Profil Protein Alergenik Ekstrak Protein Sarkoplasma dan Miofibril dengan Metode

Naamin N, Badruddin. 1992. Eksplorasi Sumberdaya Hayati Laut Dan Prospeknya Dibidang Perikanan. Makalah Pada Stadium General Dies Natalis II HIMITEKA. Bogor: Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Institut Pertanian Bogor. NIMPIS [National Introduced Marine Pest Information System]. 2002. Asian Green Mussel. http:crimp.marine.csiro.aunimpis.[19 Februari 2011]. Noverina A. 2008. Awas Alergi Bisa Mengubah Perilaku. www.Edu-kidz.com [19 Februari 2011]. Paredi M E, Maltio NV, Crupkin M. 1990. Biochemical properties of actomyosin of cold storage striated adductor muscles of Aulacomya ater ater Molina. Journal of Food Science 55:1567-1570. Porcel S, Leon F, Cumplido J, Cuevas M, Guimarens D Conde-Salazar L. 2001. Contact urticaria caused by heat-sensitive raw fish allergens. Contact Dermatitis 45:139-142. Roitt IM, Delves PJ. 2001. Essential Immunology. 10 th Ed. London: Blackwell Science. Romero MC, Smiddy M, Hill C, Kerry JP, Kelly AL. 2004. Effect of high pressure tretment on physicochemical characteristics of fresh oyster Crassostrea gigas. Innovative Food Science and Emerging Technologies 5:161-169. Rusznak C, Davies RJ. 1998. ABC of allergies: Diagnosing allergy. BMJ 316:686-689. Rybicki EP, Vernon EC, MD James, Sharon JR,editor. 1996. Molecular Biology Techniques Manual. Ed ke-3. Rondebosch: University of Captown. Saanin H. 1984. Taksonomi dan Kunci Identifikasi Ikan. Jilid 4. Bandung : Bina Tjipta. Sahabudin S, Misnan R, Hani Z, Yadzir M, Mohamad J, Abdullah N, Bakhtiar F, Murad S. 2011. Identification of Major and Minor Allergens of Black Tiger Prawn Penaeus monodon and King Prawn Penaeus latisulcatus. Malaysian J Med Sciences. 183:27-32. Sakaguchi M, Toda M, Ebihara T, Irie S, Hori H, Imai A. 2000 IgE antibody to fish gelatin type I collagen in patient with fish allergy. Journal of Allergy and Clinical Immunology 106:579-584. Samartin S, Marcus A Chandra RK. 2001. Food hypersensitivity. Nutr.Res. 21:473-497. Sampson HA. 2005. Food Allergy- accurately identifying clinical reactivity. Allergy 6079:19-24. Shahnaz M, Balwant SG Nasaruddin A. 2001. Skin test reactivity to inhalant and food allergen in patients with allergic rhinitis. J Int.Med.Research. 52:69-73. Shiomi K, Emoto Ai, Ishizaki S. 2009. Tropomyosin in gastropods and bivalves: Identification as major allergens and amino acid sequence feature. Food Chemistry 114:634-641. Shriver S, Yang W, Chung SY, Percival S. 2011. Pulsed ultraviolet light reduce immunoglobulin E binding to Atlantic White Shrimp Litopenaeus setiferus extract. J Environ Res Public Health 8:2569-2583. Sicherer SH, Munoz-Furlong A, Sampson HA. 2004. Prevalence of seafood allergy in the United States determined by rendom telephone survey. J Allergy Clin Immunol 1141:159-165. Sicherer SH, Sampson HA. 2009. Food Allergy. J Allergy Clin Immunol 125:S116-25. Sriket P, Benjakul S, Visessanguan W, Kijroongrojana K. 2007. Comparative studies on