  rendemen ekstraksi yang besar (Harwood dan Moody 1989). 

Tabel  3  menunjukkan  bahwa  berdasarkan  posisi  batang  pohon,  kadar  ekstrak  yang  diperoleh  beragam.  Kadar  ekstrak  tertinggi  yaitu  bagian  pangkal  1,59% diikuti oleh bagian tengah (1,51%), dan bagian ujung (1,49%). Menurut  Sjostrom (1998), variasi kadar ekstraktif dalam pohon dipengaruhi oleh spesies  pohon (genetik), umur pohon, dan posisi dalam pohon.  Namun nilai kadar ekstrak  ketiganya tidak menunjukkan perbedaan yang signifikan.  Menurut Caron (2010),  ketinggian batang yang berbeda tidak memberikan pengaruh pada kadar ekstrak  kayu Sitka spruce  yang ditelitinya. Akan tetapi, umumnya zat ekstraktif pada  pangkal pohon lebih tinggi dibanding bagian batang di atasnya. Hal ini berkaitan  dengan pembentukan kayu teras pada bagian pangkal yang diikuti terjadinya  deposit metabolit sekunder dan adanya sel yang mati. Oleh sebab itu, zat  ekstraktif hasil metabolisme sekunder yang banyak terdapat pada kayu teras  bagian pangkal akan lebih tinggi dibandingkan bagian atasnya dimana sel-selnya  masih aktif membelah.

Tabel 3 Nilai kadar ekstrak kayu mindi berdasarkan posisi batang dalam pohon   

Posisi  n-Heksan  Etil asetat  Metanol  Total (1) 

Pangkal  0,24  1,03  0,32  1,59 

Tengah  0,21  0,96  0,34  1,51 

Ujung  0,25  0,95  0,30  1,49 

Keterangan:  1) _{Rerata 3 kali ulangan, % bobot  kering tanur.}   

4.2  Sifat Antioksidan Ekstrak Bagian Pohon Mindi   

Ekstrak berbagai bagian pohon mindi memiliki aktivitas antioksidan yang  beragam.   Hasil   pengujian   15   jenis   ekstrak   berbagai   bagian   pohon   mindi  menunjukkan  bahwa  hanya  empat  jenis  ekstrak  yang  memiliki  kemampuan  antioksidan yang kuat karena memiliki IC50 kurang dari 200 ppm, yaitu ekstrak  etil asetat bagian kayu teras (IC50 1,88 ppm),  ekstrak metanol  bagian kayu teras  (IC50 67,23 ppm), ekstrak etil asetat bagian cabang (IC50 146,11 ppm), dan ekstrak  etil asetat bagian kayu gubal (IC50 172,65 ppm) (Tabel 4). 

   

Tabel  4  Aktivitas  antioksidan  zat  ekstraktif  berbagai  bagian  pohon  mindi  berdasarkan nilai IC50 

 

Bagian  Jenis pelarut  IC50 (ppm)  Aktivitas1) 

n- Heksan  1,07x1010  _tidak kuat 

Daun  Etil asetat  4,46x105  tidak kuat 

Metanol  1,16x104  tidak kuat 

n- Heksan  1,11x1026  tidak kuat 

Kulit  Etil asetat  3,83x104  tidak kuat 

Metanol  2,55x104  tidak kuat 

n- Heksan  7,79x1013  tidak kuat 

Cabang      Gubal      Teras 

Etil asetat      146,00       kuat  Metanol       4,82x102       tidak kuat  n- Heksan      2,35x1027      tidak kuat  Etil asetat      173,00       kuat  Metanol       4,68x102       tidak kuat  n- Heksan       5,34 x 109      _tidak kuat  Etil asetat      1,88       kuat 

Metanol  67,23  kuat 

Keterangan:1) _{berdasarkan Blois (1958) dalam Hanani (2005).}   

Hasil pengujian  menunjukkan  bahwa semakin  tinggi konsentrasi ekstrak,  maka semakin tinggi persentase inhibisinya (Gambar 5).  Hal ini mengindikasikan 

