3.6.2. Pemeriksaan Serologi IgG Helicobacter pylori
37,38,39,40
Tujuan : Untuk mengetahui serologi dari infeksi Helicobacter pylori dalam
serum pada penderita gangguan pencernaan Metode
: ELISA: Enzyme Linked Immunosorbent Assay Prinsip
: Bersihan dari antigen Helicobacter pylori melapisi permukaan dari microwell. Assay serum pasien yang diencerkan
ditambahkan kedalam sumur yang telah dilapisi antigen yang dimurnikan. Jika terdapat IgG spesifik antibody, akan melekat ke
antigen. Untuk menghilangkan semua material yang tidak melekat dicuci, dan ditambahkan enzym konjugat untuk
mengikat antibody antigen komplek. Antigen konjugat yang berlebih dicuci dan ditambahkan substrat. Inkubasi plate
memberikan reaksi hydrolisis dari substrat oleh enzym ini. Intensitas warna yang terbentuk sebanding dengan jumlah atau
banyaknya dan IgG spesifik antibody dalam sampel.
3.6.3. Cara kerja :
- Letakkan strip yang telah bernomor pada tempatnya - Kontrol negatif, kontrol positif dan kalibrator siap untuk dikerjakan.
Pengenceran 1:40 dari sampel sebagai persiapan, yaitu sampel sebanyak 5
μL ditambahkan diluent sebanyak 195 μL. Campur
hingga rata.
Universitas Sumatera Utara
- Tambahkan 100
μL diluted sera, kalibrator dan kontrol kedalam sumur yang telah ditentukan. Untuk blank reagen,
tambahkan 100 μL sampel diluent pada posisi sumur 1A. Buka
penutup agar gelembung udara keluar dan campur dengan baik. Inkubasi selama 30 menit pada temperatur ruangan. Keluarkan
semua dari dalam sumur, cuci sebanyak 5 kali dengan 300 μL wash
buffer. Keringkan dengan kertas absorban atau handuk kertas. -
Tambahkan 100 μL enzyme konjugate pada setiap sumur dan
inkubasi 30 menit suhu ruangan -
Keluarkan enzyme konjugate dari sumur, cuci dengan wash buffer 300
μL sampai 5 kali. Keringkan dengan kertas absorban atau handuk kertas.
- Tambahkan 100
μL TMB substrat dan inkubasi 20 menit suhu ruangan. Tambahkan 100
μL stop solution untuk menghentikan reaksi.
- Baca pada panjang gelombang 450nm menggunakan Elisa
reader. -
Reagen yang digunakan berasal dari Indec Reagen.
3.6.5. Cara Perhitungan
Kategori