Alat dan Bahan .1 Alat Hewan Percobaan Penyiapan Sampel .1 Pengumpulan tumbuhan

26

BAB III METODE PENELITIAN

Penelitian ini menggunakan metode eksperimental dengan tahapan penelitian yaitu pengumpulan tumbuhan, identifikasi tumbuhan, pembuatan simplisia, pembuatan ekstrak, pengamatan meliputi gejala toksik, berat badan,jumlah pakan kematian,makropatologi dan histopatologi organ hati dan ginjal, pengujian biokimia darah meliputi ALT dan kreatinin serta kemudian dilakukan analisis statistik. 3.1 Alat dan Bahan 3.1.1 Alat Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah alat-alat gelas laboratorium, alat bedah Wells spencer, alat destilasi, blender Miyako, lemari pengering, neraca digital Vibra, neraca hewan Presica Geniweigher GW-1500, neraca kasar ohaus, oral sonde,rotary evaporator heidolph VV-300, sentrifuge dan spuit 1mL Terumo. 3.1.2 Bahan Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini meliputi bahan tumbuhan dan bahan kimia. Bahan tumbuhan yang digunakan yaitu daun kembang bulan Tithonia diversifolia Hemsley A. Gray. Bahan kimia yang digunakan yaitu akuades, CMC-Na, etanol 80, formalin 10 dan natrium klorida 0,9.

3.2 Hewan Percobaan

Hewan percobaan yang digunakan adalah mencit jantan dengan berat badan 20-30 g, berumur 2-3 bulan. Sebelum percobaan dimulai, Universitas Sumatera Utara 27 hewandiaklimatisasi di ruang percobaan selama lebih kurang 7 hari Ditjen, POM., 2014. Hewandikelompokkan secara acak sedemikian rupa sehingga penyebaran berat badan merata untuk semua kelompok. Sebanyak 25 ekor mencit dibagi dalam 5 kelompok. 3.3 Penyiapan Sampel 3.3.1 Pengumpulan tumbuhan Pengumpulan tumbuhan dilakukan secara purposif yaitu tanpa membandingkan dengan tumbuhan yang sama dari daerah lain. Tumbuhan yang digunakan adalah daunkembang bulan Tithonia diversifolia Hemsley A. Gray yang diperoleh dari bumi perkemahanSibolangit Provinsi Sumatera Utara.

3.3.2 Identifikasi tumbuhan

Identifikasidaunkembang bulan Tithonia diversifolia Hemsley A. Gray dilakukan di Herbarium Medanense MEDA, Universitas Sumatera Utara.

3.3.3 Pembuatan simplisia

Daun kembang bulan Tithonia diversifolia Hemsley A. Gray yang masih segar dipisahkan dari tangkainya, dicuci kemudian ditiriskan dan ditimbang beratnya sebagai berat basah 6500 g. Daun kemudian dikeringkan dalam lemari pengering hingga kering yang ditandai dengan sampel mudah dipatahkan, kemudian ditimbang kembali sebagai berat kering selanjutnya diblender dan ditimbang sebagai berat serbuk simplisia 750 g. Serbuk simplisia dimasukkan kedalam kantong plastik, diberi etiket dan disimpan di tempat yang sesuai.

3.4 Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Kembang Bulan