Pengukuran intensitas warna dengan chromameter CR-300
nitrogen pada suhu ruang. Residu yang tertinggal dalam vial kemudian dilarutkan dengan 200 μL standar PAH campuran BAP dan DBA dengan konsentrasi
2.5 µgmL, lalu dianalisis kandungan PAH-nya dengan HPLC-MWD.
Penentuan konsentrasi komponen PAH dengan menggunakan HPLC-UV
Penentuan jumlah PAH dilakukan dengan menggunakan HPLC Agilent 1200 series dengan detektor MWD yang diset pada panjang gelombang UV.
Analisis dilakukan secara isokratik mengikuti kondisi pada Tabel 5. Luas area yang digunakan untuk perhitungan kandungan PAH dalam
sampel adalah selisih dari luas area yang terbaca pada sampel dengan luas area yang terbaca pada standar PAH campuran BAP dan DBA 2.5 µgmL.
Luas area ini kemudian dimasukkan ke dalam persamaan dari kurva standar hasil injeksi
berbagai konsentrasi standar PAH. Kandungan PAH baik BAP maupun DBA µgg sampel dihitung dengan menggunakan rumus berikut:
gmL standar
kurva dari
PAH g
ampel berat
mL 2
. sampel
gg sampel
dalam PAH
kandungan
s
Tabel 5 Kondisi analisis PAH dengan HPLC-UV
Kriteria Kondisi
Kolom C18 ODS, ukuran partikel 5
μm, panjang 15 cm, diameter dalam 4.6 mm
Suhu running Suhu ruang
Fase gerak Asetonitril-aquades MilliQ 80:20, vv, isokratik
Laju aliran fase gerak 1.0 mLmenit
Deteksi UV 280 nm
Sampel loop 20 μL
Daging dibakar dengan formula bumbu, lama, dan jarak pemanasan
menurut rancangan RSM Pisahkan Daging
Sampel dari Tulang Homogenisasi
dengan Food Processor
Ambil 1 g daging
Campurkan dengan 1 mL
NaOH 1 M
Tambahkan dengan Ekstrelut 1.75 g
Masukkan ke dalam Kolom PRS dengan
kapasitas 6 mL
Fraksi PAH diuapkan dengan N
2
Elusi dengan 12 mL Diklorometan: Toluen 5
Larutkan dengan 1 mL n-heksana
Masukkan dalam kolom berisi Silika
gel teraktivasi Elusi dengan 10 mL
n-heksana : diklorometan 60 : 40
PAH diuapkan dengan N
2
Larutkan dalam 1 mL acetonitril Uapkan acetonitril dengan N
2
Larutkan dalam 200 µL standar PAH 2.5 µgmL
Analisis [PAH] dengan HPLC-UV
Gambar 5 Diagram alir ekstraksi PAH dari sampel daging modifikasi Janoszka et al. 2004
27