misalnya susu, digunakan Brilliant Green Lactose Bile Broth BGLBB. Bakteri asam laktat dapat memfermentasi laktosa dan membentuk gas, hingga dapat
mengakibatkan pembacaan uji positif yang salah. BGLBB merupakan medium selektif yang mengandung garam bile sehingga dapat menghambat bakteri gram
negatif termasuk koliform. Inkubasi dilakukan pada suhu 35°C selama 24 jam, dan tabung
dinyatakan positif jika terbentuk gas sebanyak 10 atau lebih dari volume di dalam tabung durham. Tabung yang tidak menunjukkan pembentukan gas
diperpanjang lagi inkubasinya sampai 48 jam. Jika tetap tidak terbentuk gas, dihitung sebagai tabung negatif. Jumlah tabung yang positif dihitung pada
masing-masing seri. MPN penduga dapat dihitung dengan melihat Tabel MPN 7 atau Tabel MPN 15 tabung.
2.5.5 Uji Penguat Koliform
Terbentuknya gas di dalam Lactose Broth atau di dalam BGLBB tidak selalu menunjukkan jumlah bakteri koli karena mikroba lainnya mungkin juga
ada yang dapat memfermentasi laktosa dengan membentuk gas, misalnya bakteri asam laktat dan beberapa khamir tertentu. Oleh karena itu perlu
dilakukan uji penguat pada agar EMB. Dengan menggunakan jarum Ose, contoh dari tabung MPN yang
menunjukkan uji penduga positif terbentuk gas masing-masing diinokulasikan pada agar cawan EMB dengan cara goresan kuadran. Semua tabung
diinkubasikan pada suhu 35°C selam 24 jam. Jumlah cawan EMB pada masing- masing pengenceran yang menunjukkan adanya pertumbuhan koliform, baik
Universitas Sumatera Utara
fekal maupun nonfekal, dihitung, dan MPN dapat dihitung dari Tabel MPN 7 tabung atau 15 tabung.
2.5.6 Uji Lengkap Koliform
Dari pertumbuhan koloni pada agar cawan EMB, dipilih masing-masing satu koloni yang mewakili koliform fekal dan satu koloni yang mewakili
koliform nonfekal. Uji lengkap dilakukan untuk melihat apakah isolat yang diambil benar merupakan bakteri koliform. Dari masing-masing koloni tersebut
dibuat pewarnaan Gram, dan sisanya masing-masing dilarutkan ke dalam 3 ml larutan pengencer steril.
Dari suspensi bakteri tersebut masing-masing diinokulasikan menggunakan jarum Ose ke dalam tabung berisi Lactose Broth dan tabung
durham, dan digoreskan pada agar miring Nutrient Agar. Tabung diinkubasikan pada suhu 35°C selama 24 dan 48 jam, dan diamati adanya pertumbuhan dan
pembentukan gas di dalam Lactose Broth. Koloni yang menunjukkan reaksi pewarnaan gram negatif berbentuk batang, dan membentuk gas di dalam
Lactose Broth merupakan uji lengkap adanya koloni koliform.
Uji penduga juga merupakan uji kuantitatif koliform menggunakan metode MPN. Uji kualitatif koliform tidak harus selalu dilakukan secara
lengkap, tergantung dari berbagai faktor misalnya waktu, mutu contoh yang diuji, biaya, tujuan analisis, dan faktor-faktor lainnya Fardiaz, 1993.
2.6 Analisis menggunakan Metode Most Probable Number MPN