(%) Inh ib is i   ekstrak  memiliki  aktivitas  antioksidan  sehingga  semakin  banyak  ekstrak  yang  diaplikasikan, maka semakin tinggi tingkat penghambatan radikal bebas. Interaksi  antara   konsentrasi  dan   persentase   inhibisi  dapat   dinyatakan  dengan   kurva  hubungan antara konsentrasi dan persen inhibisi yang menghasilkan persamaan  regresi (Gambar 5).        90  80  70  60  50  40  30  20  10  0 

‐10   0  50  100  150  200  250 

konsentrasi ekstrak (ppm) 

Teras etil asetat  y = 6,75 ln(x) + 45,74 

IC 50 = 1,88  Teras metanol 

y = 16,62 ln(x) - 19,94  IC50 = 67,23 

Gubal etil asetat  y = 13,38 ln(x) - 19,23 

IC50 = 172,65  Cabang etil asetat  y = 12,76 ln(x) - 13,61 

146,11        Gambar  5  Kurva  hubungan  antara  konsentrasi  ekstrak  berbagai  bagian  pohon  mindi dengan persen inhibisi.    Penelitian sebelumnya melaporkan bahwa daun dan kulit dari pohon mindi  yang tumbuh di Nepal memiliki aktivitas antioksidan kuat (Ghimeray et al. 2009;  Nahak dan Sahu 2010a; Nahak dan Sahu 2010b).  Akan tetapi, pada penelitian ini  bagian  daun  dan  kulit  mindi  baik  untuk  ekstrak  n-heksan,  etil  asetat  maupun  metanol tidak memiliki aktivitas antioksidan yang kuat karena nilai IC50 lebih dari  200 ppm. Perbedaan hasil tersebut diduga karena sampel yang dianalisis berbeda  umur, asal, dan kondisi tempat tumbuh.   Perbedaan ini dapat menyebabkan jenis  dan  komposisi  zat  ekstraktif  di  dalam  sampel  uji  berbeda  sehingga  aktivitas  antioksidannya juga berbeda (Utami 2010). Perbedaan ini juga disebabkan oleh  perbedaan  metode dan pelarut  yang  digunakan.  Menurut  Fengel dan  Wegener  (1995), faktor lain yang mempengaruhi kandungan zat ekstraktif dalam tanaman  selain  umur,  tempat  tumbuh,  genetik  dan kecepatan pertumbuhan  adalah  jenis 

pelarut.  Setiap jenis pelarut memiliki karakteristik yang berbeda-beda, tidak ada  pelarut yang dapat melarutkan semua zat ektraktif. 

Ekstrak  etil  asetat  bagian  kayu  teras  memiliki  aktivitas  antiosidan  yang  sangat  kuat  karena  memiliki  nilai IC50  yang  jauh  lebih  rendah dari  200  ppm.  Selain  itu,  ekstrak  metanol  kayu  teras  juga  memiliki  aktivitas  antioksidan  tertinggi  kedua setelah ekstrak etil asetatnya dari semua sampel yang diuji.  Kayu  teras memiliki aktivitas antioksidan tertinggi dibandingkan yang lain karena pada  kayu  teras  banyak  mengandung  senyawa-senyawa  fenol (Sjostrom 1998)  yang  diduga   berperan   dalam   menghambat   radikal   bebas.  Antioksidan   alami  kebanyakan dalam  bentuk  fenolik.   Gugus  fenol pada antioksidan  inilah  yang  memiliki kemampuan untuk menangkap radikal bebas (Aini 2007).   Tumbuhan  berkayu   diketahui   mengandung   banyak   senyawa   yang   berfungsi   sebagai  antioksidan  seperti  flavonoid,  alkaloid,  senyawa  fenol,  terpenoid,  dan  masih  banyak lagi (Irawan  2006). 

