Untuk 300 ml, maka KH
2
PO
4
yang diambil =
50ml
KH
2
PO
4 X
= 200ml
300ml
=
75ml diambil
b. NaOH BM NaOH = 40
M =
massa BM
×
1000 Vml
50mM
=
X 40
×
1000 50ml
2000 mg = 20X X= 100 mg NaOH
Untuk 300ml, maka NaOH yang diambil =
12,6ml
NaOH
X
= 200ml
300ml
=
18,9ml diambil
Jadi, untuk membuat dapar fosfat pH 6,5 50 mM maka KH
2
PO
4
ditimbang sebanyak 1,701125 gram dilarutkan dalam akuades hingga volume 250 ml,
sehingga diperoleh larutan KH
2
PO
4
50 mM. Kemudian NaOH ditimbang sebanyak 100 mg dilarutkan dalam akuades hingga volume 50 ml, sehingga
diperoleh larutan NaOH 50 mM. Larutan dapar fosfat pH 6,5 dibuat dengan cara menambahkan 75 ml KH
2
PO
4
50mM dengan 18,9 ml NaOH 50mM lalu diencerkan dengan akuades hingga volume
300 ml
.
Lalu dilakukan pengukuran pH dengan pH meter sampai diperoleh pH 6,5, jika perlu ditambahkan NaOH
untuk meningkatkan pH larutan.
E. Perhitungan Larutan Substrat L-Tirosin 1mM
BM L-tirosin = 181,19
M = Massa
BM ×
1000 V ml
0,001 M = X
181,19 ×
1000 25ml
X = 0,0045298 gram = 0,00453 gram
= 4,53 mg dilarutkan dalam 25 ml buffer fosfat 50mM pH 6,5
F. Perhitungan Preparasi Enzim Tirosinase 250 Unitml
Enzim mushroom tyrosinase yang tersedia dalam kemasan adalah 50 KU. Pembuatan larutan stok enzim tirosinase dilakukan dengan cara melarutkan
enzim tirosinase 50 KU dalam larutan dapar fosfat pH 6,5 hingga 10 ml. Sediaan 10 ml yang dihasilkan, dibagi menjadi 2 bagian sehingga tiap 5 ml
mengandung enzim mushroom tyrosinase 25000 Unit. Kemudian sediaan 5 ml mushroom tyrosinase 25000 Unit di adjust dengan larutan dapar fosfat pH 6,5
hingga 10 ml. Sediaan 10 ml mushroom tyrosinase 25000 Unit dibagi menjadi 10 bagian sehingga tiap 1 ml mengandung mushroom tyrosinase 2500 Unit.
Sediaan 1 ml mushroom tyrosinase 2500 Unit di adjust dengan larutan dapar fosfat pH 6,5 hingga 10ml dan disimpan di dalam freezer suhu -20
o
C. Tiap 1 ml sediaan mengandung mushroom tyrosinase 250 Unit.
G. Contoh Perhitungan Preparasi Standar Genistein dan Sampel
a. Standar genistein Ditimbang 5,785 mg standar induk genistein kemudian dilarutkan dalam
10 ml metanol p.a.
5,785 mg 10 ml
× 1000 µgml = 578,5 µgml
Jadi diperoleh larutan baku induk 578,5 µg ml
Untuk larutan baku konsentrasi 80,99 µg ml, maka dilakukan pengenceran
larutan baku induk dengan dapar fosfat 50 mM pH 6,5. 0,14 ml
1 ml
× 578,5 µgml = 80,99 µgml b. Sampel ekstrak etanol tempe kedelai
Ekstrak etanol tempe kedelai ditimbang 20,14 mg kemudian dilarutkan dalam 2 ml aquades, lalu di adjust dengan dapar fosfat pH 6,5 ad 10 ml.
20,14 mg 10 ml
× 1000 µgml = 2014 µgml
Untuk mendapatkan larutan sampel 20,14 µgml, maka dilakukan
pengenceran sampel dan dilarutkan dengan dapar fosfat 50 mM pH 6,5 ad 10 ml.
1 ml 10 ml
×
2014 µgml = 201,4 µgml Dipipet
=
0,5 ml 5 ml
×
201,4 µgml = 20,14 µgml
H. Data Hasil Uji Aktivitas Hambatan Tirosinase