chemical composition and thermal properties of black tiger shrimp Penaeus monodon and white shrimp Penaeus vannamei meats. Food Chemistry 103:1199-1207. Subagio A, Windrati WS, Fauzi M, Witono Y. 2004. Karakterisasi protein miofibril dari ikan kuniran Upeneus moluccensis dan ikan mata besar Selar crumenophthalmus. Jurnal Teknologi dan Industri Pangan XV1. Suzuki T. 1981. Fish and krill protein.: processing technology. London: Applied Science Publ.Ltd. Taylor SL. 2008. Molluscan shellfish allergy. Adv Food Nutr Res 54:139-77. Thanonkaew A, Benjakul A, Vissesanguan W. 2006. Chemical composition and thermal property of cuttlefish Sephia pharaonis muscle. Journal of Food Composition and Analysis 19:1287-133. Towbin H, Staehelin T, Gordon J. 1979. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets : Procedure and some applications. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 76:4350-4354. Untersmayr E, Poulsen LK, Platzer MH, Pedersen MH, Nitulescu GB and Jarolim EJ. 2005. The Effect of Gastric Digestion on Codfish Allergenicity. J Allergy Clin Immunol 115:377-82. Walsh G. 2001. Protein Biochemistry and Biotechnology. Ireland: Industrial Biochemistry Programme University of Limerick. Wijaya SKS, Rohman L. 2001. Fraksinasi dan karakterisasi protein utama biji kedelai. J Ilmu Dasar 21:49-54. Wilson K, Walker J. 2000. Principle and Technique of Practical Biochemistry. 5 th ed. Cambridge:Cambridge University Press. Wild LG, Lehrer SB. 2005. Fish and shellfish allergy. Curr Allergy Asthma Rep 51 74-9. Yu Hl, Chao MJ, Cai QF, Weng WY, Su WJ, Liu GM. 2011. Effect of different processing method on digestibility of Scylla paramamosain allergen tropomyosin. Food and Chemical Toxicology 49: 791-798. Yuliarni. 1998. Studi alergenisitas protein udang windu Penaeus monodon Fabr untuk pembuatan isolat alergen [skripsi]. Bogor: Fakultas Teknologi Pertanian, Institut Pertanian Bogor. Zakaria FR, Khatib A, Ispurwanto, Rahman A. 1998. Telaah sifat alergenisitas proteim udang putih Penaeus merguensis untuk produksi isolat alergen. Bul Teknol dan Industri Pangan 2IX:54-59. Zakaria FR, Belleville FR, Nabet P and Linden G. 1992. Allergenicity of Bovine Casein Its Digestive Enzyme Hidrolizates. In Developement of Food Science and Technology in Southeast Asia. Ed. Liang OB, Fardiaz D AND Buchanan A. Bogor: IPB Press. Lampiran 1. Larutan-larutan untuk ekstraksi protein sarkoplasma dan miofibril 1. Buffer Phospat pH 7.5, I=0.05 Sebanyak 2.201 g NaH 2 PO 4 dan 0.4597 g KH 2 PO 4 dilarutkan dalam 1 liter air destilata, pH ditepatkan sebesar 7.5 2. KCl buffer phospat pH 7.5, I= 0.5 Sebanyak 2.201 g NaH 2 PO 4 , 0.4597 g KH 2 PO 4 dan 33.625 g KCl dilarutkan dalam tepat 1 liter dalam air destilata, pH diatur sebesar 7.5 Lampiran 2. Larutan-larutan untuk SDS PAGE Larutan Stok : 1. Larutan A Akrilamid 30; 0.8 bisakrilamid 100 ml Sebanyak 30.0 g akrilamid dan 0.8 g N.N’-metilen-bisakrilamid dilarutkan dalam 100 ml akuades. Saring larutan melalui filter 0.45 µm. pada waktu penimbangan