Kromatografi Cair Kinerja Tinggi
100
Tujuan I nstruksional :
1. Pembaca diharapkan memahami pengertian tentang alat HPLC.
2. Pembaca diharapkan memahami pengertian tentang teori HPLC
3. Pembaca diharapkan memahami pengertian tentang pelaksanaan
analisis dengan HPLC 4.
Pembaca diharapkan mampu menjalankan prosedur kerja HPLC. 5.
Pembaca diharapkan memahami cont oh analisa HPLC.
6.1 Pendahuluan
HPLC singkatan dari ”High Perfomance Liquid Chromatography” atau ”High Pressure Liquid Chromatography”, kadang-kadang HPLC
diistilahkan LC Liquid Chromatography atau di I ndonesia diistilahkan KCKT Kromatografi Cair Kinerja Tinggi.
Dari sistem peralatannya, HPLC termasuk kromatografi kolom karena dipakai fase diam yang diisikan atau terpacking didalam kolom.
Tetapi bila ditinjau dari pemisahannya, HPLC termasuk kromatografi adsorpsi atau kromatografi partisi atau asas lainnya tergantung jenis
kolom yang dipakai dan analit yang ditentukan. Jadi tergantung pada butiran-butiran fasa diam yang ada didalam kolom apakah sebagai fasa
padat murni atau disebut cairan. Perkembangan HPLC berawal dari proses pemisahan yang
berazaskan absorpsi dari partisi ke arah yang lebih luas yaitu proses pemisahan yang berazaskan afinitas, filtrasi gel dan ion yang
berpasangan, akan tetapi proses pemisahannya t etap dilaksanakan didalam kolom disertai pemakaian pelarut pengembang dengan tekanan
tinggi.
Kromatografi Cair Kinerja Tinggi
101 Gambar 6.1 Alat I nstrumentasi HPLC
Maksud dan tujuan analisis dengan HPLC hanya ada dua hal yaitu : didapatkannya pemisahan yang baik dan proses analisis barlangsung
dalam waktu relatif singkat. Unt uk tercapainya maksud dan tujuan tersebut, maka diperlukan penataan yang betul-betul sudah dipersiapkan
dan diperhitungkan antara lain: •
Dipilih pelarut pengembang atau pengembang campuran yang sesuai untuk komponen yang dipisahkan.
• Berkaitan dengan pemilihan pelarut pengembang fasa mobil maka
kolom yang dipakai juga harus diperhatikan. •
Detektor yang memadai •
Pengetahuan dasar HPLC yang baik serta pengalaman dan keterampilan kerja yang baik.
Kalau analisa dengan HPLC dapat dilaksanakan dengan baik, maka dapat dikatakan derajatnya sama dengan GLC Kromatografi Gas Cair yang
memakai kolom kapiler.
Kromatografi Cair Kinerja Tinggi
102 HPLC memiliki beberapa keuntungan seperti :
• Dapat dilakukan pada suhu kamar.
• Kolom dan pelarut pengembang dapat digunakan berkali-kali
• Detector HPLC dapat divariasi dan banyak jenisnya
• Waktu analisis pada umumnya singkat
• Ketepatan dan ketelitiannya yang relatif tinggi
• Mudah dioperasikan secara otomatis
Ruang lingkup Penggunaan HPLC sering tumpang tindih dengan penggunaan Kromatografi Gas. Secara umum, biaya yang digunakan
untuk keperluan HPLC lebih besar dari pada kromatografi gas, sehingga seolah-olah kromatografi gas akan lebih banyak dari pada HPLC. Biaya
tersebut meliputi alat inst rumentasi HPLC, kolom dan fasa geraknya, Namun masih banyak senyawa organik yang tidak stabil atau tidak dapat
menguap bila dianalisa dengan kromatografi gas tanpa suatu modifikasi kimiawi sehingga HPLC merupakan pilihan pertama untuk senyawa
organik yang tidak stabil atau tidak menguap seperti bahan-bahan farmasi, makanan minuman, biokimia, kosmetik, serta bahan yang
berhubungan dengan lingkungan akan lebih sesuai dipisahkan menggunakan HPLC.
6.2 Teori Dasar HPLC