Ekstrak etil asetat  bagian cabang  memiliki aktivitas antioksidan tertinggi  ketiga   karena   dalam   cabang   terdapat   kayu   teras   yang   memiliki   aktivitas  antioksidan   yang   tertinggi.   Walaupun   jumlahnya   kecil,   kayu   teras   yang  terkandung  pada  bagian  cabang  berkontribusi  pada  tingginya  daya  hambat  terhadap radikal bebas sehingga lebih tinggi dibandingkan kayu gubal.   Hal ini  disebabkan oleh ekstraktif hasil metabolisme sekunder yang berpotensi sebagai  antioksidan lebih banyak terkandung pada kayu teras dibandingkan kayu gubal.  Perbedaan  nilai  aktivitas  antioksidan  ini  disebabkan  oleh  kandungan  senyawa  antioksidan masing-masing ekstrak berbeda. 

Menurut  Sjostrom  (1998),  zat  ekstraktif  merupakan  bagian  kecil  dari  komponen  kayu  yang  larut  dalam  pelarut-pelarut  organik  dan  air.  Ekstraktif  menempati tempat-tempat morfologi tertentu dalam struktur kayu. Ekstraktif fenol  terdapat dalam kayu teras dan dalam kulit.  Namun dari hasil pengujian, ekstrak  dari bagian kulit ternyata tidak memiliki aktivitas antioksidan karena tidak semua  senyawa dalam zat ekstraktif yang banyak terdapat pada kulit berperan sebagai  antioksidan, misalnya saja tidak semua yang berpotensi sebagai antikanker atau  antibakteri juga berperan sebagai antioksidan.   Hasil penelitian Juniarti (2009)  menunjukkan bahwa ekstrak daun Saga dilaporkan  memiliki potensi sitotoksik

terhadap   larva   udang   dengan   nilai   LC50   606,74   ppm,   untuk   aktivitas  antioksidannya justru tidak aktif. 

Penggunaan pelarut yang berbeda menghasilkan kadar ekstrak yang berbeda  dan mengisolasi senyawa yang berbeda sehingga dapat mempengaruhi aktivitas  antioksidan ekstrak.  Bila dilihat dari jenis pelarutnya, ekstrak etil asetat memiliki  daya  hambat  paling tinggi.  Hal ini didukung oleh penelitian sebelumnya  yang  dilakukan  terhadap  daun  dan  kulit  pohon  mindi  asal  Nepal,  dimana  ekstrak  terlarut etil asetat juga memiliki aktivitas yang lebih kuat dibandingkan ekstrak n-  heksan  dan  metanol (Ghimeray  et  al.  2009).  Senyawa  yang  terlarut  dalam  n-  heksan diduga berupa senyawa nonpolar seperti lemak, lilin, dan minyak sehingga  tidak memiliki aktivitas antioksidan. Senyawa yang larut dalam etil asetat adalah  senyawa-senyawa  semipolar  yang  berpotensi  sebagai  antioksidan.  Walaupun  ekstrak metanol memiliki aktivitas antioksidan yang lebih rendah dibandingkan  ekstrak etil asetat namun aktivitasnya jauh lebih tinggi dibandingkan ekstrak n-  heksan karena senyawa-senyawa polar yang memiliki aktivitas antioksidan yang  belum larut pada etil asetat dapat larut pada metanol. 