selalu harus menggunakan sarung tangan dan tutup wadah dengan parafilm selama proses pelarutan. Larutan akrilamid dapat disimpan selama beberapa bulan dalam lemari pendingin bersuhu 4 °C. 2. Larutan B 4x Tris-ClSDS. pH 8.8 100 ml Sebanyak 18.17 g Tris base dan 4 ml 10 SDS dilarutkan dalam 40 ml akuades. Tepatkan pada pH 8.8 dengan 1 N HCl. Tambahkan akuades hingga volume total 100 ml. saring larutan melalui filter 0.45 µm. 3. Larutan C 4x Tris-ClSDS. pH 6.8 100 ml Sebanyak 6.05 g Tris base dan 4 ml 10 SDS dilarutkan dalam 40 ml akuades. Tepatkan pada pH 8.8 dengan 1 N HCl. Tambahkan akuades hingga volume total 100 ml. saring larutan melalui filter 0.45 µm. 4. 10 APS. 0.5 ml Dibuat segar setiap kali akan melakukan elektroforesis. Larutkan 0.05 g amonium persulfat dalam 0.5 ml akuades 5. 5 X SDSbuffer elektroforesis. 1 L Larutkan 15.1 g Tris base. 72.0 g glisin. Dan 5.0 g SDS dalam 800 ml akuades. Setelah larut, tepatkan volume hingga 1.0 L. untuk membuat 1x SDSbuffer elektroforesis, encerkan 1 bagian volume larutan di atas dalam 4 bagian volume akuades. 6. 2x SDSbuffer sampel. 100 ml Campurkan 30 ml 10 SDS. 10 ml gliserol 50. 5.0 ml 2- merkaptoetanol. 12.5 ml 4x Tris ClSDS pH 6.8 dan 5-10 mg bromphenol blue. Tepatkan volume hingga 100 ml dengan akuades. Simpan pada suhu rendah. 7. Larutan pewarna staining Sebanyak 1 gram coomasie briliant blue R-250. 450 ml metanol dan 100 ml asam asetat glasial dilarutkan dalam 450 ml akuades. 8. Larutan penghilang warna destaining Sebanyak 100 ml metanol dan 100 ml asam asetat glasial dilarutkan dalam 800 ml akuades. Lampiran 3. RumusFormula pembuatan larutan-larutan untuk ELISA 1. Coating buffer: Carbonat-Bicarbonat buffer pH 9.6 a. 0.2 M Na2CO3 b. 0.2 M NaHCO3 Campurkan 16 ml a dan 34 ml b. Tambahkan dH20 sampai dengan 200 ml pH 9.6. atau larutkan 1 kapsul carbonat-bicarbonat buffer SIGMA dalam 100 ml dH2O pH 9.6 2. Blocking Buffer BSA 3 Sebanyak 3 gr BSA dilarutkan dalam 100 ml PBS Phospat Buffer Saline 3. Washing Buffer PBS Tween-20 0.05 Sebanyak 0.5 ml Tween-20 ditambahkan ke dalam 1 Liter PBS 1x. 4. PBS Phospat Buffer Saline 10 x konsentrasi Untuk 1 Liter - 1.7 M NaCl - 0.034 M KCl - 0.1 M Na 2 HPO 4 - 0.018 M KH 2 PO 4 100 g 2.5 g 14.4 g 2.5 g Jadikan 1 liter dengan dH2O dan diautoclave untuk steril. Untuk membuat PBS 1X yaitu dengan mengambil 100 ml PBS 10X dan ditambahkan dH2O 900 ml. 5. Substrat TMB Dibuat segar setiap kali akan melakukan ELISA. Satu tablet TMB dilarutkan dalam 1 ml DMSO divortex 5 menit. Tambahkan buffer substrat citrate phospate buffer sampai dengan 10 ml dan divortex. 6. Pengenceran serum 1:10 • Untuk penentuan total IgE serum : Sebanyak 100 µl serum ditambahkan 900 µl coating buffer, kemudian di vortex dan bisa disimpan dalam frezer. • Untuk pengujian alergenisitas sampel: Sebanyak 100 µl serum ditambahkan 900 µl PBST 0.05, kemudian di vortex dan bisa disimpan dalam frezer. 7. Pembuatan konjugat HRP 1:6000 Sebanyak 2µL konjugat HRP ditambahkan dengan 11.998 µl PBST 0.05 kemudian divortex.