Preparasi Jaringan Pemeriksaan Histologi . Pemeriksaan Radiologi

18 digergaji menggunakan bone saw dengan konfigurasi garis fraktur transversal pada dua tempat dengan jarak 4mm. Segmen tulang yang dibatasi kedua garis fraktur tersebut dikikir sehingga didapatkan defek tulang sebesar 4mm. Defek tulang diisi menurut alokasi kelompok. Fiksasi interna dilakukan dengan intramedullary k wire. Jaringan lunak ditutup lapis demi lapis hingga ke kulit.

3.7. Protokol Penelitian

3.7.1. Preparasi Jaringan

Semua tikus dimatikan pada akhir minggu ketujuh dan masing-masing kruris difiksasi dengan menggunakan larutan formalin 10 selama satu hari. Kemudian dilakukan dekalsifikasi dengan larutan HCl selama satu hari. Proses selanjutnya adalah dehidrasi, sediaan direndam dalam alkohol 70, 80, 95 selama masing-masing tiga jam kemudian direndam dalam alkohol absolut 100 tiga kali masing-masing selama tiga jam. Berikutnya adalah clearing process , sediaan direndam dengan larutan Xylol dua kali, masing-masing selama tiga jam. Langkah selanjutnya infiltration embedding process , dimana sediaan dimasukkan dalam paraffin cair bersuhu 45°C. Sediaan kemudian didinginkan pada suhu kamar dan setelah keras, dipotong dengan mikrotom secara longitudinal. Tiap bahan dari blok parafin dibuat 3 slide diwarna dengan Hematoxylin-Eosin.

3.7.2 Pemeriksaan Histologi

Penilaian inkorporasi autograft dinilai secara histologis setelah dilakukan pewarnaan Hematoxilyn Eosin HE berdasarkan skoring penyembuhan fraktur menurut Salkeld yang dimodifikasi.Dilihat daerah osteotomi proksimal dan distal. Nilai skor histologi merupakan jumlah nilai dari osteotomi proksimal dan distal. Skor mulai dari 0 sampai 8. ?? Universitas Sumatera Utara 19 Tabel 1 . Skor histologi Salkeld yang dimodifikasi Kualitas penyembuhan Tidak terdapat penyembuhan Penyembuhan dengan fibrous 1 Penyembuhan fibrokartilago atau kartilago 25 2 Penyembuhan fibrokartilago atau kartilago 26-50 Penyembuhan fibrokartilago atau kartilago 51-75 Penyembuhan fibrokartilago atau kartilago 75 3 4 5 Penyembuhan tulang dengan kartilago termineralisasi 6 Penyembuhan tulang matur 7 Salkeld SL, Patron LP, Barrack RL, Cook SD. J Bone Joint Surg Am 83:2001; 6:803 –816

3.7.3 . Pemeriksaan Radiologi

Penilaian inkorporasi graft tulang secara radiologis berdasarkan skor radiologi menurut Lane dan Sandhu. Tabel 2. Skor Radiologi menurut Lane dan Sandhu yang dimodifikasi ?? BONE FORMATION No evidence of bone formation 1 2 3 4 Bone formation occupying 25 of defect Bone formation occupying 50 of defect Bone formation occupying 75 of defect Bone formation occupying 100 of defect UNION Nonunion 2 4 Possible union Radiographic union REMODELING No evidence of remodeling 1 2 Remodeling of intramedullary canal Full remodeling of cortex Maximum score 10 Lane J M, Sandhu H S. Current approaches to experimental bone grafting. Orthop Clin North Am 1987; 18: 213-25. Turkiye Klinikleri J Med Sci 2010;302:623-30 Universitas Sumatera Utara 20

3.8. Alur penelitian