Vitamin C merupakan salah satu vitamin yang memiliki aktivitas yang kuat  sebagai antioksidan dan banyak digunakan.  Sebagian besar vitamin C yang ada di  pasaran  adalah  vitamin  C  sintetis.  Dalam  penelitian  ini  vitamin  C  digunakan  sebagai kontrol positif  yang  juga  diukur  aktivitas  antioksidannya.  Vitamin  C  mempunyai  nilai  IC50  yang  kecil  yaitu  3,05  ppm  sehingga  dapat  dikatakan  memiliki aktivitas antioksidan  yang  sangat  kuat. Ekstrak  etil asetat  kayu  teras  memiliki aktivitas antioksidan yang sangat  kuat bila dilihat  dari nilai IC50 dan  lebih kuat jika dibandingkan dengan antioksidan komersial (vitamin C) (Gambar  6), sehingga memiliki potensi yang sangat tinggi untuk dikembangkan   sebagai  antioksidan alami.

IC 50 (ppm)         3.5  3  2.5  2              1.88        3.05  1.5  1  0.5  0 

Teras etil asetat   Vitamin C 

 

Gambar 6 Nilai IC50 ekstrak etil asetat kayu teras dan vitamin C menggunakan  metode DPPH. 

 

4.3  Fitokimia  Ekstrak Teraktif    Aktivitas antioksidan sangat dipengaruhi oleh kandungan senyawa bioaktif  yang terdapat di dalam bahan.  Analisis fitokimia merupakan salah satu cara yang  dapat  dilakukan untuk  mengetahui kandungan senyawa bioaktif  yang  berperan  sebagai antioksidan dalam ekstrak teraktif.   Ekstrak teraktif adalah ekstrak etil  asetat kayu teras mindi.  Hasil analisis fitokimia serbuk kayu teras menunjukkan  terdeteksi adanya alkaloid, triterpenoid, flavonoid, dan glikosida.  Sementara Itu,  hasil  analisis  mendeteksi   adanya  saponin,  alkaloid,  fenolik,  flavonoid,  triterpenoid, steroid, dan glikosida dalam ekstrak etil asetat kayu teras (Tabel 5).  Analisis fitokimia menunjukan hasil yang berbeda antara serbuk dan ekstrak  etil asetat kayu teras. Perbedaan ini karena persentase zat ekstraktif dari kelompok  saponin,  fenolik,  dan  steroid  yang  larut  dalam  serbuk  kandungannya  sangat  rendah sehingga tidak terdeteksi. Hal ini diperkuat oleh hasil penelitian Setiawan  (2008)  yang  menunjukkan  bahwa  kandungan  flavonoid  yang  terdeteksi  pada  serbuk daun jati belanda dan ekstrak metanol serta ekstrak etanolnya berbeda-  beda, dimana kandungan senyawa flavonoid  yang terdeteksi pada serbuk  lebih  lemah dibandingkan dalam ekstrak metanol dan etanolnya. 

Tabel  5  Hasil  analisis  fitokimia  secara  kualitatif  terhadap  serbuk  dan  ekstrak  teraktif mindi 

 

Kayu teras mindi   

Kelompok senyawa 

  Serbuk       Ekstrak 

etil setat 

Saponin  -  + 

Alkaloid  +  + 

Tanin  -  - 

Fenolik  -  + 

Flavonoid  +  + 

Triterpenoid  +  + 

Steroid  -  + 

Glikosida  +  + 

Keterangan : (+) = senyawa terdeteksi, (-) = senyawa tidak terdeteksi. 

 

