BAB III METODE PERCOBAAN
3.1 Tempat
Pemeriksaan bakteri koliform pada air bersih, dilakukan di Laboratorium Biologi Balai Teknik Kesehatan Lingkungan dan Pengendalian
Penyakit BTKL PP Medan yang bertempat di Jalan K.H. Wahid Hasyim
No.15 Medan.
3.2 Sampel, Alat, dan Bahan 3.2.1 Sampel
Sampel yang digunakan adalah air bersih dari Hotel Santika Jl. Kapten Maulana Lubis No. 07 Medan. Organoleptis: tidak berwarna, tidak berasa, dan
tidak berbau.
3.2.2 Alat
Alat timbangan analitik, Alat gelas pyrex, Bola pipet, Bunsen, Hot plate, Kapas, Magnetic Stirrer, Ose, Otoklaf, Oven, Pipet volume 10 ml
Pyrex, Rak tabung, Tabung durham, Tabung reaksi.
3.2.3 Bahan
Sampel air bersih, Media Lactose Broth LB, Aquadest, Media Brilliant Green Lactose Broth
BGLB.
Universitas Sumatera Utara
3.3 Pembuatan Media 3.3.1 Media Lactose Broth LB
a. Pembuatan Media Lactose Broth Double
Ditimbang seksama media Lactose Broth sebanyak 52 gr. Dimasukkan ke dalam beker gelas, dilarutkan dalam 1 liter aquadest. Dimasukkan magnetic
stirrer . Dipanaskan diatas hot plate sampai larut. Dimasukkan ke dalam tabung
reaksi yang berisi tabung durham masing-masing 5 ml dalam 5 tabung. Disterilkan di dalam oven dengan tekanan atm pada suhu 121˚C selama 15
menit, setelah dingin di simpan di tempat yang bersih dan kering.
b. Pembuatan Media Lactose Broth Single
Ditimbang seksama media Lactose Broth sebanyak 13 gr. Dimasukkan ke dalam beker gelas, dilarutkan dalam 1 liter aquadest. Dimasukkan magnetic
stirrer. Dipanaskan diatas hot plate sampai larut. Dimasukkan ke dalam tabung
reaksi yang berisi tabung durham masing-masing 10 ml dalam 10 tabung. Disterilkan di dalam oven dengan tekanan atm pada suhu 121˚C selama 15
menit, setelah dingin di simpan di tempat yang bersih dan kering.
3.3.2 Media Brilliant Green Lactose Broth BGLB Ditimbang seksama media Brilliant Green Lactose Broth sebanyak 40
gr. Dimasukkan ke dalam beker gelas, dilarutkan dalam 1 liter aquadest. Dimasukkan magnetic stirrer. Dipanaskan diatas hot plate sampai larut.
Dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi tabung durham masing-masing 10 ml. Disterilkan di dalam oven dengan tekanan atm pada suhu 121˚C selama
15 menit, setelah dingin di simpan di tempat yang bersih dan kering.
Universitas Sumatera Utara
3.4 Uji Perkiraan
1. Pada tes perkiraan digunakan media Lactose Broth. Tes perkiraan dilakukan
dengan 2 cara, yaitu single dan double. Single
: 13
gram Lactose Broth
dalam 1000 ml aquadest. Caranya : Siapkan 10 buah tabung reaksi yang telah diisi dengan
tabung durham dengan posisi terbalik. 10 tabung diisi dengan masing-masing 10 ml media.
Double :
52 gram
Lactose Broth dalam 1000 ml aquadest.
Caranya : Siapkan 5 buah tabung reaksi yang telah diisi dengan tabung durham dengan posisi terbalik. 5 tabung tersebut diisi dengan
10 ml media. 2.
Masukkan sampel yang sudah dihomogenkan secara aseptik ke dalam masing-masing tabung media LB.
3. Tabung-tabung dalam rak digoyang, supaya sampel air dengan media
bercampur rata. 4.
Inkubasikan pada inkubator pada suhu 35°C selama 24 jam. Reaksi dinyatakan positif bila terbentuk asam dan gas dalam tabung fermentasi. Bila
tidak ada reaksi asam atau gas, inkubasikan kembali sampai 48 jam. 5.
Bila pada tabung fermentasi tidak terbentuk asam dan gas dalam waktu 48 jam, maka tes perkiraan dinyatakan negatif, bila pada tabung fermentasi
Universitas Sumatera Utara
terbentuk asam dan gas dalam waktu 48 jam, maka tes perkiraan dinyatakan positif.
6. kemudian tabung-tabung yang positif dilanjutkan ke tes penegasan.
3.5 Uji Penegasan
Kategori