11
d. Uji Aktivitas Antibakteri Pratten et al., 1998
Sebanyak 4 ml biakan Streptococcus mutans yang telah disegarkan, diambil dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi steril. Kemudian
ditambahkan sampel dengan perbandingan 1:1, lalu divorteks selama 30 detik. Selanjutnya dibuat pengenceran hingga 10
-6
. Dari masing-masing pengenceran tersebut, diambil 1 ml dan dimasukkan ke dalam cawan petri.
Kemudian SSB agar dituangkan ke dalam cawan petri. Cawan tersebut diinkubasi selama 48 jam pada suhu 37°C dan dihitung jumlah koloni
Streptococcus mutans yang tumbuh pada SSB agar. Jumlah koloni awal
Streptococcus mutans juga dihitung dengan cara yang sama, tetapi tanpa
penambahan sampel. penghambatan = Nt – No x 100
No dimana :
No = jumlah koloni awal = jumlah koloni x 1
faktor pengenceran Nt = jumlah koloni setelah kontak dengan sampel
= jumlah koloni x 1 x 8 faktor pengenceran 4
2. Penelitian Utama
Pada penelitian utama dilakukan pembuatan obat kumur menggunakan gambir yang terbaik dalam menghambat pertumbuhan bakteri Streptococcus
mutans . Karakterisasi obat kumur gambir meliputi pengujian aktivitas
antibakteri, stabilitas obat kumur, serta uji organoleptik. Oleh karena belum adanya standar untuk obat kumur, maka untuk menentukan konsentrasi gambir
terbaik akan digunakan kontrol positif. Kontrol positif yang digunakan adalah obat kumur komersial tanpa alkohol, merek “Pepsodent Herbal Mouthwash”.
a. Pembuatan Obat Kumur Gambir Sagarin dan Gershon, 1972
Pada penelitian ini, pembuatan obat kumur gambir dilakukan dengan mencampurkan gambir yang telah dihaluskan, sakarin, peppermint oil dan
air. Konsentrasi gambir yang dicampurkan pada obat kumur adalah 1, 2,
12 3, 4, dan 5 bv. Untuk mengurangi endapan yang terbentuk pada
obat kumur gambir, maka dilakukan penyaringan dengan menggunakan kertas saring Whattman no. 42. Sampel obat kumur gambir tersebut
kemudian dimasukkan ke dalam botol gelas, ditutup rapat dan disimpan pada suhu ruang.
b. Pengujian Aktivitas Antibakteri dalam Obat Kumur Pratten et al., 1998
Sebanyak 4 ml biakan Streptococcus mutans yang telah disegarkan, diambil dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi steril. Kemudian
ditambahkan sampel obat kumur dengan perbandingan 1:1, lalu divorteks selama 30 detik. Selanjutnya dibuat pengenceran hingga 10
-6
. Dari masing- masing pengenceran tersebut, diambil 1 ml dan dimasukkan ke dalam cawan
petri. Kemudian SSB agar dituangkan ke dalam cawan petri. Cawan tersebut diinkubasi selama 48 jam pada suhu 37°C dan dihitung jumlah koloni
Streptococcus mutans yang tumbuh pada SSB agar tersebut. Jumlah koloni
awal Streptococcus mutans juga dihitung dengan cara yang sama, tetapi tanpa penambahan sampel obat kumur.
penghambatan = Nt – No x 100 No
dimana : No = jumlah koloni awal
= jumlah koloni x 1 faktor pengenceran
Nt = jumlah koloni setelah kontak dengan sampel obat kumur = jumlah koloni x 1 x 8
faktor pengenceran 4
c. Pengujian Stabilitas Obat Kumur Gambir
Pengujian stabilitas obat kumur gambir dilakukan pada minggu ke-0, minggu ke-1, minggu ke-2, minggu ke-3, dan minggu ke-4. Pengujian
stabilitas obat kumur gambir meliputi pengukuran pH, pengukuran viskositas, dan pengujian mikrobiologis total mikroba.
13
1 Pengukuran pH Apriyantono, 1989
Sebelum pengukuran, pH meter dikalibrasi menggunakan larutan Buffer standar pH 4 dan pH 7. Pengukuran dilakukan dengan cara
elektroda dibilas dengan akuades dan dikeringkan dengan kertas tissue. Kemudian elektroda dicelupkan pada larutan sampel dan dibiarkan
beberapa saat sampai diperoleh pembacaan yang stabil, lalu nilai pH dicatat.
2 Pengukuran Viskositas
Viskositas sampel obat kumur diukur dengan menggunakan Brookfield viscometer
. Sebelum pengukuran, alat diset dengan meratakan permukaan pada mata kucing yang terdapat pada alat.
Selanjutnya sampel 100 ml dicelupkan sampai batas spindel yang telah ditetapkan. Viskometer dinyalakan selama
±10 detik, kemudian ditetapkan ukuran dan alat dimatikan. Viskositas dihitung dengan
mengkonversi nilai viskositas yang telah ditetapkan dengan skala pada spindel.
3 Pengujian Total Mikroba Fardiaz, 1987
Sebanyak 1 ml sampel obat kumur dimasukkan ke dalam cawan petri steril. Untuk setiap sampel digunakan dua cawan duplo.
Kemudian media PCA steril yang telah didinginkan hingga suhunya 47- 50°C dituang ke dalam cawan sebanyak 10-15 ml dan digoyangkan
secara mendatar di atas meja supaya sampel menyebar rata. Cawan berisi agar yang telah membeku diinkubasi dengan posisi terbalik pada suhu
30°C selama 48 jam. Total mikroba ditetapkan dengan SPC Standard Plate Count
. Cara penghitungan koloni dalam Standard Plate Count SPC adalah : Rahayu et al, 2001
• Cawan yang dipilih dan dihitung adalah yang mengandung jumlah koloni antara 30 sampai 300
• Beberapa koloni yang bergabung menjadi satu merupakan suatu kumpulan koloni yang besar dimana jumlah koloninya diragukan,
dapat dihitung sebagai satu koloni
14 • Suatu deretan rantai koloni yang terlihat sebagai suatu garis tebal
dihitung sebagai satu koloni
d. Uji Organoleptik Soekarto, 1990
Kategori