Pengumpulan Spesimen Penanaman Candida spp Penghitungan koloni Candida spp

3.7 Prosedur Penelitian 3.7.1 Pengisian Kuesioner Penelitian dilakukan terhadap lansia yang memakai gigitiruan penuh pada maksila dan yang tidak memakai gigitiruan. Pemilihan subjek dilakukan melalui wawancara langsung mengenai identitas subjek dengan bantuan kuesioner. Subjek yang terpilih diberi penjelasan terlebih dahulu mengenai tujuan, manfaat dan prosedur penelitian yang akan dilakukan dan apabila subjek bersedia untuk berpartisipasi dalam penelitian maka subjek diminta menandatangani informed consent.

3.7.2 Pengumpulan Spesimen

Pengumpulan spesimen dilakukan dengan metode swab. Sebelum dilakukan swab, subjek yang memakai gigitiruan diminta untuk melepaskan gigitiruannya dan berkumur dengan air putih. Setelah itu subjek di instruksikan untuk duduk tenang dan membuka mulut, ambil kapas lidi yang steril dan dilakukan swab pada permukaan palatum, kemudian kapas lidi ditempatkan di tabung steril yang berisi 5 ml larutan Nutrient broth media transport. Setelah itu botol yang berisi spesimen diberi label dan disusun kedalam cooler box dan dibawa ke Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Kedokteran USU untuk dilakukan penghitungan jumlah koloni Candida spp. Gambar 5. Pengambilan spesimen dengan menggunakan metode swab dokumentasi Universitas Sumatera Utara

3.7.3 Penanaman Candida spp

Prosedur diawali dengan mengambil tabung yang telah berisi hasil swab lalu divibrasi selama 1 menit dengan kecepatan 1500 rpm agar terbentuk suspensi yang merata. Kemudian ambil spesimen menggunakan ose disposable lalu dikultur pada media Sabouraud Dextrosa Agar, pengkulturan dilakukan di dalam Biological Safety Cabinet agar tidak terkontaminasi. Kemudian di inkubasi dalam inkubator pada suhu 37 o C selama 48 jam. Koloni di identifikasi sebagai Candida spp bila berbentuk bulat dengan permukaan sedikit cembung, halus, licin, dengan warna putih kekuningan dan berbau asam seperti aroma ragi. Gambar 6. Prosedur penanaman Candida spp. A sampel di vibrasi dengan kecepatan 1500 rpm, B pengambilan spesimen menggunakan ose disposable, C penanaman pada media SDA dokumentasi.

3.7.4 Penghitungan koloni Candida spp

1. Penghitungan koloni Candida spp dilakukan dengan membagi cawan petri menjadi empat kuadran. 2. Koloni yang timbul ditandai dengan spidol. 3. Koloni pada masing-masing kuadran dihitung. 4. Jumlahkan koloni pada keempat kuadran CFUml A B C Universitas Sumatera Utara

3.8 Pengolahan dan Analisis Data