Flavonoid merupakan salah satu senyawa dari golongan fenolik yang diduga  paling berperan sebagai antioksidan.  Flavonoid dan alkaloid merupakan senyawa  pereduksi   yang   baik.   Senyawa   flavonoid   secara   umum   bertindak   sebagai  antioksidan  yaitu  sebagai  penangkap  radikal  bebas  karena  mengandung  gugus  hidroksil.   Flavonoid bersifat sebagai reduktor sehingga dapat bertindak sebagai  donor   hidrogen  terhadap   radikal   bebas.  Zat   flavonoid   berfungsi  sebagai  penangkal radikal bebas yang dapat mengacaukan sistem keseimbangan tubuh dan  dapat memicu timbulnya kanker (Silalahi 2006).  Diduga sebagian besar senyawa  fenolik yang terkandung dalam kayu teras mindi dan berperan sebagai antioksidan  dapat  terlarut  dalam  etil  asetat.  Sementara  itu,  golongan  fenolik  yang  tidak  terdeteksi oleh uji fitokimia pada serbuk kayu teras menunjukkan bahwa jenis  pelarut etil asetat mampu melarutkan senyawa-senyawa fenolik selain flavonoid  dengan baik.  Berdasarkan penelitian  Salim (2006), alkaloid, flavonoid, tanin, dan  saponin  berperan  dalam  menghambat  reaksi  oksidasi  lipid.  Mangan  (2003)  melaporkan bahwa saponin yang terkandung dalam tanaman cuplikan (Physalis  angulota Linn.) berkhasiat selain sebagai antioksidan, juga sebagai antitumor dan  menghambat pertumbuhan kanker terutama kanker usus besar. 

Keanekaragaman  zat  ekstraktif  yang  dapat  diekstraksi  biasanya  membutuhkan serangkaian proses ekstraksi yang hasilnya memberikan ciri awal  komposisinya.  Selain itu, keanekaragaman zat ekstraktif dipengaruhi oleh pelarut 

yang digunakan karena zat ekstraktif sering tersembunyi di belakang dinding sel,  bergantung  pada derajat  polimerisasi dan  ketidaklarutannya.  Perbedaan  tingkat  kepolaran   pelarut   menentukan   perbedaan   jenis   dan   komposisi   senyawaan  fitokimia serta mempengaruhi aktivitas antioksidan (Dehkharghanian et al. 2010).  Selain mempunyai rendemen yang paling tinggi, ekstrak etil asetat juga memiliki  aktivitas   antioksidan   yang   lebih   tinggi  dibanding   ekstrak   metanol  dan   n-  heksannya.  Senyawa semipolar yang dilaporkan dapat terekstrak oleh etil asetat,  meliputi  senyawa  alkaloid,  aglikon,  glikosida  (Houghton  dan  Raman  1998),  sterol, terpenoid, dan flavonoid (Cowan 1999).

V. KESIMPULAN DAN SARAN 

     

5.1  Kesimpulan   

 

Kadar ekstrak pohon mindi beragam berdasarkan bagian pohon dan jenis  pelarut yang digunakan. Bagian daun memiliki  kadar ekstrak tertinggi (11,01%),  kemudian diikuti oleh bagian kulit  (6,65%), cabang (1,92%), kayu gubal (1,54%),  dan  kayu  teras  (1,52%).  Berdasarkan  jenis  pelarutnya,  etil  asetat  merupakan  pelarut  yang  mampu  melarutkan zat  ekstraktif   tertinggi dengan kadar  ekstrak  16,09%,  kemudian  metanol  (3,49%)  dan  n-heksan  (3,06%).  Ekstrak  berbagai  bagian pohon mindi yang memiliki aktivitas antioksidan tergolong kuat adalah  ekstrak etil asetat kayu teras ( IC50 1,88 ppm),   diikuti ekstrak metanol  kayu teras  (IC50 67,23 ppm), ekstrak etil asetat cabang (IC50 146,11 ppm),  dan ekstrak etil  asetat kayu   gubal (IC50 172,65 ppm). Ekstrak etil asetat kayu teras merupakan  ekstrak teraktif yang bersifat antioksidan dan  aktivitas antioksidannya lebih tinggi  dibandingkan  dengan  antioksidan  vitamin  C  (IC50  3,05  ppm).  Hasil  analisis  fitokimia  secara  kualitatif  menunjukkan  bahwa  ekstrak  etil  asetat  kayu  teras  mindi  positif  mengandung  saponin,  alkaloid,  fenolik,  flavonoid,  triterpenoid,  steroid,  dan glikosida  yang diduga berperan sebagai antioksidan. 

