Penyiapan larutan stock Pelaksanaan uji

2. Penyiapan larva udang Dimasukkan telur udang ke dalam wadah penetas yang berbentuk kerucut berisi air laut Disinari dengan lampu dan dilengkapi dengan aerator sebagai sumber oksigen dan menjaga agar telur tidak mengendap Didiamkan selama 24 jam

3. Penyiapan larutan stock

Ditimbang masing-masing 50gram ekstrak larut heksan, tidak larut heksan, larut metanol Dimasukkan masing-masing ke dalam vial Ditambahkan pelarut, larut hexan hexan, tidak larut hexan n - butanol, larut metanol metanol

4. Pelaksanaan uji

Disiapkan alat dan bahan Ditambahkan air laut 2 ml ke dalam masing-masing vial yang berisi larutan sampel dan control air pelarut Ditambahkan masing-masing 10 ekor larva udan ke dalam vial dicukupkan dengan air laut sampai volume 3 ml Ditambahkan masing-masing vial dengan dua tetes suspensi ragi sebagai sumber makan Disimpan 1 x 24 jam Dihitung jumlah larva yang mati Diamati I. Fraksinasi Diucapkan basmalah Disiapkan alat dan bahan yang digunakan Ditimbang dan dimasukkan serbuk silika ke dalam senter glass lalu dimampatkan sebanyak 13 gram Ditimbang serbuk silika 7 gram dan ekstrak larut n-heksan 1,5 gram lalu digerus di lumpang hingga homogen Dicampurkan serbuk silika dan ekstrak n-heksan yang telah dihomogenkan, dimasukkan ke dalam center glass lalu dimampatkan kemudian di letakkan kertas saring di atasnya Difraksinasi sampel dengan kromatograsi cair vakum menggunakan eluen n-heksan, etil dan metanol dengan berbagai perbandingan dari tingkat kepolaran dari rendah ke tinggi Ditampung hasil fraksinasi masing-masing perbandingan dalam mangkok kecil, lalu diuapkan Dimasukkkan hasilnya ke dalam vial lalu diencerkan dengan pelarut Ditotolkan pada lempeng kemuadian dielusi dengan eluen heksan : etil Dilihat penampakan noda pada lempeng dibawah uv 254 dan 366 Sampel yang mempunyai profil KLT yang sama digabung hingga diperoleh fraksi J. Kromatografi Lapis Tipis Preparative 1. Pembuatan lempeng preparativ Ditimbang serbuk silika gel 20 gram untuk tiga lempeng Dibuat suspensi silika dengan memasukkan silika gel 20 gram ke dalam Erlenmeyer dan dilarutkan dengan 50 ml aquadest Dikocok hingga homogen Dituang suspensi silika gel di atas lempeng kemudian lempeng digoyang - goyangkan hingga semua suspensi silika rata menutupi permukaan lempeng Didiamkan 1 x 24 jam Diaktifkan dioven selama 1 - 2 jam suhu 110°C 2. Penotolan sampel Disiapkan alat dan bahan Dilarutkan ekstrak fraksi A dalam vial dengan pelarut kloroform : methanol 1:1 setelah larut, ditotolkan pada lempeng preparatif yang telah diaktifkan menggunakan pipa kapiler diukur eluen hexan : etil 3:1 masing-masing 45 ml dan 15 ml dimasukkan eluen ke dalam chamber lalu dijenuhkan setelah chamber dalam keadaan jenuh, dimasukkan lempeng preparatif yang telah dtotolkan ke dalam chamber ditutup chamber dan ditunggu hingga proses elusi selesai setelah proses elusi selesai, dikeluarkan lempeng lalu diangin-anginkan hingga eluennya menguap dilihat penampakan noda yang berbentuk pita pada uv 366 nm dan 254 nm diberi tanda noda yang dibentuk kemudian dikeruk diperoleh dua noda ditambahkan masing-masing noda dengan pelarut kloroform : methanol sebanyak 10 ml kemudian dipipet ke dalam tabung sentrifuge disentrifuge dengan kecepatan 2500 rpm dalam waktu 5 menit diperoleh 2 lapisan yaitu cairan bening dan endapan dipipet masing-masing cairan bening dari masing-masing noda ke dalam 2 vial yang berbdea K. Multieluen Disiapkan alat dan bahan Disiapkan noda hasil kromatografi lapis tipis preparatif yang akan ditotol pada lempeng silika gel noda 1 dan noda 2 ditotol masing-masing noda pada lempeng silika gel yang telah diaktifkan disiapkan eluen hexan : etil 5:1, kloroform : etil 1:1 dan etil : metanol 1:5 dielusi masing-masing noda dengan eluen yang telah disiapkan diamati penampakan noda pada lampu UV L. Identifikasi senyawa golongan Disiapkan alat dan bahan Diukur eluen hexan : etil 3:1 sebanyak 60 ml, di mana hexan 45 ml dan etil 15 ml Diaktifkan lempeng akan digunakan Diberi batas atas dan batas bawah pada lempeng Ditotol sampel yang terdiri atas dua noda pada lempeng Dimasukkan eluen hexan : etil ke dalam chamber Dijenuhkan chamber Dimasukkan lempeng yang telah ditotol Ditunggu hingga proses elusi selesai Diamati penampakan noda pada lampu UV Diidentifikasi noda yang tampak + dragondorff + LB + AlCl 3 +FeCl 3 + KOH etanolik + H 2 SO 4 + berwarna diamati diamati + biru,hitam + warna merah Jingga dengan dilampu UV di lampu UV latar belakang kuning + coklat,biru + kuning LAMPIRAN II PERHITUNGAN

A. Ekstraksi