2. Penyiapan larva udang Dimasukkan telur udang ke dalam wadah penetas yang berbentuk
kerucut berisi air laut Disinari dengan lampu dan dilengkapi dengan aerator sebagai sumber
oksigen dan menjaga agar telur tidak mengendap Didiamkan selama 24 jam
3. Penyiapan larutan stock
Ditimbang masing-masing 50gram ekstrak larut heksan, tidak larut heksan, larut metanol
Dimasukkan masing-masing ke dalam vial Ditambahkan pelarut, larut hexan hexan, tidak larut hexan n -
butanol, larut metanol metanol
4. Pelaksanaan uji
Disiapkan alat dan bahan Ditambahkan air laut 2 ml ke dalam masing-masing vial yang berisi
larutan sampel dan control air pelarut Ditambahkan masing-masing 10 ekor larva udan ke dalam vial
dicukupkan dengan air laut sampai volume 3 ml Ditambahkan masing-masing vial dengan dua tetes suspensi ragi
sebagai sumber makan Disimpan 1 x 24 jam
Dihitung jumlah larva yang mati Diamati
I. Fraksinasi Diucapkan basmalah
Disiapkan alat dan bahan yang digunakan Ditimbang dan dimasukkan serbuk silika ke dalam senter glass lalu
dimampatkan sebanyak 13 gram
Ditimbang serbuk silika 7 gram dan ekstrak larut n-heksan 1,5 gram lalu digerus di lumpang hingga homogen
Dicampurkan serbuk silika dan ekstrak n-heksan yang telah dihomogenkan, dimasukkan ke dalam center glass lalu dimampatkan kemudian di
letakkan kertas saring di atasnya Difraksinasi sampel dengan kromatograsi cair vakum menggunakan eluen
n-heksan, etil dan metanol dengan berbagai perbandingan dari tingkat kepolaran dari rendah ke tinggi
Ditampung hasil fraksinasi masing-masing perbandingan dalam mangkok kecil, lalu diuapkan
Dimasukkkan hasilnya ke dalam vial lalu diencerkan dengan pelarut
Ditotolkan pada lempeng kemuadian dielusi dengan eluen heksan : etil
Dilihat penampakan noda pada lempeng dibawah uv 254 dan 366
Sampel yang mempunyai profil KLT yang sama digabung hingga diperoleh fraksi
J. Kromatografi Lapis Tipis Preparative 1. Pembuatan lempeng preparativ
Ditimbang serbuk silika gel 20 gram untuk tiga lempeng
Dibuat suspensi silika dengan memasukkan silika gel 20 gram ke dalam Erlenmeyer dan dilarutkan dengan 50 ml aquadest
Dikocok hingga homogen
Dituang suspensi silika gel di atas lempeng kemudian lempeng digoyang - goyangkan hingga semua suspensi silika rata menutupi
permukaan lempeng
Didiamkan 1 x 24 jam
Diaktifkan dioven selama 1 - 2 jam suhu 110°C 2. Penotolan sampel
Disiapkan alat dan bahan
Dilarutkan ekstrak fraksi A dalam vial dengan pelarut kloroform : methanol 1:1
setelah larut, ditotolkan pada lempeng preparatif yang telah diaktifkan menggunakan pipa kapiler
diukur eluen hexan : etil 3:1 masing-masing 45 ml dan 15 ml
dimasukkan eluen ke dalam chamber lalu dijenuhkan
setelah chamber dalam keadaan jenuh, dimasukkan lempeng preparatif yang telah dtotolkan ke dalam chamber
ditutup chamber dan ditunggu hingga proses elusi selesai
setelah proses elusi selesai, dikeluarkan lempeng lalu diangin-anginkan hingga eluennya menguap
dilihat penampakan noda yang berbentuk pita pada uv 366 nm dan 254 nm
diberi tanda noda yang dibentuk kemudian dikeruk
diperoleh dua noda
ditambahkan masing-masing noda dengan pelarut kloroform : methanol sebanyak 10 ml
kemudian dipipet ke dalam tabung sentrifuge
disentrifuge dengan kecepatan 2500 rpm dalam waktu 5 menit
diperoleh 2 lapisan yaitu cairan bening dan endapan
dipipet masing-masing cairan bening dari masing-masing noda ke dalam 2 vial yang berbdea
K. Multieluen Disiapkan alat dan bahan
Disiapkan noda hasil kromatografi lapis tipis preparatif yang akan ditotol pada lempeng silika gel noda 1 dan noda 2
ditotol masing-masing noda pada lempeng silika gel yang telah diaktifkan
disiapkan eluen hexan : etil 5:1, kloroform : etil 1:1 dan etil : metanol 1:5
dielusi masing-masing noda dengan eluen yang telah disiapkan diamati penampakan noda pada lampu UV
L. Identifikasi senyawa golongan Disiapkan alat dan bahan
Diukur eluen hexan : etil 3:1 sebanyak 60 ml, di mana hexan 45 ml dan etil 15 ml
Diaktifkan lempeng akan digunakan
Diberi batas atas dan batas bawah pada lempeng
Ditotol sampel yang terdiri atas dua noda pada lempeng
Dimasukkan eluen hexan : etil ke dalam chamber
Dijenuhkan chamber
Dimasukkan lempeng yang telah ditotol
Ditunggu hingga proses elusi selesai
Diamati penampakan noda pada lampu UV Diidentifikasi noda yang tampak
+ dragondorff + LB + AlCl
3
+FeCl
3
+ KOH etanolik + H
2
SO
4
+ berwarna diamati diamati
+ biru,hitam + warna merah
Jingga dengan dilampu UV di lampu UV latar belakang
kuning + coklat,biru + kuning
LAMPIRAN II PERHITUNGAN
A. Ekstraksi