 

5.2  Saran 

 

Berdasarkan hasil penelitian ini, penelitian lanjutan yang disarankan adalah  mengisolasi  dan  mengidentifikasi  senyawa  bioaktif  yang  bersifat  antioksidan  dalam esktrak etil asetat kayu teras mindi.

Syafii  W.  2008.  Peningkatan  efisiensi  pemanfaatan  hasil  hutan  melalui 

penerapan konsep "the whole tree utilization".  Di  dalam: Pemikiran Guru 

Besar Institut Pertanian Bogor: perspektif ilmu-ilmu pertanian dalam  pembangunan nasional. Bogor: Penebar Swadaya-IPB Press. hlm 187-191.  Tsoumis  G.  1991.  Science  and  Technology  of  Wood:  Structure,Properties, 

Utilization.  New York: Van Nostrand Reinhold. 

[USDA] United States Department of Agriculture. 2012. Plant  profil for Melia 

azedarach  Linn.  (Chinaberrytree).  Natural  Recources  Conservation  Service.  [terhubung berkala]. http://plants.usda. gov/java [28 Agt 2012]. 

Utami  AM.  2010.  Aktivitas  antioksidan  ekstrak  buah  dan  daun  mengkudu  [skripsi].  Bogor:  Fakultas  matematika dan Ilmu  Pengetahuan  Alam,  Institut  Pertanian Bogor. 

Walker  JCF.  2006.  Primary  Wood  Processing:  Principles  and  Practice.  New  Zealand: Springer.

   

35                                                 

LAMPIRAN

   

37      Lampiran 2  Hasil Pengujian Fitokimia di Balittro Cimanggu 

   

DHH

        Antioxidant activity of Mindi (Melia 

Azedarach Linn.) extractives   

Mita Nurdyana1)_{, Wasrin Syafii}2)_, 

and Rita Kartika Sari3) 

  INTRODUCTION. The whole tree utilization concept can be applied to increase  utilization efficiency of forest  products,  included  the usage of wood  chemical  component  like  extractive.  Research  of Nahak  and  Sahu  (2010a)  showed  that  extract of mindi’s leaves has strong antioxidant activity. Mindi is a fast growing  tree species that developed for community forests. Therefore, it is interesting to do  research about the potential antioxidant activity of mindi that grown in Indonesia  because the distribution and variation of extractive compounds was depended on  many factors like the species, age, place grew, and parts used. The objective of  this research is to determine the extractive content of the bark (inner bark), leaves,  branches,  heartwood,  and  sapwood  of  mindi  that  extracted  with  a  multilevel  polarity maceration method and to assay antioxidant activity of mindi’s extract  and to analyze phytochemical on the active extracts.  METHODS.   This   research  used   the   bark   (inner   bark),   leaves,   branches,  heartwood, and  sapwood of mindi that  extracted  with a  multilevel  maceration  method in n-hexane, ethyl acetate, and methanol solvent. Antioxidant activity of  extractive was suspected by DPPH method. Absorbans value that had got from  DPPH assay was processed to obtain IC50 values. Then the active extract  was 

analyzed by phytochemical assay. 

RESULT AND DISCUSSION. The result of this research showed that the etyl  acetat fraction of leaves is the highest total extractive content (11,01%)   but the  etyl acetat fraction of   heartwood exhibited the highest radical scavenging with  IC50 1,88 ppm so that it can be classified to be strong antioxidant that is stronger 

than   vitamine   C.   Phytochemical   analyzed   indicated   that   the   antioxidative  coumpounds  in  the  most  active  extract  were  flavonoid,  saponin,  alkaloid,  phenolic,  triterpenoid,  steroid  dan  glycoside.  Therefore  it  is  very  potential  to  amendable as natural antioxidant so that it can be used more efficient. 

