10
a. Pembuatan Media Streptococcus Selective Broth SSB
Media cair SSB dibuat dengan komposisi yang dapat dilihat pada Tabel 2, kemudian disuspensikan dalam 1 L akuades. SSB agar dibuat
dengan mensuspensikan 30 gram media SSB dan 15 gram Bacto agar dalam 1 L akuades dan dipanaskan sampai mendidih sambil diaduk, kemudian
diukur pH-nya. pH akhir media sebesar 7.4 ±0.1. Setelah pH-nya memenuhi
syarat, media disterilisasi dengan autoklaf 118ºC selama 15 menit. Tabel 2.
Komposisi Media SSB dalam gL
Komposisi Kadar gL
Pepton kasein Pepton kedelai
Natrium klorida Natrium sitrat
L-Sistin Natrium sulfit
Dekstrosa Natrium azida
Kristal violet 15
5 4
1 0.2
0.2 5
0.2 0.0002
b. Regenerasi Streptococcus mutans
Sebelum digunakan dalam uji aktivitas antibakteri, Streptococcus mutans
yang akan digunakan setiap kali harus diregenerasi. Pembuatan biakan agar miring dilakukan terlebih dahulu, yaitu dengan menggoreskan
biakan dari stok bakteri ke beberapa agar miring yang masih baru. Kemudian diinkubasi pada suhu 37°C selama 48 jam. Setelah 48 jam, biakan
agar miring disimpan pada suhu 4-5°C. Biakan agar miring tersebut dapat dijadikan sebagai stok bakteri untuk menghindari terjadinya kontaminasi.
Dari stok bakteri tersebut, diambil satu mata ose dan diinokulasikan ke tabung reaksi yang berisi 5 mL media SSB steril. Selanjutnya tabung
tersebut diinkubasi di dalam inkubator selama 48 jam pada suhu 37°C.
c. Persiapan Sampel
Sebanyak 0.5 gram gambir dilarutkan dalam 100 ml air panas, kemudian didinginkan. Setelah dingin, larutan gambir tersebut akan
digunakan dalam pengujian aktivitas antibakteri.
11
d. Uji Aktivitas Antibakteri Pratten et al., 1998
Sebanyak 4 ml biakan Streptococcus mutans yang telah disegarkan, diambil dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi steril. Kemudian
ditambahkan sampel dengan perbandingan 1:1, lalu divorteks selama 30 detik. Selanjutnya dibuat pengenceran hingga 10
-6
. Dari masing-masing pengenceran tersebut, diambil 1 ml dan dimasukkan ke dalam cawan petri.
Kemudian SSB agar dituangkan ke dalam cawan petri. Cawan tersebut diinkubasi selama 48 jam pada suhu 37°C dan dihitung jumlah koloni
Streptococcus mutans yang tumbuh pada SSB agar. Jumlah koloni awal
Streptococcus mutans juga dihitung dengan cara yang sama, tetapi tanpa
penambahan sampel. penghambatan = Nt – No x 100
No dimana :
No = jumlah koloni awal = jumlah koloni x 1
faktor pengenceran Nt = jumlah koloni setelah kontak dengan sampel
= jumlah koloni x 1 x 8 faktor pengenceran 4
2. Penelitian Utama
Kategori