 

            RINGKASAN   

MITA NURDYANA. Aktivitas Antioksidan Zat Ekstraktif dari Pohon Mindi  (Melia azedarach Linn.). Dibawah bimbingan: Prof. Dr. Ir. Wasrin Syafii,  M.Agr dan Dr.Ir. Rita Kartika Sari, M.Si 

 

Upaya pemanfaatan seluruh bagian pohon (the whole tree utilization) perlu 

dilakukan  untuk   meningkatkan  efisiensi  pemanfaatan   hasil   hutan  termasuk  pemanfaatan komponen kimia kayu berupa zat ekstraktif.   Pengetahuan tentang  zat  ekstraktif  sebagai  sumber  bahan  obat-obatan  telah  mendorong  berbagai  penelitian   untuk   mengungkapkan   kemungkinan   pemanfaatan   zat   ekstraktif  tersebut,  salah  satunya  sebagai  antioksidan.  Antioksidan  merupakan  senyawa  yang mampu menangkap radikal bebas yang menjadi penyebab beberapa penyakit  degeneratif (Hanani 2005). 

Menurut  Nahak  dan  Sahu  (2010a),  daun  mindi  (Melia  azedarach  Linn.) 

yang tumbuh di India terbukti memiliki aktivitas antioksidan yang kuat.   Mindi  merupakan jenis kayu dari hutan rakyat yang memiliki kualitas kayu yang baik 

dan cepat tumbuh (fast growing spesies).  Mengingat distribusi dan komposisi zat 

ekstraktif tidak hanya dipengaruhi oleh jenis pohon tetapi juga dipengaruhi oleh  umur, tempat tumbuh, posisi dalam pohon, kayu gubal, dan kayu teras (Sjostrom  1998), maka penelitian mengenai aktivitas antioksidan zat ekstraktif dari pohon  mindi menarik untuk dilakukan. Penelitian ini bertujuan untuk menetapkan kadar  ekstrak  bagian  kulit,  daun,  cabang,  kayu  teras  dan  gubal  pohon  mindi  yang  diekstraksi dengan pelarut  organik  dengan kepolaran  bertingkat  (n-heksan,  etil  asetat   dan   metanol)   dan   menguji   aktivitas   antioksidan   ekstraknya   serta  menganalisis fitokimia ekstrak teraktif secara kualitatif. 

Penelitian ini menggunakan bahan baku berupa bagian daun, kulit, cabang  kayu gubal, dan kayu teras pohon mindi yang diekstrak dengan metode maserasi  bersinambung  dengan  pelarut  n-heksan,  etil  asetat,  dan  metanol.  Pengujian  aktivitas antioksidan dilakukan dengan metode DPPH hingga didapatkan ekstrak  teraktif,  kemudian  dianalisis  fitokimianya  secara  kualitatif.  Pengolahan  data 

dilakukan  dengan  menggunakan  program  Microsoft  excel  sehingga  didapatkan 

nilai kadar ekstrak dan IC50. 

Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  daun  mindi  menghasilkan  kadar  ekstrak tertinggi yaitu 11,01%, diikuti bagian kulit, cabang, kayu gubal, dan kayu  teras.  Berdasarkan  jenis  pelarut  yang  digunakan,  ekstrak  terlarut  etil  asetat  menghasilkan kadar tertinggi (16,09%), diikuti ekstrak terlarut metanol (3,49%)  dan n-heksan (3,06%). Ekstrak bagian kayu teras mindi dengan pelarut etil asetat 

memiliki  aktivitas  antioksidan  tertinggi  dengan  nilai  IC50 mencapai  1,88  ppm 

sehingga   tergolong   sebagai   antioksidan   sangat   kuat   bahkan   lebih   kuat  dibandingkan dengan vitamin C.  Hasil pengujian fitokimia menunjukkan bahwa  ekstrak  etil  asetat  bagian  kayu  teras  mindi  mengandung  flavonoid,  alkaloid,  terpenoid, steroid, triterpenoid, fenolik, dan glikosida.